广西地方标准《剑叶龙血树组培种苗规范化生产技术规程》(征求意见稿)编制说明

广西地方标准《剑叶龙血树组培种苗规范化生产技术 说 明 规程》(征求意见稿)编 制 一、标准编制工作意义 剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis (Lour) S.C.Chen) 又名千年木、血竭树、交趾龙血树～是渐危种～属国家二级保护植物～2003年被国际自然与自然资源保护联合会划归为易受危害的物种列为红色名单～被定为佛得角红皮书中的濒危物种～是目前国内公认的国产龙血竭的基源植物。 血竭是一种名贵传统中药～在我国的使用历史已有1500年以上。据《本草纲目》记载～龙血竭性温、平～味甘、咸～无毒～入血分～归肺、脾、肾三经～具有活血化瘀、消肿止痛、收敛止血～软坚散结、生肌敛疮等显著功效～被誉为活血圣药。现代医学研究证实～血竭具有改善机体微循环、调整机体新陈代谢、改善机体免疫功能等作用。虽然血竭在国内的使用历史悠久～但在1972年以前一直是依靠东南亚和非洲进口～价格十分昂贵。1973年蔡希陶先生在云南思茅地区孟连县境内的石灰山上发现了大片可以产生血竭的龙血树～才暂时缓解了我国血竭的资源压力～从而诞生了国产龙血竭的历史。但是龙血树的生长非常缓慢～一年之内树干增粗还不到1厘米～龙血竭又为龙血树受伤后流出的红色液体～产量非常有限。而且随着医药观念的转变～越来越多的人群倾向于使用传统中医药来防病治病～中药资源的用量急剧上升～越来越多的药用植物趋于稀缺～甚至濒危。近年来～市场对龙血竭需求的不断扩大～目前龙血竭价格已涨到1000-1300元 /kg～致使人们对剑叶龙血树野生资源实施了不合理的掠夺性采伐～剑叶龙血树野生资源日趋枯竭～濒危灭绝～已经被国际上很多国家列为珍稀濒危保护植物。也由此出现了多种龙血竭的混伪品在全国各地市场上广泛流通～引发了恶性循环的市场现象和多起中毒事故。 目前对剑叶龙血树的研究主要在其药用价值方面～也就是对其药物化学成分的研究。对剑叶龙血树的植物形态、药材性状、形态解剖学和理化特征等也有一定的研究～这在一定程度上也为剑叶龙血树的生药学鉴定提供了一定的依据。 关于龙血树的组织培养方面的研究方面～目前的报道主要集中在海南龙血树～包括2005年以海南龙血树的幼嫩茎段为材料进行了组织培养的研究～建立了组织培养体系。以及为了克服愈伤组织成苗途径易产生突变苗和培养周期较长的不足～杨本鹏等以海南龙血树的顶芽和侧芽作为外植体～通过对培养材料和培养条件的系统研究～建立了海南龙血树腋芽萌生途径成苗的组织培养和快速繁殖体系～这些研究为其他龙血树的组织培养提供了参考。 关于剑叶龙血树组织培养方面的研究还比较少～经查阅《中华人民共和国国家标准批准发布公告》与《中华人民共和国地方标准备案公告》～目前剑叶龙血树组培种苗规范化生产无国家标准、行业标准～又无地方标准～因此～本标准的制定～为提供优质的剑叶龙血树种苗提供理论指导～对龙血树属种质资源保存和可持续利用具有重要意义。 二、标准编制及研究过程 1、标准编制过程 2012年开始～标准编制小组在广西中医药管理局下达的广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项,任务书编号:GZPT1234,“剑叶龙血树细胞悬浮培养的研究”的支持下开展剑叶龙血树组培苗繁殖技术研究～经过两年多的调查、研究和实践～掌握了剑叶龙血树组培苗规范化生产的技术～目前已经申请国家发明专利1项《一种剑叶龙血树组织培养快速繁殖方法》,、撰写相关研究论文1篇。 标准主管部门广西壮族自治区质量技术监督局下达2014第四批广西地方标准制定,修订,项目的通知,桂质监函[2014]381号,后～我们及时成立了以广西壮族自治区药用植物园韦莹为主持人～韦坤华、李林轩、李翠、黄宝优、缪剑华、王一诺、农东新为组员的标准编制小组～及时部署了工作和小组成员调研、编制工作时间安排表。在编制过程中～我们在广泛调查和试验研究的同时还咨询了相关权威专家～力争编制工作过程科学、严谨～方法、技术路线正确。 2、标准研究过程 前期研究发现～剑叶龙血树愈伤组织诱导及苗生长的影响因素有外植体、激素配比、培养条件等。相对而言～取剑叶龙血树芽为外植体愈伤组织发生时间早～但在培养过程中～污染率和长势均比种子诱导效果差～因而认为种子为最佳外植体,不同的植物生长调节剂浓度对愈伤组织性状存在差异～愈伤组织紧密或疏松～对芽的分化也有显著的影响,光照培养对剑叶龙血树愈伤组织发生时间、性状和出愈率 有较大影响～更有利于剑叶龙血树愈伤组织的诱导。前人研究发现剑叶龙血树愈伤组织易褐化～并在培养基中添加活性炭、PVP吸附剂抑制褐化～本研究利用活性炭作为褐化抑制剂～取得较好的抑制褐化效果。此外～编制小组对剑叶龙血树组培苗的壮苗生根、快繁技术进行了多次的正交试验～解决了组培苗褐化、繁殖率低等技术难题。 标准编制项目下达后～按照广西区质监局关于编制标准工作的要求～编制小组于项目实施期间～多次进行愈伤组织诱导、丛生芽分化等试验～筛选出各个培养阶段最佳激素配比和培养条件～并进行多次比较分析～确保数据及方法的科学性。同时～小组成员在编制过程多渠道去咨询内行专家～确保标准的可靠性。 编制小组根据标准的格式和编写方法～按照GB/T 1.1-2009的标准编写格式规定《剑叶龙血树组培种苗规范化生产技术规程》广西地方标准“工作组讨论稿”。根据专家反馈意见～编制小组对标准进行了进一步的修改和完善。并和相关科研单位、科研院校等多次沟通交流～借鉴其他研究者及专家的方法技术～对收到的反馈意见进行分析、采纳、修改～形成了本标准的征求意见稿。 三、标准编制原则 1、制定本标准的目的是规范剑叶龙血树组培苗生产～为解决龙血树属药用植物野生资源短缺提供快速繁殖的新方法和优质物种。 2、本标准的格式和编写方法执行GB/T 1.1-2009的规定。 3、本标准的制定力求科学、准确、系统～内容与当前广西剑叶龙血树组培苗生产的实际和社会经济状况紧密结合～可操作性强。 4、本标准规定了规定了剑叶龙血树组培苗的术语和定义、培育技术、包装、运输和生产档案。适用于剑叶龙血树组培苗生产公司和企业通过组织培养技术规范化生产组培苗。 5、本标准的编写以剑叶龙血树组培苗规范化繁育技术研究的数据为基本依据～同时结合了生产企业和市场流通现状。 四、主要技术内容的确定 1、范围 本标准规定了剑叶龙血树组培苗的规范化生产技术规程。 2、规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件～其随后所有的修改单,不包括勘误的内容,或修订版均不适用于本标准～然而～鼓励根据本标准达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件～其最新版本适用于本标准。 GB 4285 农药安全使用标准 3、主要技术内容 ,1,组培瓶苗培育 组培瓶苗的培育包括外植体的选择、外植体的消毒、外植体接种、诱导培养、继代培养、壮苗培养和生根培养7个部分。 ,2,驯化苗培育 驯化苗培育包括苗床选址、苗床灭菌、苗床构建、移栽炼苗前处理、移栽炼苗、苗床育苗管理和苗期病虫害防治7个部分。 ,3,病虫害防治 剑叶龙血树组培苗育苗期常见的病虫害为红蜘蛛等螨类害虫～病虫害的防治参照GB 4285 农药安全使用标准进行。 五、与现行法律、法规和强制性标准的关系 本标准,征求意见稿,是依据《中华人民共和国标准化法》、《中药材生产质量管理规范》、《广西中药材标准》等国家相关的法规和强制性标准的基础上结合地方实际情况制定出来的～因此与现行法律、法规及强制性标准无冲突。 六、实施标准的要求和措施建议 标准必须是在遵循法律法规及国家相关标准的前提下～综合剑叶龙血树组培苗生产企业的实际要求制定～标准必须具有法律依据及可操作性。 将《剑叶龙血树组培种苗规范化生产技术规程》作为推荐性标准试行一年后～对不完善的地方加以完善和修正～为进一步规范市场～建议该标准为强制性地方标准。 参考文献 1. 林芹,黎明,雷震鸣,李科,等.剑叶龙血树的质量标准研究[J],Journal of Guangxi Traditional Chinese Medical Universit,2012,15,2,56-58. 2. 黄莉雅,陈国臣,马锦林.剑叶龙血树芽外植体诱导分化[J],广西林业科学, 2010,39,3,144-146. 3. 杨晓虹,侯思名,和凤美,等.剑叶龙血树愈伤组织的诱导及其增殖培养研究[J],昆明学院学报 2009,31(6):64-66. 标准编制小组 2014年8月19日