纤维蛋白胶对兔结膜黏合作用的研究

纤维蛋白胶对兔结膜黏合作用的研究 纤维蛋白胶对兔结膜黏合作用的研究 第28卷第2期 2007年4月 暨南大学(医学版) JournalofJinanUniversity(MedicineEdition) VO1.28No.2 Apr.2007 纤维蛋白胶对兔结膜黏合作用的研究 陈建苏,梁晓东,余国荣,沈闲茹,戴本启,郑佩娥.,赵松滨 (暨南大学医学院1.眼科学教研室;2.临床医学系;3.病理学教研室,广东广州510632) [摘要]目的:研究纤维蛋白胶对结膜上皮的黏合作用,为纤维蛋白胶在结膜组织黏合中的临床应用提供依 据.方法:将20只雄性新西兰白兔左右眼根据不同术式分为3组:1)暴露组(15只术眼);2)植片原位移植组(15 只术眼);仿翼状胬肉术式组(10只术眼),观察术后结膜上皮组织黏合情况,炎症反应,上皮化及瘢痕形成情况. 结果:植片组与仿翼状胬肉术式组术后3d炎症反应较轻,2周内均实现完全上皮化,组织切片显示瘢痕组织形成 较少.结论:纤维蛋白胶在兔结膜自体移植中能安全有效地起到黏合作用,有效缩短手术时间,减轻术后炎症反 应,减少瘢痕组织形成. [关键词]纤维蛋白胶;结膜上皮;翼状胬肉 [中图分类号]R779.62[文献标识码]A[文章编号]1000—9965(2007)02—0152—05 Studyonfibringlue~cohesiveeffectwithrabbitconjunctivalepithelium CHENJian.SU,LIANGXiao.dong,SHEGuo.rong,SHENXian.131, DAIBen.qi,ZHENGPei.e,ZHAOSong.bin (1.DepartmentofOphthalmology;2.DepartmentofClinicalMedicine; 3.DepartmentofPathology,MedicalCollege,JinanUniversity,Guang~ou510632,China) [Abstract]Ain1.Studyingthecohesiveeffectoffibringluewiththeconjunctivalepithelium,provide evidenceforclinicalapplication.Methods:20rabbitsareappliedtothreeoperatingstyles:exposed group(15eyes),implantedgroup(15eyes),pterygialgroup(10eyes).Observepostoperativeconglu. tinanteffect,inflammatoryreaction,reepithlializationandscarformationofconjunctivalepithelium.Re- suits:Inflammatoryreactionofimplantedgroupandpterygialgrouparerelativelyslightthreedaysafter operation.Intwoweeks,theywerecoveredwithepitheliallayercompletely,histologicalsectionshowed thatthereconstructionofthedamagedconjunctivaltissuewithlessscarformation.Conclusion:Fibrin glueisasafeandeffectivemethodforattachingconjunctivalautografts.Theuseoffibringlueresultsin shorteroperatingtimes,lesspostoperativeinflammatoryreactionandscarformation. [Keywords]fibringlue;conjunctivalepithelium;pterygium 纤维蛋白胶(fibringlue,FG)是一种生物止血 和黏合剂,它模拟体内的凝血过程,具有一定的可塑 性和黏附性,且无排斥反应和毒副作用,在眼睑成型 术,封闭角膜溃疡穿孔,闭合角,结膜及白内障手术 切口等眼科领域的应用均有报道….翼状胬肉是 眼科常见病,在广东部分沿海地区尤其多发.目前, FG黏合角膜缘结膜自体移植是临床治疗翼状胬肉 的热点,针对FG黏合自体结膜移植相关基础研 究报道较少的现状,我们进行了FG在兔结膜上黏 合效果的研究,拟探讨FG黏合结膜及角膜缘上皮 [收稿日期]2006—10—16 [基金项目]国家自然科学基金项目(30371519);暨南大学侨办重点学科(51205004); 暨南大学挑战杯大学生学术科技活动研究项目 [作者简介]陈建苏(1961,),女,研究员,博士,博士生导师,研究方向:角膜病与眼表 疾病 第2期陈建苏,等:纤维蛋白胶对兔结膜黏合作用的研究153 后在促进上皮再生,伤口愈合及提高植片吻合效果 等方面的情况,对这些客观指标做出评价,为FG在 眼科领域的临床应用提供实验支持. 1和方法 1.1实验动物及分组 健康雄性新西兰白兔20只(体质量为2.0, 2.5kg),常规裂隙灯检查排除眼部病变.40只术 眼以不同术式分为3组:暴露组(15只术眼单纯切 除部分含固有层的结膜上皮);植片原位移植组(15 只术眼取下结膜上皮瓣后再将结膜瓣原位黏合); 仿翼状胬肉术式组(10只术眼做翼状胬肉切除模 型,取术眼原位角结膜瓣黏合). 1.2纤维蛋白胶的术前配制 纤维蛋白胶(fibringlue,FG)由广州倍绣生物技 术有限公司提供,FG试剂盒包括纤维蛋白原冻干 粉,抑肽酶溶液,凝血酶冻干粉,氯化钙溶液4种成 分.在需要黏合前半小时即需进行蛋白胶的配制. 将纤维蛋白冻干粉充分溶解于2.5mL抑肽酶溶液 中,凝血酶冻干粉亦溶解于另一个2.5mL氯化钙溶 液中.使用前,另取两支1mL注射器分别吸取等量 溶液,接上双联注射头备用. 1.3手术方法 实验兔用质量分数为3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)耳缘静脉注射麻醉,氯丙嗪(25mg/kg)肌肉 注射,盐酸奥布卡因滴眼液眼表麻醉,手术显微镜下 无菌操作. 暴露组:暴露眼球鼻侧上直肌与内直肌之间球 结膜,在距角膜缘1mm处用直径为7lllnl环钻沾台 盼蓝轻压,标记出结膜瓣位置,从此结膜瓣外进针, 结膜下注射少许质量分数1%利多卡因加质量分数 0.1%肾上腺素混合液,使标记处结膜隆起,便于分 离.显微镜下沿标记线剪取结膜上皮,做成圆形外 科创口并切除相应结膜下的Tenon囊,暴露巩膜. 在穹隆结膜下注射庆大霉素,滴氯霉素眼药水,涂四 环素眼膏. 植片原位移植组:术前准备及剪取结膜植",暴 露植床操作同上.植片原位放好,注意保持上皮面 向上.用镊子在植片上轻压固定,植片下放人双联 注射器针头,注射一薄层胶体,用虹膜恢复器将植片 迅速平展,同时镊子固定植片,使植片与周围结膜对 合良好.必要时可于受体结膜边缘注射胶体.良好 固定后,将多余的FG剪除,在穹隆结膜下注射庆大 霉素,滴氯霉素眼药水,涂四环素眼膏后用5—0丝 线缝合眼睑. 仿翼状胬肉术式组:用角膜穿刺刀于角膜中央 划开一浅界,深可达角膜前弹力层,由此界开始向9 点钟方向按照胬肉切除的方法在同一深度剖切角 膜,作一圆心角为30.的扇形角膜植床,继续剥离浅 层巩膜至角膜缘外2,3mm,制成约24mm的角巩 膜植床,同时将获得的角结膜植片,作原位黏合.喷 胶注意事项及术后处理同植片组. 1.4术后眼部一般情况观察 术后第2日拆除眼睑缝线,每日氯霉素眼液滴 眼一周,6次/日.密切观察有无感染;植片有无水 肿,脱落或移位;角膜内有无新生血管长人.术后1 周荧光素钠上皮染色,观察上皮化情况. 1.5组织学检查 各组分别在术后第2周,第4周处死实验兔(各 l0只),无菌条件下摘取眼球,自结膜植床和植片区 以及相应角膜缘取出组织片,AF液固定,二甲苯透 明,常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察. 2结果 2.1术中观察 制备术眼植床时角巩膜缘少量渗血.拭干植 床,喷出FG,30S左右即凝固成胶.应用FG后渗血 减少并很快止血.植片与植床对位良好,黏合紧密, 两者之间无气泡,植片边缘未见翻卷,角膜上皮呈扇 形缺损,边界清晰,周围结膜轻度充血水肿. 2.2术后眼部一般情况 术后48h,拆除眼睑缝线,观察角膜未见水肿, 用充血水肿状态表示炎症反应程度,结膜炎症反应 情况如表1所示. 表1术后暴露组,植片原位移植组 及仿翼状胬肉术式组炎症反应情况只 1)无充血水肿;2)轻度充血,无水肿;3)充血水肿;4)充血水肿, 有炎性分泌物 术后第2,3日的炎症反应情况示:植片原位移 植组与仿翼状胬肉术式组较暴露组轻.进行秩和检 验统计学分析显示:术后第2日,暴露组与植片原位 移植组Z=2.119,P=0.034,在OL=0.05检验水准 下,可认为两组存在统计学差异,植片原位移植组术 暨南大学(医学版)第28卷 后第2Et的炎症反应程度较轻;暴露组与仿翼状胬 肉术式组Z=1.031,P=0.303,在=0.05检验水 准下,尚不能认为两组存在统计学差异.术后第3 日,暴露组与植片原位移植组z=2.089,P=0.037, 在O/=0.05检验水准下,可认为两组存在统计学差 异,植片原位移植组术后第3日的炎症反应程度较 轻;暴露组与仿翼状胬肉术式组Z=1.291,P= 0.197,在O/=0.05检验水准下,尚不能认为两组存在 统计学差异. 2.3结膜上皮愈合情况 术后3日,植片原位移植组两只术眼因水肿较 严重,观察照相时不慎,致使植片脱落.其它术眼植 片在位.术后第7日,术眼荧光素染色情况示暴露 组染色阴性较植片原位移植组略多.术后第14日, 术眼植片表面完全上皮化,荧光素染色未见着色,表 面光滑.各组染色情况如图1,表2所示. A 表2术后暴露组,植片原位移植组及 仿翼状胬肉术式组兔眼荧光素染色情况只 1)术野芡光素染色;2)术野边缘荧光系染笆;3)术野荧光系尢染色 荧光素染色情况显示:术后1周时,暴露组上皮 再生速度较快;术后2周时,两组兔眼结膜均有上皮 覆盖.对术后1周的荧光素染色情况进行秩和检验 统计学分析显示:暴露组与植片原位移植组Z= 0.803,P=0.422,在O/=0.05检验水准下,尚不能 认为两组存在统计学差异;暴露组与仿翼状胬肉术 式组Z=0.119,P=0.905,在O/=0.05检验水准下, 尚不能认为两组存在统计学差异 A荧光素染色阴性的仿翼状胬肉术式组:B荧光素染色阳性的仿翼状胬肉术式组;C荧光素染色I1月性的暴磷绀; D荧光素染色阳性的暴露组;E荧光素染色阴性的植片原位移植组;F荧光素染色阳性的植片原位移植组 图1三组术后2周上皮荧光素染色 2.4组织学检查结膜为规整的新生上皮覆盖,炎症基本消退,纤维层 光镜下观察2周及4周剪取的各组结膜上皮组中的纤维结构相对纤细,与生理结膜组织的结构类 织病理切片.结果如下:似,无明显的瘢痕组织特征(图3B,3C). 暴露组:2周时切片显示结膜组织中有较多炎仿翼状胬肉术式组:2周时结膜组织炎症反应 症细胞浸润,可见新生毛细血管长人,尚未出现瘢痕亦较重(图4A),4周时愈合良好,未见明显的瘢痕 组织(图2A).4周时,结膜上皮生长有局部脱落组织(图4C),角膜部植片炎症基本消退,植片植床 区,炎症反应较前消退,纤维层中的纤维组织较粗黏合紧密,角膜上皮细胞再生(图4B). 大,伊红深染色,显示瘢痕组织结构特征(图2B,虽两周时各组炎症反应普遍较重,但4周后的愈 2c)合情况显示暴露组植床缺损面上皮再生情况相对较 植片原位移植组:2周时结膜组织有薄层新生差,部分由肉芽组织改建形成的纤维结缔组织增生修 上皮生长,腺样层中炎症反应较重(图3A),4周时,复,瘢痕化程度严重,植片组的情况则相对较好. 156暨南大学(医学版)第28卷 细菌的生长,具有良好的生物相容性.Lee等训的 研究表明,FG能有效减少组织挛缩和瘢痕形成. Koranyi等…则通过长期随访发现,FG的使用能显 着降低术后翼状胬肉的复发率. 3.3本实验的特点及观察 实验通过对单纯暴露结膜,结膜瓣原位黏合及 用带有角膜缘干细胞的结膜瓣进行翼状胬肉模型植 片黏合3组之间的比较,对FG黏合结膜和角膜缘 组织的效果进行研究.发现FG的应用在手术操作 及术后恢复上均有一定的优势. 术中观察发现,FG喷胶30s内即完全凝固,黏 合效果安全有效.其应用与传统缝线相比能有效缩 短手术时间,避免长时间手术对眼部的影响,减少术 中出血及对眼表组织的损伤. 术后观察显示,与单纯暴露相比,植片的良好黏 合填补了易致细菌生长的植床暴露面,同时由于FG 抑制细菌生长,具有良好的生物相容性,植片原位移 植组及仿翼状胬肉术式组的术眼术后3日内炎症反 应普遍较轻.术后1周内,有植片黏合的术眼上皮 再生速度稍慢,2周后,各组均完全为上皮覆盖.与 Lee等的实验观察结果基本一致?.由于缺乏结膜 上皮植片,暴露组的创面在修复过程中由新生肉芽 组织长人,并进一步形成纤维结缔组织而瘢痕化. 组织病理切片显示植片黏合的术眼结膜瘢痕化程度 较暴露组轻,这同时与FG能将植片底面完整黏合, 促进植片早期血管化,提高植片的成活率,为表面重 建提供光滑界面的特性有关. 在选取手术范围后,用固定大小(7咖)环钻沾 上台盼蓝,对预取结膜上皮进行标记,有助于准确把 握手术范围,保证所取植片大小的一致性,使之与对 照组更具可比性.喷FG前应注意:植床先用平衡 盐溶液充分冲洗后尽量擦干?,保持创面干燥,有 利于提高黏合效果.从本研究结果看,应用FG行 无缝线结膜上皮黏合能有效缩短手术时间,减少术 后并发症,改善愈合效果,是一种安全有效的方法, 具有良好的临床应用前景. [参考文献] [I]CHANSM,BOISJOLYH.Advancesintheuseofadhe. sivesinophthalmology[J].CurrOpinOphthalmol. 2004,15(4):305—310. [2]PFRISTERRR,SOMMERSCI.brinsealantinCo/'ne. alstemcelltransplantation[J].Cornea,2005,24(5): 593—598. 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