硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的抑制作用

硝普钠对冰冻血小板面CD62分子表达的抑制作用 硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的 抑制作用 的影响,短链(甲基)优于长链(丙基).在对糖基取代基的 研究发现,半乳糖取代基作用最强,葡萄糖与甘露糖作用相 近.化合物1,2,6,7与8结果提示,半乳糖苷的抗OH?作 用超过葡萄糖苷和甘露糖苷. 3.2化学物结构对清除0的影响 化合物1与2,6与7的结果提示,苯环上羟基取代基的 位置可以影响化合物的清除氧自由基(02:)活性,取代基在 3位上的化合物的作用强于4位上的化合物.从受试化合物 3与4结果,提示苯环上碳链的长短对化合物的清除氧自由 基有影响,短链(甲基)优于长链(丙基).但两个化合物上 未有羟基取代基,与受试化合物5相比,清除氧自由基的能 力较弱,所以我们认为羟基取代基可以增强化合物的抗氧自 由基的作用,但由于此三个化合物的抗氧自由基作用均较弱 (低于红景天苷),在化合物的结构改造方面应该放弃这方面 的思路.在对糖基取代基的研究发现,半乳糖取代基作用最 强,葡萄糖次之,甘露糖作用最差.受试化合物1,6与8,2 与7结果提示,半乳糖苷的抗氧自由基作用均超过葡萄糖 苷.从本研究的8个化合物中,认为1-(3-羟基)苯乙基1B-D- 吡喃半乳糖苷抗氧自由基的作用为最强. 3.3影响该类型化合物清除OH?和0能力的因素 从本实验的结果可以认为影响因素包括:苯环上羟基的 引入,羟基的位置,苯环与糖之间碳链的长短,以及所连接的 糖的类型;综合本实验结果,提示糖基对化合物清除OH?和 0作用的影响最大.下一步深入研究的目的,就是要从所 获得的初步研究信息人手,有针对性地进一步合成系列化合 物,进行活性试验,以确定其构效关系,最终筛选抗自由基活 性最强的目标化合物,为新药研究奠定基础. 参考文献 [1]崔剑,李兆陇,洪啸吟.自由基生物抗氧化与疾病[J].清华大 学(自然科学版),2000,40(6):9. [2]徐宝军,郑毅男,李向高.红景天属植物研究新进展[J].中药 材,2000,23(9):580. [3]石力夫,蔡溱,曹颖瑛,等.中药女贞子的化学成分及其药理作 用[J].药学实践杂志,1997,15(4):197. [4]叶于聪,陈钦铭,金凯平,等.红景天苷对培养心肌细胞缺氧后 再给氧损伤后的影响[J].中国药理,1993,14(5):424. 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[8]陈士明,陆亚蒙,严小敏,等.超氧阴离子自由基的产生与天 然药物的作用[J].复旦(自然版),1991,30(1):32. 收稿日期:2003-ll-2l 硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的抑制作用 洪俊,徐洪卫,姚锦炎,王浦南(无锡市中心血站,江苏无锡,214021) 摘要:目的了解硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的抑制作用.方法采用藻红素标记的抗CD62单抗,经流式细胞 仪血小板表面CD62分子表达的水平.结果浓缩血小板在含2%DMSO及501.tmol/LSNP的条件下经一80?冰冻保存 一 周后,CD62分子表达较2%DMSO组明显降低(P<0.01),与5%DMSO组接近 (P>0.05).结论硝普钠可抑制冰冻血小 板表面CD62分子的表达. 关键词:冰冻血小板;硝普钠;二甲基亚砜;CI)62;抑制作用 中图分类号:R972.4文献标识码:A文章编号:1007-7693(2005)02-0116-03 TheinhibitoryeffectofsodiumnitroprussideontheexpressionofCD62onthesurfaceofcryopreserved platelets HONGJun,XUHong-wei,YAOJin-yan,WANGPu-nan(WuaciBloodCenter,Wuxi214021,China) ABSTRACT:OBJECTIVEToinvestigatetheinhibitoryeffectofsodiumnitroprusside(SNP)ontheexpressionofCD62onthesur- faceofcryopreservedplatelet.METHODPhycoerythrin-labledmonoclonalantibodytohumanplateletCD62WaSusedtomeasurethe expressionoftheCD62ontheplateletsurfacebyflowcytometry.RESULTSComparedtoplateletscryopreservedwith2%DMSOa- lone.plateletscryopreservedat-80~Cforaweekinthepresenceof2%DMSOand50IxMSNPshowedsignificantlylowerlevelofex— pressionofCD62.withnosignificantdifferencefromthosecryopreservedwith5%DMSO.CONCLUSIONSodiumnitroprussideCan ' 116'ChinJMAP,2005April,V01.22No.2中国现代应用药擎杂志2005年4月第22卷 第2期 inhibittheexpressionofCD62onthesurfaceofcryopreservedplatelets. KEYWORDS:cryopreservedplatelets;sodiumnitroprusside(SNP);dimethylsulfoxide(DMSO);CD62;inhibitoryeffect 血小板制剂可用来治疗各种原因引起的血小板减少症, 在临床治疗中发挥着十分重要的作用.随着临床治疗技术 的发展.血小板的临床用量也呈逐年上升趋势.由于血小板 寿命短,结构,功能受多因素影响,如何在长期保存过程中保 持血小板的数量及功能,一直是输血医学的研究课题.从20 世纪70年代开始,人们已尝试用低温冰冻方法保存血小板. 选用的低温保护剂主要有甘油,DMSO.考虑到甘油洗脱较 困难,而DMSO则较易进入细胞,并易从细胞中除去,因而趋 向使用DMSO. 血小板的贮存损伤主要是由于血小板在体外发生了活 化,在体内血小板的活化则受到第二信使系统的抑制.硝普 钠在临床上常规用于解除高血压危象,高血压脑病出血,急 性血管球性肾炎等.硝普钠可刺激cAMP.cGMP的生成…. Connor等向4~C液体保存的血小板中加入含硝普钠的第 二信使效应剂混合物.使血小板在4~C保存至9d时的各种功 能活性均不亚于22~C保存了5d的血小板.本实验初步观察 了硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的抑制作用.为 开展低浓度DMSO冰冻保存血小板研究提供实验依据. 1材料和方法 1.1药品与试剂 藻红素(PE)标记抗CD62单抗;PE标记的鼠IgG1 (Pharmingen公司);硝普钠(Sodiumnitropmsside.SNP.北京 双鹤现代医药技术有限责任公司,批号:00042027);DMSO (MERCK公司) 1.2仪器 J一6M低温离心机(Beckman公司);EpicsXL流式细胞 仪(Coulter公司). 1.3全血采集 用ACD—B抗凝的四联袋采集200mL全血.在制备PC 前.静置于室温1h. 1.4白膜回浆法制备浓缩血小板] 将采后1h的全血进行离心(3000r/min,10min,22?), 把血浆,白膜层分别挤入不同的卫星袋中,再将红细胞保存 液转移到压积红细胞中制成晶体盐红细胞悬液,然后将大约 25—30mL血浆挤入白膜中.将白膜置于血小板保存装置中 振荡保存1.5—2h,然后将白膜进行轻离心(1000r/min, 7min,22~C),上清挤入空袋,即制成浓缩血小板. 1.5实验分组 将同一献血者来源的浓缩血小板分成4份,每份5mL. 分别作为新鲜组,5%DMSO组,2%DMSO组,2%DMSO+ 50p~mol/LSNP组. 1.6血小板冰冻保存 分别采用终浓度为5%DMSO,2%DMSO.2%DMSO+ 50p~mol/LSNP在一80~C冰冻保存浓缩血小板1周. 1.7流式细胞仪分析 中国现代应用药学杂志2005年4月第22卷第2期 将3001.~L血小板样品用l%多聚甲醛固定l0—20min, 然后用PBS洗涤l一2次,向50p~L经过洗涤的固定血小板中 加入20trL的PE标记的抗CD62单抗,室温避光孵育20— 30min,再用PBS洗涤并稀释至500p~L,然后用流式细胞仪测 定表达CD62的血小板的百分数.每个样品均用PE标记的 鼠IgGl抗体作为对照,确定基线结合量. 1.8统计分析 结果以元?s表示.组间差异用t检验. 2结果 从表l中可以看出,各浓缩血小板组经一80~C冰冻保存 一 周后,CD62分子表达的水平均显着增高(与新鲜组比较,P <0.01).只含2%DMSO的浓缩血小板经一80~C冰冻保存 一 周后,血小板表面CD62表达较5%DMSO组有明显升高 (P<0.01);含2%DMSO及501.~MSNP的浓缩血小板经一 80~C冰冻保存一周后,血小板表面CD62表达较2%DMSO 组有明显降低(P<0.01),与5%DMSO组相比,无明显差异 (P>0.05). 表1硝普钠对冰冻血小板表面CD62分子表达的抑制作用 (,l=8,孟?s) Tab1Theinhibitoryeffectofgodillnlnitropmssideontheex— pressionofCD62onthesurfaceofplateletscryopreservedwith 2%DMSOat一80?(,l=8,元?s) 组别表达CD62的血小板百分数(%) 注:"与新鲜组相比P<O.01.与5%DMSO组相比P<O.01,'与 2%DMSO组相比P<O.OI.与5%DMSO组相比P>O.05 Note:'】ComparedwithfreshplateletgroupP<0.OI.】Comparedwith plateletgroupcryopreservedwith5%DMSOP<0.O1.JComparedwith plateletgroupcryopreservedwith2%DMSOP<O.O1.JComparedwith plateletgroupcryopmservedwith5%DMSOP>O.05 3讨论 浓缩血小板的保存方法是(22?2)?振荡保存5d, 5d的时间限制主要于有细菌污染可能的考虑J.4~C虽 可抑制细菌,但血小板的功能受损严重J.血小板的常规保 存方法制约了血站的储备工作,为了适应对血小板日益增长 的需求,不少血站陆续开展了5%DMSO冰冻保存血小板的 工作.冰冻血小板经37?融化后不作任何处理直接输注给 患者无任何严重不适.美国AABB规定经5%一6%DMSO 冰冻保存的血小板输注前必须洗涤除去DMSO,但洗涤处理 对血小板回收率和功能有较大影响.临床资料表明含2% DMSO的冰冻血小板制剂不经洗涤直接输注无任何不良反 应,具有较高的安全性"J. 目前对血小板保存效果的评价往往依赖于体外试验. ChinJMAP,2005April,Vo1.22No.2.I17. CD62分子又称为P.selectin,GMP140,PADGE蛋白,其相对 分子质量为140000,存在于血小板ot颗粒的内表面,血小板 未发生活化时,其表面不表达CD62,一旦血小板受到各种因 素的刺激,发生释放反应,ot颗粒就会与微管系统表面融合, 导致CD62出现于血小板的外表面.血小板输后1h的体内 回收率与表达CD62的血小板百分数呈负相关.因此在 血小板保存研究中常常把CD62分子的表达作为衡量血小板 活化程度的一个敏感指标.本实验结果显示,经一80?冰冻 保存后,血小板表面CD62的表达显着增加;随着DMSO浓度 的降低,血小板表面CD62的表达明显增加;通过在含2% DMSO的浓缩血小板中添加50p,moL/L的硝普钠,能显着降 低CD62的表达,与含5%DMSO的冰冻血小板接近,说明硝 普钠具有显着抑制CD62分子在冰冻血小板表面表达的作 用,显示出其联合2%DMSO冰冻保存血小板的可行性,当 然还需从血小板的形态学,超显微结构和功能等方面对血小 板冰冻保存的效果进一步加以研究,观察.另外,硝普钠是 一 种血管扩张药,具有较强的降压作用.含硝普钠的冰冻血 小板制剂在临床输用时,应严格控制输注速度. 参考文献 [1]FauldsD,ChrispP,BuckleyMM,eta1..Adenosine,Anevalu- ationofitsuseincardiacdiagnosticprocedures,andinthetreat- mentofparoxysmalsupmventriculartachycardia[J].Drugs, 1991;41(4):596. [2]ConnorJ,CurrieLM,AllanH,eta1.Recoveryofplateletconcen- tratesstoredat4~Candtreatedwithsecond-messengereffectors [J].Transfusion,1996;36(8):691. 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' 118'ChinJMAP,2005April,Vo1.22No.2中国现代应用药学杂志2005年4月第22卷 第2期