母犬阴道和子宫的微生物区系

母犬阴道和子宫的微生物区系 胚雹缎 中国兽医杂志2000年(第26卷)第g期 母犬阴道和子宫的微生物区系 郑红垡.郑星道,耿进明, 张维彦,贺春林,李梅华,佟志刚 (i.长春市中心医院病理科.吉林13005ii2.吉林农业 大学霸物科学系.长春i30i18{3.吉林省磐石市畜牧药槭 站,i32300;4.吉林省磐石市牧业管理局,i32300}5.吉林省 磐石市畜牧兽医站,132300)C}ZzZ- 中圈分类号:$858.292J857.2—3文献标识码:A 文章编号:0529-6005(2000)09-0047-02 大多数母犬的子宫感染与致病力相对较低的擞 生物有关.这些微生物往往是健康母犬阴道微生物 区系的组成部分. 本研究目的在于查明健康母犬阴道和子宫内微 生物数量包括厌氧菌和支原体属,同时研究生殖道 微生物与发情周期各个阶段是否存在着相互关系 1与方法 1.1供试动物本研究用78只成年杂种母犬,选 白某州肉犬科学研究所,另有4只发情母犬(某州肉 犬科学研究所培育).只供阴道微生物研究用 1.2培养基厌氧菌用葡萄糖-血一肝琼脂培养基, 需氧菌用5羊血琼脂培养基培养.厌氧菌选用的 培养基是分歧(无芽胞)扦菌属琼脂培养(无芽胞)杆 菌.用新霉索煌绿牛磺胆酸血琼脂培养基培养类杆 菌科,用新霉索卵磷酯酶琼脂培养基培养梭状芽胞 杆菌属.肠球菌属粪便琼脂培养基培养消化球菌科, 用修改过的乳酸杆菌琼脂培养基培养乳酸扦菌.需 氧菌选用的培养基是脱氧胆酸硫化氢乳糖琼脂培养 基培养肠杆菌科.用血请琼瞻平板培养链球菌.用血 液琼脂培养基培养葡萄球菌.用马特薯葡萄糖琼脂 培养基培养真菌.用PPLO琼脂培养基培养支原体 厌氧菌培养基和PPLO琼脂培养基置于无氧,封闭的 容器中.37C培养4天=脱氧胆酸硫化氢乳糖培养基在 37C需氧条件下培养24h,其他需氧培养基是在37C 需氧条件下培养48h= l_3微生物区系的定性和定量分析78只母犬是 4次注射饱和硫酸镁溶稚后安然死去的.整个生殖 器官无菌隔离并在子宫颈处结扎.防止阴道微生物 对子宫内容物的污染.明道壁和子宫角纵向切开.阴 道和子宫内容物是用预先称重灭菌的敷科擦拭器官 粘膜面而分别取样的.此外.4只发情母犬使用阴 道开张器.拭子称重后并放人内装2m[灭菌缓冲盐 溶液的试管中.然后,作出4次l0倍递减稀释样本. 取未稀释的样本和一系列稀释的样本各0.02m[,平 置于培养基的4个区域.在培养基上微生物生长情况 是按《医学细菌鉴别手册》和Bergy《细菌学鉴定手 册》鉴定细菌的科,种或属.细菌数量按l00mg阴道 或子宫内容物所含的菌落数为单位以对数(Log)袁 示. 收稿日期:i999—06-26 1.4发情周期的各阶段的确定发情周期可分为 5个阶段,即:发情期(包括发情前期),发情后期,乏 情期,怀孕期和产后期.根据明道馀片和子宫,卵巢 肉眼可见的特征.发情周期分为5个阶段, 1,5子宫的组织学检查从78只母犬子宫中部各 切取大约1cm长的检样,放 O福尔马林缓冲液 中固定,石蜡包埋,切片,苏术素和伊红染色. 1,6统计学分析阴道和子宫检样中细菌总数在 变换为对数后进行检样正常分布的概率.对阴道检 样中细菌总数进行评估,结果发现t检验发情周期 中两个不同阶段之间有显着的差异.子宫检样中估 算细菌数后,由x检验发情周期中两个不同阶段之 间均为差异显着 襄1从82只犬阴道内窖物中分离的微生物 需氧茴和兼性厌氧苗 链球菌属 无乳链球菌 咽峡炎链球苗 粪链球菌 牛链球菌 粪渣链球苗 乳链球菌 马肺道链球菌 葡萄球菌属 血{直凝固酶阴性 血{直凝固酶阳性 细球菌 未辨别出的革兰氏 阳性球菌 棒状杆菌属 芽抱杆菌属 未辨别出的革兰氏 阳性杆菌 大脑杆菌 变形杆菌属 巴氏杆菌属 嗜血杆菌属 未辨别出的革兰氏 阴性杆菌 氧菌 消化球菌科 乳(酸)杆菌属 双歧杆菌属 梭[抗芽胞杆菌]菌属 未辨别出的革兰氏 阳性杆菌 类杆菌科 未辨别出的革兰氏 阴性杆菌 支原体属 3(4) 5【6) 2(2】 l1(13) 10(23) 7(9) 38(34) 6(7) 25(30) 22(27) 5(6) 1<11 1<1) 5(6) 45(55) 1(1] 35(43) 40 39 39 47 37 33 43 47 3.4 34 3o 31 29 j2 45 38 37 39 51 46 4.9 54 24 2.4 25 50 47 25 48 2结果 2.1阴道微生物区系获得的阴道内容物平均重 .{髓”???????” 心乱?3200??0B 48圜圜中国兽医杂志2000年(第26卷)第9期 量为52.9mg(10.1,1847mg).阴道检样82份中. 细亩阳性者79份(占96).详见表1.细菌总数的 分布经变换对敷后符合正常分布.每lOOmg阴道内 容物中细菌总教平均Log5.0=1.5,分离出的微生 物大多数为链球菌(52),巴氏扦菌(34),类杆菌 科(55)和支原体属(43).链球菌属主要分类为 无乳链球菌和咽峡炎链球菌. 阴道细菌总数在发情周期的5个阶段中每一阶 段的平均数,发情期细菌敷(Log7.8=0.7)最高,显 着(P<0.05)高于乏情期(Log4.45-1.0),怀孕期 (Log5.9士1.3)或产后期(Log5.1=15).乏情期 细菌敷显着(P<0.05)低于怀孕期或产后期.可是, 在发情周期5十阶段中.已鉴别出的细菌,其数量在 统计学上无差异= 裹2从78只犬子宫内窖物中分离的徽生物 *培养基中少于4十苗落的微生物役有教鉴定出来 2.2子宫微生物区系78份子宫内容物平均重量 为52.6mg(7.0,1828mg).78份子宫检样中.细菌 阳性者为48份(占62).详见表2,以葡萄球菌和 支原体属为多见每lOOmg子宫内容物中细菌总数 为Log1.6,I08.3.发情周期5十阶段子宫槌样 中细菌的出现,详见表3.发情周期各阶段问细菌敷 投有明显差异 衰3母犬发情周期各阶段的子宫内细首的发生情况 注;发情周期各阶段之间无显着差异 有不少子宫检样中存在3种上的细菌.有2 只母犬在发情周期不同阶段具有大量细菌和培养出 多种菌.单十菌种也存在.l0份子宫检样中细菌 敷>Log5.0.6份子宫检样具有单一菌种,其中2 份支原体属.2份犬布鲁氏杆菌.1份变形扦菌和1 份葡萄球菌. 2.3子官的组织学所见在2份子宫检样中发现 了病理变化.1份在发情后期见到中度的化脓性子 宫内膜炎,另一份是在乏情期出现囊肿性增殖.前者 的子宫细菌仅为Log19.后者的子宫中投见到细 菌. 3讨论 母犬发情周期发情期阴道内细菌总教较其它阶 段显着为高(P<O.05)这和鼠在发情期微生物敷最 高的报道是一致的.Larsen等报道.鼠阴道微生物 敷的增加是和阴道内角化上皮细胞的存在有关.而 在发情期这些细菌显着增敷.母犬在发情期微生物 敷高也与阴道角化上皮细胞增敷有关. 葡萄球菌,大脑埃希氏菌.链球菌在母犬阴道微 生物区系中为优势微生物.本研究中类扦菌科是最 常见的:依次为链球菌,巴氏杆菌和支原体属.在犬 粪便中.大量的类杆菌科,乳杆菌和链球菌,特点是 轻型链球菌(绿色链球菌),乳链球菌都有分离到.母 犬阴道中发现的类杆菌科与已报道的粪便中的微生 物是同种.阴道内类杆菌科微生物是来源于粪便,还 是与阴道常在细菌一样同是自身形成的.有待进一 步研究. 本研究发现子宫样率中62有微生物.在其它 哺乳动物的子宫分离出微生物的为8.8,96 Leihota,0[son和Mather报道.在犬子宫中波有或 者只有少许微生物.这种差异可能与微生物学方法 的应用段试验犬本身有关率研究中.许多检样中子 宫微生物区系与阴道微生物区系相似.而且在另一 些检样中发现单个微生物这些发现表明带有微生 物的阴道内容物常会进人子宫.但是只有极少敷的 种属能够存活. 78份子宫检样中.细菌阳性者为48份,然而在 2份子宫检样中见到病理变化.这说明在正常的发 情周期内子宫中的微生物极少引起病理变化.引起 子宫感染可能有许多因素.将微生物接种于黄体阶 段的兔和牛的子宫内较卵泡阶段更容易迅速增长= 生殖激素失调可能是造成子宫感染多的因索之一.