【word】 安神健脑液质量标准研究

【word】 安神健脑液质量研究 安神健脑液质量标准研究 50?ChineseJournalofInformationonTCMFeb.2010Vo1.17No.2 安神健脑液质量标准研究 古海锋,刘然,张小茜,郭洪祝 (1.北京市药品检验所,北京100035;2.北京市东城区药品检验所,北京100028) 摘要:目的建立安神健脑液的质量标准.采用薄层色谱法鉴别麦冬,丹参,枸杞子和人参;采用高效 液相色谱法测定五味子申五味子醇甲的含 量,C.(250mm×4.6mm,5um)色谱柱,流动相为甲醇一水(55:45),流速 1.0mL/min,检测波长250nm.结果在薄层色谱中可检出丹参,枸杞子和人参的特征斑点;五味子醇甲在0.1218, 1.218lag范围内线性关系良好,,=0.9999,精密度RSD=0.22%(n=6),重复性试验RSD=1.1%(月=6),平均加样回 收率为97.34%(RSD=1.7%,口=6)结论本方法简便,灵敏,专属性强,重复性好,可作为安神健脑液的质量控制方法. 关键词:安神健脑液;五味子醇甲;高效液相色谱法;薄层色谱法;质量标准 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1005—5304(2010)02.0050—03 StudyontheQualityStandardofAnshenJiannaoMixtureGUHai—feng,LIU Ran,ZHANGXiao?qian,etal ,.BeijingInstituteforDrugControl,BeUing10003~China:2.BeoingDongchengDistrictInstitutefo,DrugControl, Beijing100028,ChinaJ Abstract:ObjectiveTostudythequalitystandardofAnshenJiannaoMixture.MethodsRadix ophiopgonis,RadixetRhizomaSalviaeMfltiorrhizae,FructusLycfiandRadixetRhizomaGinsengwere identifiedbyTLC.HPLCwasusedtodeterminethecontentofSchizandrolAonC18f250mm×4.6mm, 5}am)ODScolumn.Themobilephasewasconsistedofmethanol—waterf55 :45).Theflowratewas 1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwasat250nm.ResultsThecharacteristicspotofRadixetR.hizoma SalviaeMiltiorrhizae.FructusLvciiandRadixetRhizomaGinsengcouldbeeasilyexaminedbyTLc.The calibrationcurveofSchizandrolAwaslinearintherangeof0.1218, 1.218lag.r=0.9999.Theprecision RSDwas0.22%(rt一 6).ThereproducibilityRSDwasi.1%(n=6).TheaveragerecoveryrateofSchizandrol Awas97.34%(RSD=1.7%,n=6).ConclusionsThemethodiseasy,sensitivea ndspecificwithgood reproducibility.ItcanbeusedtocontrolthequalityofAnshenJiannaoMixture. Keywords:AnshenJiannaoMixture;SchizandrolA:HPI_,C;TLC;qualityst andard 安神健脑液收载于《卫生部药品标准?中药成方制剂》第对照品(供含量测定用,批号l10703—200322)和人参对照药材 十八册,由人参,五味子(醋炙),麦冬,枸杞子和丹参5味药(供薄层色谱对照用,批号120917-200507)均由中国药品生物 组成,具有益气养血,滋阴生津,养心安神功效.用于气血两制品检定所提供.安神健脑液(批号为5151504,5151497, 亏,阴津不足所致的失眠多梦,神疲健忘,头晕头痛,心悸乏6150686)由同仁堂科技有限公司提供.硅胶H薄层板,硅胶G 力,口干津少等症.原质量标准只收载了麦冬和五味子两昧药薄层板均由青岛海洋化工厂分厂提供.甲醇为色谱纯,LANSCAN 的薄层色谱鉴别.为全面控制安神健脑液的质量,本试验对麦LTD.出品.水为纯水机净化水(纯水机型号M订1iporeMilli-O 冬,丹参,枸杞子和人参4味药材进行了薄层色谱鉴别,并采biocel型纯水器).其余试剂均为分析纯. 用高效液相色谱法(HPLC)对方中君药五味子中的活性成分五2薄层色谱鉴别 味子醇甲进行了含量测定,为该制剂建立完善的质量标准提供2.1麦 冬 了依据.现总结如下.取本品和阴性样品各lOmL,加盐酸1mL,三氯甲烷1OmL, 1仪器与试药置水浴上加热回流30min,分取三氯甲烷层,用水20mL洗涤i 日本岛津Lc一20A高效液相色谱仪(SPD—M20A紫外一可见光次,弃去水液,三氯甲烷液浓缩至约lmL,分别作为供试品溶液 检测器,SIL一20AC自动进样器,CTO一20AC柱温箱);电子天平和阴性溶液.另取麦冬对照药材lg,同法制成对照药材溶液. (CP225D,十万分之一).吸取上述3种溶液各5laL,分别点于同一硅胶H薄层板上,以 五味子醇甲对照品(供含量测定用,批号110857—200405),三氯甲烷一丙酮(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫 麦冬对照药材(供薄层色谱对照用,批号121013—200607),枸酸乙醇溶液,在105?烘约3min检视.可见供试品色谱中, 杞子对照药材(供薄层色谱对照用,批号121072-200505),原在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,而阴性样 儿茶醛对照品(供含量测定用,批号110810—200506),人参皂品无对照药材斑点. 苷Rb对照品(供含量测定用,批号110704—200318),人参皂苷2.2丹参 Re对照品(供含量测定用,批号l10754—200320),人参皂苷Rf取本品 和阴性样品各10mL,分别置分液漏斗中,加盐酸调 对照品(供含量测定用,批号l11719—200501),人参皂苷Rg节pH值至I,加入乙酸乙酯振摇提取3次,每次2OmL,取乙酸 2O10年2月第17卷第2期中国中医药信息杂志?51? 乙酯液蒸干,加甲醇1mL使溶解,分别作为供试品溶液和阴性 溶液.另取原儿茶醛对照品,加乙醇制成每lmL含1mg的溶 液,作为对照品溶液.分别吸取上述3种溶液各5uL,分别点 于同一硅胶G薄层板上,以甲苯一乙酸乙酯一甲酸(8:5:0.8) 为展开剂,展开,取出,晾干,唢以2%三氯化铁一1%铁氰化钾溶 液(1:1)检视.可见供试品溶液色谱中,在与对照品色谱相应 的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性样品无对照品斑点. 2.3枸杞子 取本品和阴性样品各1OmL,分别置分液漏斗中,用乙酸乙 酯20mL振摇提取,提取液浓缩至约1mL,分别作为供试品溶 液和阴性溶液.另取枸杞子对照药材0.5g,同法制成对照药 材溶液.分别吸取上述3种溶液各5pL,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以乙酸乙酯,三氯甲烷,甲酸(3:2:1)为展开剂,展 开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视.可见供试品溶液 色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光 斑点,而阴性样品无对照药材荧光斑点. 2.4人参 取本品和阴性样品各25mL,分别用水饱和正丁醇振摇提 取4次,每次20mL,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次 20mL,弃去碱液,取正丁醇液蒸干,残渣加20%乙醇溶液5mL 使溶解,照柱色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部) 附录VIC]试验,通过已处理好的大孔树脂柱(内径1cm,高20cm) 先用水100mL洗脱,弃去水溶液,再用70%乙醇100mL洗脱, 收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,分别作为供试品溶 液和阴性溶液.另取人参对照药材1g,同法制成对照药材溶 液.再取人参皂苷Rb.,人参皂苷Re,人参皂苷Rf及人参皂 苷Rg对照品,加甲醇制成每1mL各含lmg的溶液,作为对照 品溶液.分别吸取上述7种溶液各lOLlL,分别点于同,硅胶H 薄层板上,以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水(15:40:22:10) 1O?以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在105?加热至斑点显色清晰,分别置日光 下检视.供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应位置 上,分别显相同颜色的斑点,而阴性样品无对照品斑点. 3五味子醇甲的测定 3.1对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品15mg,置50m1.量瓶中,加甲醇 适量使溶解,并稀释至刻度,摇匀;精密量取2.0mL,置10fnL量 瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每lmL中含五昧子醇甲6Oug). 3.2供试品溶液的制备 精密量取本品1OmL,置分液漏斗中,用乙醚提取4次,每 次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45IJm)滤过,取续 滤液,即得. 3.3阴性对照溶液的制备 按照本品的处方,制法制备缺少五味子的模拟样品,精密 量取l0mL,按”3.2”项下方法制备阴性对照溶液.将对照品 溶液,供试品溶液和阴性对照溶液分别注入高效液相色谱仪中 进行测定,得到色谱扫描图,见图1.可见供试品与对照品溶液 在相应的位置上有相似的峰,而阴性对照则无明显其他峰出 现. 1 ……,…j1……口…口…r…口…D, A ……O……7,……,…’…J… B …?…口1…’…口…D…’…o?… timin C 注:A.对照品;B.供试品;C.1j月性对照;1.五味子醇甲 图1安神健脑液HPLC图谱 3.4色谱条件 色谱柱:SHISEIDOCAPCELLPAKC色谱柱(4.6mmX250into, 5pm);流动相:甲醇一水(55:45);流速:1.0mL/min;检测 波长:250nm;柱温:40.0?.分离度(R)大于1.5,色谱柱 的理论塔板数按五味子醇甲峰计算应不低于3000. 3.5检测波长的选择 取五味子醇甲对照品溶液10LlL,注入液相色谱仪,用二极 管阵列检测器在180~400VIIII波长范围检测,结果在250nm 波长处有最大吸收,因此选择250rim作为测定的吸收波长. 3.6标准曲线的制备 精密称取五味子醇甲对照品15.23mg,置50mL量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2.0mL置10mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得60.92~g/mL五味子醇甲 对照品溶液.分别吸收2,4,?,1.o,2QIJL,注入高效液相色 谱仪,峰面积,以五味子醇甲对照品进样量为横坐标,峰面积 值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:j,=1.997×10+ 6.790X10.,,=0.9999,结果表明,五味子醇甲对照品在 0.12l8,1.218ug范围内线性关系良好. 3.7精密度试验 精密吸取同一供试品溶液(批号5151504),进样l0uL,重 复进样6次,求得RSD=0.22%. 3.8稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(批号为5151504)10/JL,分别于 配制后0,l,4,8,15,24h依法测定,结果表明供试品溶液 ? 52?ChiDCSCJournalofInformationonTCMFeb.2O10Vo1.17No.2 在24h内基本稳定,RSD=0.76%. 3.9重复性试验 取同一供试品溶液(批号为5151504)6份,精密量取1OmLJ 分别制备供试品溶液,进行测定,计算,得五味子醇甲的平均含 量为0.060mg/mL,RSD=1.1%. 3.10加样回收率试验 精密量取已知含量的同一批号样品(批号为5151504,含 量为0.06089mg/mL)5mL,精密加入水5mL,混匀,再精密加 入五味子醇甲对照(0.2680mg/mL)的乙醚溶液2OmLl振摇提 取,分取乙醚层,水层溶液继续用乙醚振摇提取3次,每次2OmL, 合并4次乙醚提取液,蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45Hm)滤过,取续 滤液,即得.进样测定,计算,得平均回收率为97.34%,RSD= 1.7%.见表l. 表1加样回收率试验结果 3.11样品测定 取3批样品,制备供试品溶液.分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液各10L,注入液相色谱仪,采用外标法计算五味 子醇甲的质量分数,结果见表2. 表2样品测定结果 批号五味子醇甲含量(mg/I『IL) 0.060 0.054 0.049 4讨论 按本品处方比例及制备工艺分别制备不含麦冬,丹参,枸 杞子和人参的缺味样品并制成阴性对照溶液,将它们分别与相 应的供试品同板进行薄层色谱试验.结果表明,各阴性对照均 无相应斑点,该4味药的鉴别方法具有专属性. 根据文献,流动相曾采用甲醇一水(50:50,60:40), 乙腈一O.1%磷酸(42:58)”,甲醇一乙腈一水(15:15:10), 乙腈一水(45:55),试验结果表明,采用甲醇一水(55:45)作 为流动相不仅可使杂质峰有效的分离,且保留时间较为适宜. 选取乙醚,乙酸乙酯,三氯甲烷,水饱和的正丁醇作为溶 剂,分别振摇提取4次,每次2OrflL,合并提取液,蒸干,残渣用甲 醇溶解并转移至l0mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀.测定同批 样品(5151504)中五味子醇甲的含量,结果表明,采用乙醚为溶 剂,提取较完全:采用乙酸乙酯为溶剂时色谱图中干扰成分较 多;采用三氯甲烷为溶剂时易产生乳化现象,不易去除;采用水 饱和的正丁醇为溶剂时色谱图中背景干扰过大.以乙醚为溶剂, 分别振摇提取2,3,4,5,6次,每次2OJ】】L,测定同批样品 (5151504).结果表明,采用乙醚振摇提取4次为宜,提取较完全. 取另外两种不同品牌色谱柱,按”3.2”项下方法制备供试 品溶液,分别依法分离测定,结果均能获得满意的分离效果.色 谱柱型号分别为A1ltechApolloCl8(5pm,4.6mm×150mm), KromasilKRIO0—5CI8(5pm,4.6mm×250Into). 本方法操作简便,准确,重复性好,可作为安神健脑液的 质量控制方法. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出 版社,2005.174. 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