大鼠二胺氧化酶（DAO）酶联免疫分析

大鼠二胺氧化酶（DAO）酶联免疫 大鼠二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围: 96T 25 IU/L -800 IU/L 使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中二胺氧化酶(DAO)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的大鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 nm转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准 品(1600IU/L) 0.5ml ×1瓶 3酶标包被 板 12孔×8条9 标准品 稀释液1.5 ml×1瓶 4 样品 稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶12 密封袋 1个 标本要求 1(标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融 2(不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 800 IU/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400 IU/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 200 IU/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 100 IU/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 50 IU/L1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37?温育30分钟。 4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37?避光显色 15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结: 1.准备试剂，样品和标准品 2.加入准备好的样品和标准品，37?反应30分钟 3.洗板5次，加入酶标试剂，37?反应30分钟 4.洗板5次，加入显色液A、B，37?反应10分钟 5.加入终止液 6.15分钟之内度OD值 7.计算 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1(试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2(浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3(各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5( 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6(底物请避光保存。 7(严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8(所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9(本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1(试剂盒保存:;2-8?。 2(有效期:6个月