【doc】清金得生片抗肿瘤作用的实验研究

【doc】清金得生片抗肿瘤作用的实验研究 清金得生片抗肿瘤作用的实验研究 广州中医药大学 460JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 文章编号:1007—3213(2004)06一O46O—O3 2OO4年11月第2l卷第6期 November2004.Vo1.21.No.6 清金得生片抗肿瘤作用的实验研究 戴馨仪,陈林香,周岱翰,陈雪馨,陈瑶 (广州中医药大学中医肿瘤研究所,广州510405) 摘要:【目的】观察中药复方清金得生片(清金片)的抗肿瘤作用.【方法】复制C57小鼠Lewis肺癌模型,以替加氟片( 207)为阳性对照药(O.2g/kg),观察清金片高,中,低剂量(3.15,1.o5,O.35g/kg)组的抑瘤率;复制NIH小鼠艾氏腹 水癌(EAC)模型,观察清金片各剂量组的生存时间和生命延长率;以8g/kg清金片灌胃SD大鼠,制备含药血清,采用体 外培养与四甲基偶氮唑盐(MTY)法,观察体积分数为10%,20%,30%的清金片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)生长 的抑制作用;观察清金片各剂量组对肉瘤180(s】80)荷瘤小鼠二甲苯致炎的耳肿胀度,以及腹水瘤荷瘤小鼠气管内酚红 排出量的影响.【结果】清金片高,中,低剂量组在抑制小鼠Lewis肺癌生长方面作用与fTr一207相仿,延长EAC荷瘤小鼠 的存活时间和生命延长率的作用优于Fr一207,高剂量组在减少二甲苯所致小鼠耳肿胀方面作用与fTr一207及阿斯匹林相 似,而在促进荷瘤小鼠气管内酚红排出量方面的作用优于171"-207而与溴已新片相仿;清金片各浓度含药血清均能抑制LAC 的生长,其作用与模型组比较均有显着性差异(P<O.05或P<O.O1),且均呈现 剂量效应关系.【结论】清金得生片对原 发性支气管肺癌及转移性肺癌有抑瘤,抗炎,祛痰作用.其作用总体与化疗药fTr一 207相似,但在延长荷瘤小鼠的存活时 间方面优于fTr一2o7. 关键词:清金得生片/药理学;肿瘤/中药疗法;疾病模型,动物 中图分类号:R285.5文献标识码:A 清金得生片由西洋参,绞股蓝,麦冬,黄柏, 蟾酥,山慈菇等药组成,具有清肺解毒,扶正消瘤 的功效,主治原发性支气管肺癌及转移性肺癌.为' 了进一步探讨该方剂药物效应,进行了如下研究: 1买验 1.1药物清金得生片(简称清金片),每片含生 药0.3g,由广州中医药大学第一附属医院制药厂 加工,实验时用蒸馏水配制成所需浓度;替加氟片 (Fr-207),济南制药厂产品,批号:20010505;阿 司匹林肠溶片,徐州制药厂产品,批号: 20011202;盐酸溴已新片(必嗽平),广州市桥制 药厂产品,批号:011101. 1.2动物C57系小鼠300只,l8,22g,雌雄各 半,均由第一军医大学实验动物中心提供,合格证 为:粤检证字第2002A038号;N1H小鼠392只,18 , 25g,SD大鼠27只,220,260g,雌雄各半,由 广州中医药大学实验动物中心提供,合格证为:粤 检证字第2003A007号,2003A010号. 1.3瘤株Lewis肿癌,艾氏腹水癌(EAC),肉瘤 180(Sl80),H22腹水瘤瘤株,均由中山医科大学肿 收稿日期:2004—0l一02 作者简介:戴馨仪(1948一),女,主管技师 基金项目:国家中医药管理局科研基金课题(编号:9721l1) 瘤研究所提供,我所移植传代;人肺腺癌细胞株 (LAC)由广州军区总医院分子肿瘤学研究所细胞 室提供. 1.4试剂RPMI一1640培养液为GIBCO公司产品; 四甲基偶氮唑盐(MTI")为FIUKA公司产品;胎牛 血清(FCS)系中国医学院血液学研究所产品. 2方法与结果 2.1对小鼠移植瘤Lewis肺癌的抑制作用取C钉 系小鼠,于右前腋皮下接种Lewis肺癌细胞悬液 0.2mL(约1×lO6,2×lO6个瘤细胞)…;次日随 机分为5组,分别为模型组,Fr-207组(0.2g/ kg),清金片高,中,低剂量组(3.15,1.05,0.35 g/kg),每组60只;分别按各组剂量灌胃给药,每 日1次,连续10d,停药后次日处死小鼠,剥瘤称 质量,计算抑瘤率,结果显示:清金片对Lewis肺 癌的生长有一定的抑制作用,与模型组比较具有显 着性差异,并呈剂量效应关系.结果见表1. 2.2对艾氏腹水癌(EAC)的抑制作用取NIH 小鼠,予腹腔常规接种EAC腹水0.2mL(约1× lO6,2×lO6个瘤细胞)…,次日随机分为5组,分 第6期戴馨仪,等.清金得生片抗肿瘤作用的实验研究461 组及给药剂量同2.1.停药后次日称体质量,观察 并小鼠生存天数(d),取平均值比较组问差 异,计算生命延长率:p生命延长=(治疗组生存/ ,对照绢牛存一1)×100%,并进行显着性检验.结果 表明:给药组生存时间均长于模型组,清金片各剂 量组生存时间均长于FT.207组(P<0.01或P< 0.001),且清金片组呈剂量效应关系;清金片各剂 量组生命延长率均高于vr.207组,结果见表2. 2.3对人肺腺癌细胞株(LAC)生长的抑制作用 采用中药血清药理学试验方法l2J 2.3.1动物含药血清的制备SD大鼠以8g/kg清 金片灌胃给药(灌药前禁食不禁水12h),每天1 次,连续3d;末次给药后2h,以相同剂量重复给 药1次,lh后乙醚麻醉,心脏取血,无菌分离血 清即为含药血清.阳性对照用灌胃FI".207(0.2 g/)的大鼠血清,阴性对照用灌胃生理盐水的大 鼠血清,l临用前加入RPMI.1640培养液调成所需浓 度供实验用. 2.3.2肿瘤细胞悬液的制备培养与MTr显色法 将冻存的LAC按常规方法复苏,接种于含体积分 数为15%FCS的RPMI.1640培养液的50mL培养瓶 中,传代培养,至细胞呈指数生长期时,弃培养 液,加入2.5g/L胰蛋白酶和0.2g/L乙二胺四乙酸 消化液37?消化2,5min,离心弃上清,重悬细胞 于含体积分数为15%FCS的RPMI.1640培养液中, 台盼兰染色,活细胞计数,调细胞数为2×108/L, 接种于96孔培养板中(用前紫外线30cm照射2 h),每孔lO0,设3复孔.置于含体积分数为 5%cch的37?培养箱培养24h,至细胞生长旺盛 后,分别加入体积分数为10%,20%,30%的清金 片含药血清培养液各100ttL,另设含Fr.207及生 理盐水血清的对照组,继续培养24,72h,于结束 前4h,每孔吸去20上清液,加入20浓度为 5g/L的MTY,继续培养4h,加入十二烷基硫酸钠 (SDS),以200g/L的浓度溶解于体积分数为5O%的 二甲基甲酰胺(DMF)缓冲液100中,微型混合 器振荡l0min,于酶联仪波长57011131处测各孔吸光 度值(D),按下列公式计算抑瘤率:p抑瘤率:(1一 D含药血清孔/D对照孔)×100%.结果显示:清金片含药 血清对LAC生长的抑制与药物浓度及作用时间呈一 定的依赖关系,其中体积分数为30%的含药血清作 用72h的抑瘤作用显着(32.71%),结果见表3. 2.4对荷瘤小鼠耳廓二甲苯致炎的作用…选用 NHt小鼠,体质量22,25g,雌雄各半,于右前腋 皮下常规接种5180瘤细胞悬液0.2mL,次日随机分 6组,分组与给药方法除增设阿斯匹林对照组 (0.1g/kg)外,其余同2.1,每天1次,连续l0d; 末次灌胃给药lh后每只小鼠右耳滴0.02mL二甲 苯,3,4h后处死,用打孔器摘取小鼠双耳片,称 得两耳片质量之差值,即耳肿胀度.结果显示,清 金片高,中,低剂量均能减少二甲苯所致的耳肿 胀,3组耳肿胀度与模型组比较均有显着性差异 (P<0.05或P<0.01).但中剂量组和低剂量组均 未达到FT.207组和阿斯匹林组水平.结果见表4. 2.5对荷瘤小鼠气管内酚红排出量的影响llJ选 取体质量20,25g雄性NIH系小鼠,每鼠于右前腋 皮下常规接种H22腹水瘤细胞0.2mL(约l×lO5瘤 细胞)…;次日随机分为6组,分组与给药方法除 增加溴已新片对照组(0.2g/kg)外,其余同2.1, 每天1次,连续10d;末次给药60min后,小鼠腹 腔注射25g/L酚红液5g/kg,30min后,处死小鼠, 取1.0em长气管段,剥除周围组织,放人2mL生 理盐水中,振荡30min后,丢弃气管段;每份标本 液加lmol/LNaOH0.2mL,在波长546Flnl处,测 量其D值,与酚红曲线比较,求酚红含量. 结果显示,清金片高,中,低剂量组均能促进荷瘤 小鼠气管内酚红排出量,与模型组比较,具有显着 性差异(P<0.0l或P<0.001),作用优于兀'. 207,而与溴已新片相仿.结果见表5. 表1各组对小鼠移植瘤Lewis肺癌的抑制作用 Table1InhibitoryeffectofQDTontransplanted Lewispulmonarycarcinomaindifferentgroups(x?s) Groups?mf./gP.nh.b."/% *与模型组比较(modelgroup)P<O.05,**P<O.01. ***P<O.001;?与F1"-207组比较(FF-207group)P<O.05, ??P<0.01,???P<0.001(下同) 表2各组对荷瘤(EAC)小鼠存活时间的影响 Table2EffectofQDTonsurvivaltimeinmicewithEAc indifferentgroups(i4-s) f一/dp/% 清金高剂量组(1】igh-d0seQD.r)4020.554-3.36…50.77 清金中剂量组(?der龇d0seQD.r)4019.784-3.55…45.12 清金低剂量组(1ow-d0se)40l8.78?2.74…37.78 Fr-2o7组(兀卸)?l5.55?3.5514.09 模型组(IrDdd)4013.63?1.75 表4清金片对Sl8o荷瘤小鼠耳廓二甲苯致炎的作用 Table4EffectofQDTOI3xylene-indLOSdinflammation inmice(----.s) #与阿司匹林组比较(tlsaspiringroup)P<O.05 表5清金片对卜荷瘤小鼠气管内酚红排出量的影响 Table5EffectofQDTonbronchialphenolexcretion(?s) ?与溴已新片组比较(tlsbromhexinegroup)P<O.05 3讨论 祖国医学认为,正气内虚,瘤毒内侵,是肿瘤 发生和发展的主要原因;扶正固本,解毒化瘀,祛 除毒结是消除癌瘤的重要措施.清金得生片正是遵 循这一治疗原则而制定的中药方剂,以西洋参,麦 冬,绞股蓝,蟾酥,黄柏,山慈菇等中药组成,既 能补益正气,扶正固本,又能清热解毒,化瘀散 结,故能促进机体正气恢复,抑制肿瘤生长.本实 ,低剂量组对 验结果表明:清金得生片高,中 Lewis肺癌,EAC,LAC的生长均有一定的抑制作 用,与Ff-207组相仿,而延长EAC小鼠存活时间, 作用则优于化疗药Ff-207组.血清药理学结果表 明,清金片含药血清对LAC生长的抑制与药物浓 度,作用时间呈正相关关系,尤以8g/kg,体积分 数为30%的含药血清作用72h的抑瘤率为佳 (32.71%),作用与Ff-207相仿.表明清金得生片 有确切的抑瘤作用. 肺癌患者由于癌细胞在肺内不断繁殖滋生,造 成占位效应,对周围的正常肺泡组织构成压迫和损 伤,必然会导致炎症反应和分泌物增多,造成气道 阻滞或不通,出现咳喘,痰多等呼吸障碍症状.因 此,抑制炎症反应,促进排痰,改善通气障碍是治 疗的必要措施.本文对荷瘤动物二甲苯致炎作用的 实验结果表明,清金片高剂量组的抗炎作用与 207以及阿斯匹林的抗炎效果相似.对荷瘤动物气 管内酚红排出量试验结果表明,清金片组作用与溴 已新片组相仿而优于vr一207组(P<0.05),且呈 现剂量效应关系.说明清金片有明显的排痰功能, 对促进肺癌占位压迫及病灶周围所致的分泌物的消 除,及改善肺癌病人的通气障碍有一定的作用.以 往的研究表明:清金得生片能提高荷瘤小鼠外周血 T,卟淋巴细胞数,纠正Th/Ts的异常比值,拮抗 化疗药vr一207对此类细胞的抑制作用,提高NK细 胞的活性_3J,说明本药对免疫器官具有保护作用, 使受抑制的免疫功能提高,本研究所显示该药的抑 瘤,抗炎,排痰作用的机理可能与此有关. 参考文献: [1]徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民 卫生出版社,1994.1423,1432,719,1165. [2]李义奎.中药血清药理学实验方法的若干问题[J].中药新药 与临床药理,1999,10(2):95. [3]戴馨仪,陈林香,周岱翰.清金得生片抗肿瘤机理研究[J]. 中药新药与临床药理,2002,13(6):360. (英文摘要见465页) 第6期徐发彬,等.通列舒胶囊对大鼠非细菌性前列腺炎模型的影响465 TherapeuticEffectofTonglieshucapsulesforNonbacterialProstatitis xuFabin,FANGYong,LIHongie,XIEJianxing (Dept.ofSurgery,theFirstAtlihatedHospital,GuangzhouUniversityofTCM,Gnangzhou510405,China) Abstract:【Objective】 ToinvestigatethetherapeuticeffectofTongl&shucapsules(mainlycomposedofRadix Linderae.SemenLitchi,SemenVaccariae,RhizomaCorydalis,RhizomaSparganii,RhizomaCurcumae,Herba Taraxaci,etc.)fornonbacterialprostatitis.【Methods】 FortysDratswererandomizedto4groups:normalcontrolgroup (groupA),modelgroup(groupB),Q/an//etonggroup(groupC)andTonglieshuCapsules(groupD).Exceptthosein groupA,ratsinothergroupswereinjectedwithXiaozhilingInjectiondirectlyintotheprostati cglandstoestablish nonbacterialprostatitis.AftertreatmentwithTonglieshucapsulesfor4weeks,whitebloodcellscounting,densityof lecithincorpuscleandinflammatorycellsinfiltratingintointerstitiumandglandularlumenofprostatictissueswere observed.【Results】 WBCcountingwasdecreasedanddensityoflecithincorpuscleincreasedingroupD(P<0.O1 comparedwithmodelgroup)andtheeffectswerebetterthanthoseingroupC(P<0.05);prostaticinflammatorycells infiltrationwasobviouslydecreasedingroupDbutstillhigherthanthenormallevelanddidnotdifferfromthatingroup C(P>0.05).【Conclusion】 TonglieshucapsuleshasaneffectintreatingchronicprostatitisbydecreasingtheWBC counting,reducinginfiltrationofinflammatorycellsandincreasingthedensityoflecithincorpuscleinprostatictissues. Keywords:PROSTATICDISEASE/TCDtherapy;TONGLIESHUCAPSULES~therapeuticuse; PROSTATICDISEASE/pathology;DISEASEMODELS,ANIMAL;RA (Continuedfrompage462) ExperimentalStudiesonAntitumorActionofQingfinDeshengTablets DM,CHENLinxiang,ZHOUDaihan,CHENXuexin,CHENYao (TumorInstitute,theFirstAffiliatedHospital,GuangzhouUniversityofTCM,Guangzhou510405,China) Abstract:【Objective】Toinvestigatetheanti— tumoreffectofQingjinDeshengtablets(QDT).【Methods】C57mice modelsofLewispulmonarycarcinomawereestablishedtoobservedthetumor-inhibitoryrateofQDTinthreedoses (3.15,1.05and0.35g/kgrespectively);theanti— tumoreffectofQDTwascomparedwiththatoftegafur(FT-207) tablets.NIHmicemodelsofEhrlichascitescarcinoma(EAC)wereestablishedtoobservetheeffectofQDTonsurvival timeandlife— prolongationrate.SDratswerevenQDT8g/kgbygastricinjectionandthensenllncontainedQDTwas premrod.In— vitroinhibitoryeffectofsenllncontainedQDT(atvolumepercentagesof10%,20%and30% respectively)onhumanlungadenocarcinoma(LA)celllinewasobservedbythiazolylbluecolorimetry(MTT).E0fectsof QDTonxylene— inducedauricularswellinginSl80transplantedmice,aswellaseffectsoil_bronchialphenolredexcretion inI-I=transplantedmice,wereassayed.【Results】Theeffectsofthree— doseQDTininhibitingthegrowthofmiceLewis pulmonarycarcinomaweresimilartothoseofFI1— 207butbetterthanthoseofFr-207inprolongingthesurvivaltimeand life-prolongationrateinEACmice.High— doseQDTwassuperiortoFr-207indecreasingxylene—inducedauricular swellingandinincreasingtheexcretionofbronchialphenolredintumor-transplantedmice:however,itseffectswere similartothoseofbromhexine.Theeffectofsel"tlmcontainedQDTatdifferentconcentrationsdifferedfromthatinmodel groupininhibitingthegrowthofLAcellline(P<0.05orP<0.01),theeffectbeinginadose—effectmanner. 【Conclusion】QDThasantitumor,anti— inflammationandexpectorantactiononprimarybronchialcarcinomacarcinoma andmetastaticpulmonarycarcinoma;itseffectissimilartoFT一 207butisbetterinprolongingthesurvivaltimeoftumor— transplantedmice. Keywords:QINGJINDESHEGTABL/pharmacology;NEOPLASMS/TCDtherapy; DISEASEMODELS.ANIMAL