[doc] HPLC法测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B

[doc] HPLC法测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B HPLC法测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月?1263? HPLC法测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B 何结炜h,何明珍,胡子帆h,何军伟.,王跃生,杨世林 (1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西南昌330006;2.江西中医学院,江西南昌330006; 3.湖南中医药大学,湖南长沙410208) 番泻叶为豆科植物狭叶番泻Cassia angustifoliaVahl或尖叶番泻Cassiaacutifolia Delile的干燥叶,收载于《中国药典))2O05年版一 部_】],用于热结积滞,便秘腹痛,水肿胀满的治疗,是 临床上最常用的泻下药之一.其中狭叶番泻主要含 番泻苷A,B,C,D等;尖叶番泻主要含番泻苷A,B, c等.据文献报道,这些成分具有抗菌,致泻,止血, 肌肉松弛与解痉等多种作用.测定番泻叶中番泻苷 A(sennosideA),番泻苷B(sennosideB)的 有分光光度法,薄层扫描法_2],高效毛细管电泳 法l_3],毛细管区带电泳法].2005年版《中国药典》采 用紫外分光光度法测定总番泻苷_】],前几种测定方法 操作流程长且操作较为繁琐,条件较苛刻.本试验通 过HPLC同时测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B 的量. 1仪器与试药 Agient1100型液相色谱仪,VWD检测器,含 在线真空脱气机,四元梯度泵,柱温箱;色谱数据的 采集与处理由AgiLent化学工作站完成;超声波清 洗仪.甲醇为色谱纯;磷酸为分析纯;水为超纯水.番 泻苷A和番泻苷B对照品自制,经面积归一法测定 质量分数达999/6以上.番泻叶购于安徽毫州药材 市场,经江西中医学院龚千锋教授鉴定为豆科植物 狭叶番泻CassiaangustifoliaVahl的干燥叶. 2方法与结果 2.1色谱条件:HypersilODSc18柱(250mm× 4.6mm,5m);流动相:甲醇一0.5磷酸溶液 (40:60);检测波长:340nm;柱温为25?;体积流 量:1.0mL/mln;进样量:10L.理论塔板数以番 泻苷B计不低于3000,且番泻苷A,B峰与其相邻 峰分离度不少于2.色图谱见图1. 2.2对照品溶液的制备:称取经真空干燥12h的 番泻苷A与番泻苷B对照品适量,精密称定,置10 mL棕色量瓶中,加5O%甲醇溶解,并定容至刻度, 05101520 ,/mIn 1一番玛苷B2一番玛苷A 1一sennosideB2一sennosideA 图1番泻苷A,B对照品(A)和番泻叶提取液(B)的 HPLC图谱 Fig.1HPLCChromatogramsofsennosidesAandBre- ferencesubstances(A)andextractofsenna(B) 配制成含番泻苷A1.51mg/mL和番泻苷B1.18 mg/mL的混合溶液,摇匀,即得. 2.3供试品溶液的制备:取干燥药材粉末约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇 30mL,称质量,超声处理30min(控制温度在40 C以下),放冷称质量,用50%甲醇补足减失质量, 滤过,精密量取续滤液10mL于25mL量瓶中,用 50%甲醇定容,用0.45m微孔滤膜滤过,即得供 试品溶液. 2.4线性关系的考察:精密吸取对照品溶液1,2, 3,4,5mL于10mL量瓶中,用50%甲醇定容至刻 度,配制成不同浓度的对照品溶液.依次取10L 进样,以进样质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线,番泻苷A和番泻苷B分别在 0.1lO,1.014g和0.1O6,1.218g与峰面积有 良好的线性关系,番泻苷A和番泻苷B的线性方程 分别为:YA一3476.7X+48.41(rA一0.9998)和 YB一6124.1X一73.30(rB一0.9996). 2.5精密度试验:精密吸取对照品溶液10L,连 续进样5次,测定峰面积,结果番泻苷A和番泻苷 B峰面积的RSD分别为1.26和1.17%,结果 明仪器的精密度良好. 2.6稳定性试验:取同一份供试品溶液,分别于2, 4,6,8,10,12h进样10L进行测定,结果番泻苷 A和番泻苷B的RSD分别为1.97和1.89,表 收稿日期;2006—1015 作者简介;何结炜(1981--),男,硕士研究生,主要从事天然产物化学研 究与中药质量标准及中药新药研究. *通讯作者杨世林Tel;(0791)7119632E—mail;hejwl2@163,tom ?1264?中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007 年8月 明番泻苷A和番泻苷B在12h内稳定. 2.7重现性试验:取同一批样品共5份,每份约 0.5g,精密称定,按”供试品溶液的制备”项下方法 制备,进样测定,测定峰面积.结果番泻苷A和番泻 苷B质量分数的RSD分别为1.21和1.58,结 果表明该条件重现性好. 2.8加样回收率试验:取干燥药材粉末(1号药 材)约0.25g,共6份,精密称定,分别加入80, 100,120%的对照品番泻苷A和番泻苷B,按照 “供试品溶液的制备”项下方法制备,进样测定,计算 回收率.结果番泻苷A的平均加样回收率为 98.09,RSD一1.25,番泻苷B的平均加样回收 率为98.50%,RSD一1.78oA. 2.9样品测定:取10批药材粉末各约0.5g,精密 称定,按照上述”2.1”项下色谱条件测定.测定结果 见表1. 表110批药材测定结果(,l一2) Table1Determinationoftenbatchesofsenna(,l一2) 药材编号番泻苷A/番泻苷B/总量/ 0.466 0.502 0.399 0.553 0.598 0.455 0.497 0.410 0.467 0.398 2.141 1.913 2.112 1.913 1.876 1.926 2.011 2.189 1.963 1.941 2.607 2.415 2.511 2.466 2.474 2.381 2.508 2.599 2.430 2.339 3讨论 3.1提取溶剂的选择:本次试验采用了95 EtOH,70EtOH,50EtOH,50MeOH,1 NaHCO.等作为提取溶剂进行超声提取.结果表明: 50MeOH和1NaHCO.提取效果最佳,但考虑 到选择的流动相为甲醇一磷酸系统,且考虑到番泻苷 A,B在碱性条件下容易水解,所以最终选择50% MeOH作为提取溶剂. 3.2检测波长的选择:通过UV扫描,番泻苷A和 番泻苷B在340nm及279nm有最大吸收,但由于 在279nm处容,eta1.Studyonthe improvementofthetechnologyofTongbianlingCapsulaEJ]. ChinTraditPatMed(中成药),1998,20(6):8. E3]ShiSM,ZhangQS,WangBS.Determinationofsennoside AinsennabyHPCEEJ].ChinPharmAnal(药物分析杂 志),2002,22(1):24—26. E4]WeiW,WangYM,LuoGA.Applicationsofhighperfor— mancecapillaryekctrophoresisinconstituentsanalysisof ChinesetraditionalmedicineEJ].ActaPharmSin(药学学 报),1997.32(6):476. 欢迎订阅《中草药》杂志2001—2006年增刊 为了扩大学术交流,提高新药研究水平,经国家科技部同意,我部从1996年起,每年出版增刊一册. 2001年第32卷增刊特邀了中国工程院院士,专家就加快中药现代化的进程,我国人世后中药产业的发展新对策及西 部药用植物资源的保护,开发和利用等撰写综述文章.共收载论文14O多篇. 2002年第33卷增刊以”中药现代化”和”中药指纹图谱”为主要内容,收载论文1O7篇. 2003年第34卷增刊包括中药创新药物开发的思路和方法;中药现代化研究;有关中药知识产权保护和中药专利的申 请等内容,共收载论文176篇. 2004年第35卷增刊以”新技术在中药现代化中的应用”为主要内容,共收载论文12O篇. 2005年第36卷增刊以中药现代化和中药走向国际等热点为主要内容,共收载论文15O余篇. 2006年第37卷增刊以药理会议专栏及中药现代化和国际化,包括药材资源种植和可持续利用,提取工艺技术,质量控 制,疗效评价,中药理论和中药产业管理现代化等方面内容,共收载论文135篇,摘要88篇. 以上各卷增刊选题广泛,内容新颖,学术水平高,科学性强,欢迎广大读者订阅.以上增刊为我部自办发行,邮局订阅《中 草药》不含增刊,但能提供订阅凭证者,购买增刊7折优惠,款到寄刊. 123456789O