【doc】植物多糖和植物氨基酸对小鼠淋巴细胞,巨噬细胞和多形核白…

【doc】植物多糖和植物氨基酸对小鼠淋巴细胞,巨噬细胞和多形核白… 植物多糖和植物氨基酸对小鼠淋巴细胞,巨 噬细胞和多形核白… J6弓一牛 中国老年学杂志1994年第l4卷第3期 植物多糖和植物氨基酸对小鼠淋巴细胞, 多形核白细胞的直接活化作用 巨噬细胞和 ? 163? R32ti 刘振龙(首都医学院微生物学免疫学教研声,北京100054) ?摘要采用噻唑蓝(MTT)比色法来研究植物多糖和植物氨基酸对昆明小鼠淋巴细胞,巨噬细胞和多形 核白细胞的直接活化作用,结果显示植物多糖对小鼠三种细胞有直接活化作用;植物氨基酸对小鼠淋巴细胞活 性有抑制作用,对小鼠多形核白细胞和巨噬细胞有直接活化作用,尤其是多形核白细胞作用更为显着(P< o.OO1) 关键词噻唑蓝植物多糖 ?-_'一一,?_—--, 植物氨基酸 本文系采用噻唑蓝(MTT)比色法来检测植物 多檐和植物氨基酸分别对小鼠淋巴细胞,巨噬细胞 和多形核自细胞直接活化作用. 1材料和方法 1.1材料 植物多糖(长阳功能食品厂), 植物氨基酸(武汉辛安渡制药总厂), 噻唑蓝(M"IT)(Sigma公司), 十二烷基磺酸钠(SDS)(BRL公司), 淋巴细胞分离掖(上海试剂厂), RPMI164O培养液(苏格兰Flow厂). 1.2细胞分离一 1.2.1小鼠淋巴细胞町r分离'昆明系小鼠,摘除眼 球,收集肝素抗凝的末梢静脉血,加入淋巴细胞分离 液,低速离心,吸取淋巴细胞层离心,洗3次,淋巴 细胞计数,4C保存在RPMI1640培养液中待用. 1.2.2小鼠腹腔巨噬细胞分离昆明系小鼠,腹腔 注射无菌的4%淀粉盐水液2ml,3天后处死,无菌 取出腹腔液,低速离心,用RPMI1640洗3次,细胞 计数,4C保存在RPMI1640培养液中待用.. 1.2.3小鼠多形核白细胞的分离昆明系小鼠,摘 除眼球,收集肝紊抗凝的静脉血.静置37?60分钟, 吸出含多形核白细胞层血浆,低速离心.弃上清,用 RPMI1640洗3次,细胞计数,4?保存在RPM1 1640培养液中待用. 1.3MTT比色法 1.3.1溶液配制(1)配5mg/mlMTT的PBS (pH7.2)溶液,保存在4?冰箱.(2)配10%SDS双 蒸水溶液. 1.3.2MTT比色法将小鼠三种细胞0.2ml(3X 20'/m1)分别置于无菌试管中,每2管为1组.除三 种细胞对照组外,其余各组分别加入植物多檐或植 物氮基酸100td.37C孵育2小时后每管加1人20txl'- (5mg/m1)的MTT,轻轻振荡后,再37?孵育2小 时,然后每管加入10SDS20014,轻轻振荡,37? 孵育过夜.721G光电比色计测量ODm值. 2结果 2.1植物多檐对小鼠三种细胞的直接活化作用. 1结果显示,植物多糖对小鼠三种细胞均有直 接活化作用,其中对多形核白细胞作用较明显. 2.2植物氨基酸对小鼠的三种细胞直接活化作用 的结果 . 植物氰基酸对小鼠淋巴细胞有抑制作用,但对 巨噬细胞和多形核白细胞有直接活化作用,尤其对 多形核白细胞作用显着(P<0.001)(见表1). 表1植物多糖和植物氨基酸对小鼠淋巴细胞,巨噬细胞和多形核白细胞的直接活 化作用 1指导者 f ?164? 3讨论 MTT比色法噻唑蓝在溶液中呈黄色,可被活细 胞内线粒体脱氢酶还原呈蓝紫色的结晶,经SDS溶 解细胞后;可澜ODS值.只有活细胞,才能还原 MTT,死细胞和红细胞没有这种能力,而且活化细 胞比静止细胞还原作用更明显.细胞活化程度越高, 其ODs,o值越高.因此,MTT比色法常用来指示许多 种细胞存活,活化或增殖.. 我们曾采用MTT比色法来研究人淋巴细胞和 小鼠巨噬细胞的活性.中药多糖,人工合成多糖,细 菌多糖,有丝分裂素,升高cAMP浓度的药物均能直 接活化人淋巴细胞}中药多糖,人工合成多培,细菌 多糖和升高cAMP浓度的药物均能直接活化小鼠巨 噬细胞0. Pruett等"指出多形核白细胞的活化与呼吸暴 发关系的一致性,可用MTT比色法来表示.激活多 形核白细胞能增强吞噬杀菌功能,往往也引起呼吸 暴发.因此,植物多糖,特别是植物氨基酸都能激发 小鼠多形核白细胞的活性,即诱发小鼠多形核白细 胞的呼吸暴发,增强了它的吞噬杀菌能力. 1Il手一I易I5' 中国老年学杂志1994年第l4卷第3期 植物多糖系从枸杞,山楂,余甘果等植物中提 取}植物氨基酸系从棘刺梨等植物中提取.两者均含 有过氧化氢酶. 植物氨基酸抑制小鼠淋巴细胞的活化,可能与 它的pH值偏酸(pH=3)有关. 植物多糖和植物氮基酸均能直接活化小鼠巨噬 细胞和多形核白细胞,可能与这两种物质诱发这两 种细胞吞噬功能相关. 植物多糖直接活化小鼠淋巴细胞.可能与增加 小鼠淋巴细胞内cAMP浓度相关,即通过蛋白激酶 A的途径增加细胞内cAMP的浓度. 4参考文献 1.MosmanT.JImmunolMeth,1983l65l55. 2.PruettSB,LoftisAY.IntArchAllergyApplImmunol, l990l92l189. 3.陈哲生,孙明洁,刘振龙.上海免疫学杂志,1992,12 (5)l269. [1993一O4一o7收稿l993一o7一o8修回) (编辑胡国义) 胡桃抗衰老作用的实研究 罗z 王素敏董玉枝王藏符云峰(河北省医学科学院生化研究室,石家庄.050021) 型煎墓徐增年刘树锋(河北省实验动物中心) A摘要胡桃对老龄小鼠某些衰老指标影响的结果表明t1.增强脑和肾Na—K— ATP冀活性28%和 41.96%l2.降低血清总胆固醇鲁量29.95%,增加血清HDL岔量32.22}3.提高RBC —SOD活性18.40%, 降低血清LPO鲁量38.17%}4.增加胸腺指教56.55%.提示胡桃对老龄小鼠具有抗 衰老作用. 关键词胡挑Na.K—ATP酶RBC—SOD丙二醛抗衰老 r一一————.',?一—一.-一 胡桃(核桃)为胡桃科胡桃(Juglansre~a)的 干燥种仁.具有温肺,补肾之功效.现代研究证明, 胡桃仁含有脂肪油45,5O,主要是亚油酸甘油 脂.最近有学者"从胡桃仁中检出5种磷脂成分.磷 脂是动物和人体生物细胞膜的必要组成部分,具有 保护生物膜,降低血脂,防止心脑血管疾病,增强机 体免疫功能,以及对老化组织系统的修饰而产生降 低细胞膜老化指数和推迟老化过程的作用.目前认 为自由基引发的脂质过氧化反应是导致机体衰老的 主要原因".在生物衰老时,体内会出现多种生物化 学变化,而生物膜结构和功能改变却是细胞老化的 关键环节.但有关胡桃在诸方面的研究报道甚少,本 实验以2O月龄昆明小鼠为动物模型,观察了胡桃对 某些衰老指标的影响,以探讨其抗衰老的作用机理. 1材料和方法 1.1动物 昆明种2O月龄小鼠,雌雄兼用,均由河北省实 验动物中心供应. 1.2药物及饲料