四氮唑蓝比色法测定血清糖化白蛋白

四氮唑蓝比色法测定血清糖化白蛋白 0.84=1: 0.29mmo|/L,136制糖尿病人为1.52:/:0.55mmol/L.P<0.001.采用法制定基末参敷,不擅可以删定 血清糖化白蛋白,而且还可同时测定糖化血清蛋白.简单秀抒,是糖尿病监控和筛选的有用柱标. 关镀调苎兰兰苎皇兰旦糖化血清蛋白豪乙:醇,b参!纠霆 血清糖化白蛋白(GA)测定曾报道采用 亲和色谱微柱法,操作繁镇费时,不能用于 自动化.根据Mashiha”等报道,用聚乙 二醇沉淀血清球蛋白,吸取上清液,用四氮 唑蓝(NBT)比色法在自动生化分析仪进行 GA测定,方法简单易行. 1材料与方法 1.1试剂0.11mmol/LNBT显色剂:氯 化硝基四氮唑蓝,以pH10.8碳酸钠盐缓冲 液配制4.0mmol/L标准液:1一脱氧吗啉果 糖(DMF)为标准品,用含40g/L牛血清白 蛋白生理盐水配制.聚乙二醇(PEG)6000. 1.2仪器COBASMIRA全自动生化分 析仪. 1.3方法500v.1血清加入50ragPEG,振 摇促使球蛋白沉淀,离心3000Xg5min,吸 取上清液.测定基本参数:二点法,渡长550 nm.样本量1O,试剂量300,温度3TC, 标准液浓度4.0mmol/L,延滞时间5min, 读数时间15min. 2结果 2.1标准曲线因牛血清白蛋白也可与 NBT起反应,为消除其影响因素.在仪器启 动前先按40g/L牛血清白蛋白溶液与 NBT试剂1:30的量混匀,做完空白管后, 立即取出,换入NBT显示剂做标准曲线.标 准液浓度为1.0.2.0.4.0,6.0mmol/L,按 本文选定的工作条件得标准曲线直线方程为 Y一25.46x一3.54,r=0.9965,x表示吸光 度,y为GA浓度,线性范围O,6mmol/L. 2.2PEG分离效果3O份血清标本,加入 PEG前和加入PEG后,分别测其血清白蛋 白浓度得直线方程Y=0.88X一0.03,r一 0,984,x表示加入PEG前白蛋白浓度,y表 示加入PEG后白蛋白浓度.与原着Mashiba 等报道的Y=O.92x一0.01,r一0.992基 本一致选择几份血清标本,经蛋白电泳光 密度扫描,可见加入PEG后,大部份:,B和 7球蛋白被PEG所沉淀. 2.3血清糖化蛋白的还原活性用糖尿病 人血清加入PEG前后进行蛋白电泳,浸泡于 pill0.8含5.0mmol/LNBT碳酸盐缓冲液 中,过夜,可见未加PEG的血清,主要是白 蛋白和P球蛋白显色,而加入PEG分离后, 仅仅观察到只有白蛋白有还原活性. 2.4回收试验在一份已知GA含量的血 清中加入1.0和2.0mmol/LDMF,测得其 回收率为97.2和105.4 2.5重复性试验取新鲜混合血清重复测 定.n一10,批内CV3.2%.批闻7.4. 2.6正常参考范围测定健康体检的血清 样品186例,GA(三士s)为0.84士0.29 mmol/L. 2.7I临床应用正常对照组为健康体检人 临床检验杂志1997年第15卷第3期 群,糖尿病组均是我院确诊的病人.在测定 基本参数不变情况下,直接吸取血清标本,亦 可测定糖化血清蛋白(GsP)含量,结果比较 见表1,两组各指标相比,尸均<O.001. 附裹正常组与糖尿病组结果(;土, mmol/L) 分组GAGIUGSP 筻垦塑望塑:i主!::!圭:!:!主!:坠 3讨论 糖化蛋白是由蛋白质中的赖氮酸残基与 葡萄糖非酶缩合形成,在人体内血清蛋白能 与葡萄糖不断结合,并随血糖浓度的变化而 变化.糖化蛋白质中大部分是糖化白蛋白,所 以GSP测定主要是反映糖化白蛋白的还原 活性.但由于部份球蛋白也可披糖化,此外 如p一脂蛋白.,Ig—A.等其他蛋白对NBT 也有很大的还原活性,这些蛋白对GSP测定 值有很大影响.血清加入PEG后,离心使其 排除,这是一种简单易行测定GA的方法. 临床常用测定糖化蛋白的项目是 HbA,GSP及GA的测定,由于血红蛋白, 血清蛋白,血清白蛋白的半衰期各不相同,因 此其临床意义不同,各反映不同时期血糖控 制的情况,它们相互补充,互为参考,但不 能替代.GA的测定更直接反映糖尿病较近 斯的平均血糖浓度,医师可及时地估计糖尿 病较近期的治疗效果,是临床监护糖尿病一 个很有意义的指标 糖化蛋白与四氮唑蓝的反应过程受 NBT浓度,样本与试剂量比例,碳酸盐缓冲 液pH值,反应时间等因素影响.为选择最佳 反应条件,采用正交试验L(3’)对3个水 平4个位级进行试验性探讨,优选出本文所 采用的几个基本参数其中NBT浓度和碳 酸盐缓冲液pH值与文献”所报道的基本一 致.在基本参数不变的情况下,同时j曼I得 GSP,其正常范围为1.82士0.29mmol/L,与 文献”所报道的1.905:0.25mmol/L基本 一 致.本法的GA正常参考范围0.84士0.29 mmol/U与原着Mashiba等报道191.0士 15.7~mol/L相差甚远,主要原因是几个测 定基本参数大不相同所致la- tntngly~tedpoprO托i8[ragtosami~e levelinseru~ChempharmBul1.19Q1,39’2149 3SivasA,U呻1T,OzH.Effect.f[gAlightehBin0n ?tntrttn0fftuc七ostmnserum.C1Chem, 1990.36’1386 4叶应妩,王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京: 东南大学出皈杜1991t157 (1996一O9—17收稿.1997一D317修回) (陈维忠编发) 天津海鹰光电设备技术有限公司 热敏打印:用于尿液分析仪的10点热敏打印片,确保检验8000人次.7,9,20点热敏 打印头打印清晰,工作可靠.各种进口微型热敏打印机可用于尿分仪,生化仪等仪器. 公司地址:天津市南开区红旗路航天遭68号 邮政编码:300192 联系电话:OZ2—3368007,3615427图文传真:022—3368007 联系人:市场部