丹参中隐丹参酮的分离工艺研究

丹参中隐丹参酮的分离工艺研究 西北药学杂志2008年6月第23卷第3期145 锐等用同样的测定了半夏中的挥发油类成分, 与本文的法半夏的亲脂性成分差异比较大,这种差异 是否与生半夏,法半夏的药理活性和临床应用的差异 有关,还有待于进一步的研究. 1法半夏亲脂性成分GC-MS测定结果 ]500000 . 上.一lld*}lIIjlI.Ll-j520竹354口4550556O ,{rain 法半夏亲脂性成分总离子流图 参考文献: [1]大盐春治.Isolationof1-ephedrine{rom"PinelliaeTu— ber"ChemEJ].PharmBull1978,26(7):2096. 1123吴皓,张科卫,李伟,等.半夏的化学成分研究[J].中草 药,2003,34(7):593—594. [3]李忠红,聂晶,倪坤仪,等.不同产地半夏的化学成分分 析及比较I-J].分析科学,2005,21(4):393—395. I-4]吴皓,文红梅,郭戎,等.半夏姜制对鸟苷含量的影响 [J].中国中药杂志,1998,23(12):661. E5]吴皓,李伟,张科卫,等.半夏药材鉴别成分的研究I-J]. 中国中药杂志,2003,28(9):836. [6]王锐,倪京满,马蓉.中药半夏挥发油成分的研究[J].中 国药学杂志,1995,30(8):457—459. (收稿日期:2007—11一O1) 丹参中隐丹参酮的分离工艺研究 徐燕,薛峰,贾晓妮,张元媛,王军宪?(1.西安 交通大学医学院药学系,陕西西安710061;2.陕西省卫生监 督所,陕西西安710054) 摘要:目的筛选丹参中隐丹参酮的最佳分离工艺.方法以 隐丹参酮为检测指标,采用HPLC法测定隐丹参酮的含量; 对丹参的乙醇提取法和先水提后乙醇提取法的工艺进行比较 研究.结果采用先水提后醇提的方法提取丹参中的脂溶性 部分,并结合用硅胶柱层析,重结晶等方法从其中分离得到隐 丹参酮.结论该提取分离方法提高了丹参药材的利用率, 且简便,省时,适合于大生产. 关键词:隐丹参酮;丹参;提取分离工艺 中图分类号:R284.2文献标识码:A 文章编号:1004—2407(2008)03—0145—03 丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge. 的干燥根及根茎.性苦,微寒,其主要功效为祛瘀止 痛,活血通经,清心除烦口].据文献报道,丹参中的化 学成分主要为脂溶性与水溶性两大类:脂溶性部分主 要为丹参酮类化合物;水溶性部分则主要为酚酸类化 合物.关于丹参脂溶性部分的研究,目前多以丹参酮 ?A作为质量控制的或以丹参酮工,二氢丹参酮 工,丹参酮?A及隐丹参酮等多种脂溶性成分联合作 为含量测定的指标l_2],尚未有一种简便,经济,适用于 工业生产的隐丹参酮提取分离工艺.因此,笔者以隐 丹参酮作为检测指标,研究丹参中隐丹参酮的提取分 离工艺,对丹参的乙醇提取法和先水提后乙醇提取法 的工艺进行比较研究,结合硅胶柱层析方法分离得到 隐丹参酮,为隐丹参酮的进一步研究开发奠定基础. 隐丹参酮为丹参中主要的脂溶性成分之一,具有明显 的类雌激素],抗炎,抗菌,抗心肌缺血,抗肿瘤l_4等 作者简介:徐燕,女,硕士, 讯作者:王军宪,男,教授,硕士生导师,Tel:029—82655137, E—mail:wangjx@硝tu.edu.cn 146西北药学杂志2008年6月第23卷第3期 作用.由于缺乏简单的分离纯化方法及其本身结构 的不稳定性,故隐丹参酮在临床上很少应用,也极少 作为脂溶性成分研究的检测指标. 1仪器与试药 1.1仪器高效液相色谱仪,包括P2000泵,UVIO0 紫外检测器,7725手动进样阀(美国TSP公司); ANASTAR色谱工作站(奥康科技有限公司);AE240 型电子分析天平(梅特勒一托利多仪器有限公司). 1.2试药丹参药材购自陕西商洛,经西安交通大 学医学院药学系郭增军副教授鉴定为唇形科植物丹 参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎;丹参酮工 (tit号0867—200003),丹参酮?A(批号0766-9908),隐丹 参酮(批号852—9903)对照品(购自中国药品生物制品 检定所);硅胶G,柱层析硅胶(青岛海洋化工厂).提 取用乙醇为工业乙醇;高效液相用甲醇为色谱纯;其 它试剂均为分析纯;蒸馏水自制. 2方法与结果 2.1提取工艺综合前人文献,结合工业常用的提 取方法,本实验采用正交试验法对提取工艺进行优 选.选取3个对提取率影响较大的因素(提取溶剂 量,提取次数,提取时问),每个因素选择3个水平进 行考察,按L.(3)表安排试验,以隐丹参酮的含量为 试验指标.进行一系列的试验后,选择出最佳工艺: 即用10倍量乙醇,回流提取2次,每次2h[5]. 2.2选择提取工艺中水提与醇提的顺序丹参的水 溶性成分主要具有心脑血管方面的作用,已在临床上 广泛应用.在工业生产中,一般采用水煎煮法提取. 此法工艺简单,成本低,安全,易操作,但提取后的大 量药渣未得到充分利用.笔者希望通过比较丹参粗 粉中的隐丹参酮含量与丹参水提取后药渣中的隐丹 参酮含量,选择丹参水提及醇提的顺序,即一种能兼 顾水溶性成分与脂溶性成分提取率的方法.因此,本 部分实验以隐丹参酮的含量为检测指标,比较丹参药 材先水提再醇提与丹参直接醇提的隐丹参酮提取率 的差别. 2.2.1丹参醇提液的制备按2.1项下提取方法提 取,取10g丹参粗粉,用10倍量的乙醇,回流提取2次, 每次2h,合并提取液,补充乙醇至200nlL,得溶液1. 2.2.2丹参水提取后药渣的醇提液的制备以丹参 素的提取率为标准,查阅文献选择水提的最佳工艺: 即取10g丹参粗粉,用12倍量水,在电热套加热,内 温控制在100?左右的条件下,提取2次,每次1.5 h[6].过滤得药渣,晾干后称质量,为4g.再用10倍 量的乙醇,回流提取2次,每次2h,合并提取液,补充 乙醇至80mL,得溶液2. 2.2.3丹参水提取后药渣的醇提液与丹参醇提液的 隐丹参酮含量测定照参考文献色谱条件,取溶液 1和溶液2各10L,注入高效液相色谱仪,按外标法 测定各溶液中隐丹参酮的含量,结果先水提后乙醇提 取法为0.44(以4g干药渣计),而乙醇提取法只有 0.26,见图1.' 图1HPLC色谱图(a_隐丹参酮) A一丹参醇提液;B-丹参水提取后药渣醇提取液 由上述结果可知,经水提取后的药渣中的隐丹参 酮含量高于丹参粗粉中隐丹参酮含量.因此,先用水 提取丹参中的水溶性成分,再用乙醇提取药渣中的脂 溶性化合物,可保证药材的充分利用. 2.3主要脂溶性成分的分离工艺 2.3.1分离方法按2.2.2中的最佳工艺操作,提 取液减压浓缩至干.干膏粉碎后用适量苯多次提取, 至残留物经薄层检测无明显隐丹参酮斑点为止.合 并苯提取液,浓缩至适当体积. 取适量硅胶湿法装柱,将上述浓缩液湿法上样, 用苯洗脱.可以观察到明显色带,且色带随洗脱的进 行更加分明.收集洗脱液,至第3条明显色带洗脱完 全.将第1条明显色带的洗脱液合并,减压浓缩至 干,用适量乙醇使其在热水浴中完全溶解,抽滤,得棕 红色固形物1.滤液放置,有棕红色针状结晶析出, 过滤,得结晶2.将母液继续放置,得樱红色片状结 晶析出,为结晶3.将第2条明显色带的洗脱液合 并,减压浓缩至干.加入适量甲醇一水(9:1),加热回 流至固体完全溶解,过滤除去油状物,滤液放置,有橙 红色片状结晶析出,为结晶4. 2.3.2实验结果对分离所得4种洗脱物进行薄层 层析鉴定:分别取少量上述4种洗脱物溶于甲醇,制 成供试品溶液,与丹参酮工,丹参酮HA,隐丹参酮的 对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上,展开剂为石 油醚(6OoC,90oC)一乙酸乙酯(8:2),展开,晾干后, 在自然光下检视,结晶4与隐丹参酮对照品的Rf值 相同;固形物1,结晶2与丹参酮工对照品的Rf值相 同;结晶3与丹参酮HA对照品的Rf值相同.因此判 断,洗脱物中结晶4为隐丹参酮,固形物1,结晶2为 丹参酮I,结晶3为丹参酮HA. 对结晶4中隐丹参酮的含量进行测定,采用外标 西北药学杂志2008年6月第23卷第3期147 法:精密称定结晶40.01mg,置于25mL量瓶中,用甲醇 定容至刻度,摇匀.注入高效液相色谱仪,进样量为10 L,计算得结晶4中隐丹参酮的含量为7'6.73. 2.3.3隐丹参酮的纯化将结晶4置于三角瓶中,加入 适量丙酮,置水浴锅上加热,振摇,直至加入丙酮后结晶 不再溶解为止.趁热过滤,滤液静置,得橙红色针状结 晶.所得结晶与对照品经薄层色谱检视和高效液相色 谱对照检查,隐丹参酮含量为98以上. 3讨论 从提取工艺中可以看出,水提取后的丹参药渣的质 量与原丹参药材质量相比明显减轻;对提取隐丹参酮而 言,用水提取水溶性成分相当于减少一部分杂质,因此 在工业生产上,可以先用水煎煮法提取丹参中的水溶性 成分,再用乙醇回流提取丹参中的脂溶性成分;这为丹 参制剂工业生产,如何充分提取丹参药材,节约原药材, 获得最大经济效益提供了理论支持.该提取分离方法 简便,快速,丹参药材综合利用率高,能同时分离隐丹参 酮,丹参酮I,丹参酮3种重要脂溶性成分,有较强的实 用性,适于工业生产,并为隐丹参酮的进一步研究开发 奠定基础. 参考文献: Eli中国药典2005年版[S].一部.2005:52-53. [2]陈蕾,朱霁.丹参中4种脂溶性成分的含量测定[J].中国药 事,2004,18(12):749—751. E3]高玉芝,王灵芝,唐冀雪.丹参酮的性激素样作用[J].中国医 学科学院,1998,2(3):189. E4]柴瑞震.丹参的药理作用研究近况EJ].中国中医药科技, 2003,10(6):390-392. E5]徐燕,杨军仁,刘硕,等.丹参中隐丹参酮提取工艺的研究 EJ].西北药学杂志,2006,21(3):111—112. [6]周侠,胡谨,王宾.丹参素的提取工艺研究EJ].化工生产与技 术,2003,10(6):4-5. (收稿日期:2007—11—27) HPLC测定维尔康胶囊中甲基橙皮苷 的含量 贺建春,黄兰,余彦海.(佛山德众药业有限公司,广东佛 山528OOO) 摘要:目的建立高效液相色谱法测定维尔康胶裳中甲基橙皮苷 的含量.方法采用(150mill×4.6mill,5脚)柱,冰醋酸一甲 醇一水(5:25:70)为流动相,流速为1.0niL?min-,检测波长为 283nrn.结果甲基橙皮苷质量浓度在29.1~291rng?L-范围 内呈良好的线性关系(r一0.9999);平均回收率为99.3,RSD 为1.8(一6).结论该方法操作简便准确,重现性好,可用 于维尔康胶裳中甲基橙皮苷的质量控制. 关键词:维尔康胶裳;甲基橙皮苷;HPLC法;含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A 文章编号:1004—2407(2008)03—0147—02 维尔康胶囊是由人参,灵芝,黄芪,甲基橙皮苷等 组成的复方制剂.其主要功能为健脾固本,益气扶 正,安神益智,延缓衰老.用于年老体虚,健忘,妇人 脏躁,老人黧黑斑,亦可作胁痛,虚劳,久喘气短诸证 的辅助治疗.其质量标准收载于《卫生部药品标准》 中药成方制剂第十二册口],但标准中没有甲基橙皮苷 的含量测定,为了更好地控制其质量,笔者参考有关 文献[2-4]采用了HPLC法对维尔康胶囊中的甲基橙 皮苷进行了含量测定,取得良好效果. 1仪器与试药 1.1仪器Waters高效液相色谱仪(包括1525泵, 2487紫外检测器),Breez色谱数据工作站;Sartorius BP211D万分之一电子天平;KS-300D超声清洗仪(300 w,40kHz,宁波市海曙科生超声设备有限公司). 1.2试药甲基橙皮苷对照品(中国药品生物制品 检定所,ll1580—200302;供含量测定用);维尔康胶囊 (批号040103,佛山德众药业有限公司生产);甲醇为 色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Waters SymmetryCl8(150mm×4.6mm,5m),流动相为冰 醋酸一甲醇一水(5:25:70),流速为1.omL?min_.,检 测波长为283nin,柱温为28?,进样量为10L.理 论板数按甲基橙皮苷峰计算不低于2000. 2.2对照品溶液的配制取甲基橙皮苷对照品适 量,精密称定,加甲醇制成每1mL含60g的溶液, 即得. 2.3供试品溶液的配制取本品5粒,除去囊壳,研 成细粉,取0.3g粉末,精密称定,置100mL量瓶中, 加甲醇约80mL,超声处理30min,放冷,加甲醇至刻 度,摇匀,滤过,取续滤液,即得. 2.4阴性对照溶液的配制取不含甲基橙皮苷的处 方药材,制备不含甲基橙皮苷的阴性对照样品,按照 供试品溶液制备方法配制阴性对照溶液. 2.5线性范围考察精密称取甲基橙皮苷对照品 145.5mg,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至 刻度,摇匀,分别吸取2,4,8,10,14,18和20mL,置 100mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取 上述系列对照品溶液10L,注入液相色谱仪,测定, 以甲基橙皮苷质量浓度(mg?L)X为横坐标,峰 面积y为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程:Y一 49744X一15740,相关系数r一0.9999.结果表明, 甲基橙皮苷质量浓度在29.1,291mg?L范围内 线性关系良好. 2.6精密度试验精密吸取58.2mg?L对照品 10L,重复进样5次,按上述色谱条件测定峰面积, RSD为0.5.