清热排毒颗粒

清热排毒颗粒 清热排毒颗粒质量研究 【处方】略 【制法】略 【性状】本品为黄棕色至棕褐色的颗粒;气微，味苦。 【鉴别】(1)取本品，置显微镜下观察?不规则分枝状团块淡黄色至黄色，遇水合氯醛溶液渐溶化;菌丝无色或淡棕色，直径 4,6m。石细胞单个散在或数个相聚，类方形、长方形、卵圆形或圆三角形，直径 20,70m，纹孔明显，有的胞腔内含淡棕色物。 (2)取本品 30g，研细，置索氏提取器中，加乙醚 100ml，于 60?水浴中回流 4 小时，取乙醚液挥干，残渣用石油醚(30,60?)浸泡 2 次，每次 15ml ，(约浸泡 2 分钟) 弃去石油醚液，残渣加三氯甲烷,甲醇(10:1)混合溶液 10ml，分数次溶解，移置具塞锥形瓶中，加中性氧化铝 5g，振摇 5 分钟，静置，滤过，滤渣再加三氯甲烷,甲醇(10:1)混合溶液 15ml，振摇 5 分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加三氯甲烷,无水乙醇(2:3)混合溶液 2ml 微热使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取上述两种溶液各 5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠 三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇(20?5?8?为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以环己烷— 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (3)取本品 10g，研细，加甲醇 50ml，超声处理 30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，加盐酸 0.2ml，置水浴中加热 30 分钟，置冰水浴中迅速冷却，用乙醚 20ml，振摇提取 3 分钟，分取乙醚液，挥干，残渣加甲醇 2ml 使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取供试品溶液 5l，对照品溶液 1l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以石油醚(30,60?),甲酸乙酯,甲酸(15:6:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 4取本品 50g，研细，加乙醚振摇提取两次(80ml，40ml)每次 10 分钟，弃去乙醚液，残渣加盐酸—甲醇(1?100)混合溶液 80ml，加热回流 1 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 20ml 使溶解，用水饱和的正丁醇?崛?2 次，每次 30ml，合并正丁醇液，用氨试液提取 2 次，每次 40ml，弃去氨液，正丁醇液用水洗涤 2次，每次 30ml， 弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，滤过，滤液加于已处理好??D101 型大孔吸附树脂柱(内径 1cm，长 12cm)上，用水 50ml洗脱，弃去洗脱液，再用 40乙醇 30ml 洗脱，弃去洗脱液，继用 70乙醇 50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 0.5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取供试品溶液 15,20l，对照品溶液 2,4l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以正丁醇—乙酸乙酯—水(4?1?5)的上层溶液—甲醇(10?1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸中展开，取出，晾干，喷以 10硫酸乙醇溶液，在 105?烘约 5 分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典 2010 年版一部附录? C)。 【含量测定】牡丹皮 取本品 20g，研细，取 3g，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约 450ml，置 500ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液。照分 光光度法(中国药典 2010 年版一部附录? A)，在 276nm 1波长处测定吸收度，按丹皮酚(C9H10O3)的吸收系数(E 1cm )为 862 计算，即得。 本品每 1g 含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，不得少于 0.80mg。 虎杖 照高效液相色谱法(中国药典 2010 年版一部附录? D)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇,0.1磷酸溶液(85:15)为流动相;检测波长为 290nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于 6000。 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量，加无水乙醇—乙酸乙酯(2 :1)混合溶液制成每 1ml 含 0.025mg 的溶液，即得 供试品溶液的制备 取本品 20g，研细，取 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 50ml，称定重量，置 70?水浴加热 75 分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25ml，置锥形瓶中，蒸干，加 30乙醇—盐酸(10:1)混合溶液 20ml，置沸水浴中加热回流 60 分钟，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取 3 次，每次 25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用无水乙醇—乙酸乙酯(2 :1)混合溶液溶解，转移至 5ml 量瓶中，并稀释至刻度， 测定法 分别精密吸取对照摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。 品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每 1g 含虎杖以大黄素(C15H10O5)计，不得少于 0.30mg。 【功能主治】清热解毒，用于湿热下注所致尿频，尿急，尿痛等。 【用法用量】口服，一次 6g(一袋)，一日 3 次。 【禁忌】孕妇禁用。 【注意】儿童慎用。 【规格】每袋 6g。 【贮藏】密封 【有 、制法研究 详见效期】2 年三、成品质量标准(草案)起草说明 清热排毒颗粒 1研究资料 12“生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及质量标准”。 2、性状研究 自然光下检测批号为 100501、100502、100503 的三批中试样品和批号为100601、100602、100603 的三批小试样品，颜色为黄棕色的颗粒，气微，微苦。 三、鉴别研究 参照《中华人民共和国药典》2010 年版一部中各单味药的质量标准以及相关文献资料制定本产品质量标准(草案)。标准(草案)中各项鉴别内容的研究情况分述如下: 1. 制剂中茯苓的鉴别 鉴别方法: 取本品，置显微镜下观察?不规则分枝状团块淡黄色至黄色，遇水合氯醛溶液渐溶化;菌丝无色或淡棕色，直径 4,6m。石细胞单个散在或数个相聚，类方形、长方形、卵圆形或圆三角形，直径 20,70m，纹孔明显，有的胞腔内含淡棕色物。显微特征明显，故收入正文。 2. 制剂中山茱萸的鉴别 鉴别方法: 供试品溶液:取本品 30g，研细，置索氏提取器中，加乙醚 100ml，于 60?水浴中回流 4 小时，取乙醚液挥干，残渣用石油醚(30,60?)浸泡 2 次，每次 ，弃去石油醚液，残渣加三氯甲烷,甲醇(10:1)混合溶15ml(约浸泡 2 分钟)液 10ml，分数次溶解，移置具塞锥形瓶中，加中性氧化铝 5g，振摇 5 分钟，静置，滤过，滤渣再加三氯甲烷,甲醇(10:1)混合溶液 15ml，振摇 5 分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加三氯甲烷,无水乙醇(2:3)混合溶液 2ml 微热使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。 对照品溶液:另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。 展开剂:以环己烷? 燃淄椤 宜嵋阴ァ 状迹?0?5?8?1)为展开剂。 色谱法:照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取上述两种溶液各 5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以环己烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇(20?5?8?1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。 结果:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的斑点，斑点分离好，清晰，空白对照无干扰，故收入正文。 1 2 3 4 图 2 制剂中熊果酸的 TLC 鉴别 1、空白对照 2、成品 100501 3、成品 100502 4、熊果酸对照品 3. 制剂中虎杖的鉴别 鉴别方法: 供试品溶液:取本品 10g，研细，加甲醇 50ml，超声处理 30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，加盐酸 0.2ml，置水浴中加热 30 分钟，置冰水浴中迅速冷却，用乙醚 20ml，振摇提取 3 分钟，分取乙醚液，挥干，残渣加甲醇 2ml 使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液:另取大黄素对照品，加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。 展开剂:石油醚(30,60?),甲酸乙酯,甲酸(15:6:1)。 色谱法:照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取供试品溶液 5l，对照品溶液 1l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以石油醚(30,60?),甲酸乙酯,甲酸(15:6:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。 结果:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点分离好，清晰，空白对照无干扰，故收入正文。 图 3 制剂中虎 1 成品 100501 2 成品 100502 3 成品 100503 4 虎杖对照品 5 杖的 TLC 鉴别 缺虎杖阴性制剂 4. 制剂中黄芪的鉴别 本鉴别方法是参照 2010 年版《中国药典》一部“黄芪”鉴别(2)制定的。 供试品溶液:取本品 50g，研细，加乙醚振摇提取两次(80ml，40ml)每次 10 分钟，弃去乙醚液，残渣加盐酸—甲醇(1?100)混合溶液 80ml，加热回流 1 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 20ml 使溶解，用水饱和的正丁醇提取 2次，每次 30ml，合并正丁醇液，用氨试液提取 2 次，每次 40ml，弃去氨液，正丁醇液用水洗涤 2 次，每次 30ml， 弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，滤过，滤液加于已处理好的 D101 型大孔吸附树脂柱(内径 1cm，长 12cm)上，用水 50ml 洗脱，弃去洗脱液，再用 40乙醇 30ml 洗脱，弃去洗脱液，继用 70乙醇 50ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 0.5ml 使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液:另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。 展开剂:正丁醇—乙酸乙酯—水(4?1?5)的上层溶液—甲醇(10?1)。 色谱法:照薄层色谱法(中国药典 2010 版一部附录? B)试验，吸取供试品溶液 15,20l，对照品溶液 2,4l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以正丁醇—乙酸乙酯—水(4?1?5)的上层溶液—甲醇(10?1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸中展开，取出，晾干，喷以 10硫酸乙醇溶液，在 105?烘约 5 分钟。 结果:供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点斑点分离好，清晰，空白对照无干扰，故收入正文。 结果显示，检视效果良好，见下图。阴性样品无干扰。阴性样品溶液的制备方法与供试品溶液方法相同。 图 4 制剂中黄芪的 TLC 鉴别 1 成品 100501 2 成品 100502 3 成品 100503 4 黄芪甲苷对照品 5 缺黄芪空白制剂 5. 制剂中金沙藤的鉴别 金沙藤为广西药材，其鉴别尚在研究中，尚未有确切的方法，故未收入正文。 6. 制剂中大血藤的鉴别 金沙藤为广西药材，其鉴别尚在研究中，尚未有确切的方法，故未收入正文。 7. 制剂中蒲公英的鉴别 参照中国药典 2010 版一部蒲公英项，对制剂进行鉴别研究，结果表明:在供试品色谱中，在与对照品相同的位置，缺蒲公英阴性样品有干扰，故未收入正文。实验方法如下: 取本品粉末 10g，加甲醇 20ml，加热回流 30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml 使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取 2 次? 看?10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取咖啡酸对照品，加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录? B)试难，吸取上述两种溶液各 6μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见下图: 图 5 制剂中蒲公英的 TLC 鉴别 1 成品 100501 2 成品 100502 3 成品 100503 4 蒲公英药材 5 缺蒲公英阴性制剂 本标准中未建立土茯苓的鉴别方法。 8. 制剂中泽泻的鉴别 曾参照文献方法，以泽泻药材为对照，对制剂中泽泻苷醇类成分进行鉴别研究，未能检出相应斑点。实验方法如下: 取本品 25g 研细，加入 70乙醇 100 ml，浸泡 2h 后，回流 3h，放冷，抽滤，滤液在水浴上浓缩，浓缩液用氯仿萃取，萃取液调整至 5 g/ml。萃取后的残液用 70乙醇溶解调整至 2 g /ml，作为供试品溶液。另取缺三棱阴性样品 25 g，三棱对照药材 5 g，同法制成阴性样品溶液和对照药材，分别取上述溶液 5 μl，点于用自制硅胶 G-CMC Na 铺板上，展开剂为:A展乙醇提取物:乙酸乙醋-甲酸- B展氯仿提取物:氯仿-乙酸乙醋6 : 1。显色剂为 1三氯化铝的醇溶液。在水8:1:1; 紫外灯下 365nm 下观察荧光斑点。在供试品色谱上，未能检出相应斑点。 本标准中未建立泽泻的鉴别方法。 9. 制剂中益母草的鉴别 曾参照 2000 年版《中国药典》一部“益母草”鉴别(3)进行鉴别，以益母草素为对照进行鉴别研究，未能检出相应斑点。 10. 制剂中地黄的鉴别 曾参照文献 9 方法，以地黄药材和齐墩果酸为对照，以石油醚-乙醚-乙醇(10:10:1)为展开剂，对石油醚提取部位进行薄层色谱鉴别研究，结果未能检出相应斑点。 原因:本制剂应用的是水煎煮提取部位，不可能检出石油醚可溶性成分，包括齐墩果酸。 本标准中未建立地黄的鉴别方法。 11. 制剂中牡丹皮的鉴别 正文已对牡丹皮的丹皮酚作含量规定，因此本标准中未建立牡丹的鉴别方法。 12. 制剂中山药的鉴别 参照郑虎占等主编的《中药现代研究与应用》第一卷 564 页山药的鉴别进行了 TLC 鉴别研究。实验方法如下: 取本品 4 g，研成细粉，置具塞锥形瓶内，加乙醇 20ml，超声振摇提取 20 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性样品溶液。另取山药对照药材 1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录? B)试验，吸取上述两种溶液各 10μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以氯仿-甲醇-水(14?5?1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10,硫酸乙醇溶液，在 105?加热至斑点显色清晰。供试品和阴性样品的色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点。说明阴性样品对产品中山药的鉴别有干扰。后经比较发现，阴性干扰来自莪术。结果见图 6。 图 6 制剂中山药的 TLC 鉴别 1 成品 100501 2 成品 100502 3 成品 100503 4 缺山药阴性制剂 5 缺山药阴性制剂 6 山药对照药材 7 山药对照药材 本标准中未建立山药的鉴别方法。 四、检查 1. 粒度 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 I C 进行检查，结果见表1。 表 1 三批中试样品的粒度检查结果(n3) 批 号 100501 100502 100503 水分() 4.56 5.04 5.30 检查结果表明:三批中试样品的粒度含量都符合规定(不得超过 15)。 2. 水分检查 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 IX H 第一法进行检查，结果见表 1。 表 1 三批中试样品的水分检查结果(n3) 批 号 100501 100502 100503 水分() 5.51 5.64 5.68 检查结果表明:三批中试样品的水分含量都符合规定(不得超过 9)。 3. 装量差异 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 I C 装量差异检查法进行检查，结果见 表 3。 表 3 三批中试样品的装量差异检查结果n10 单位:g 批 号 100501 100502 100503 标示量 6 6 6 允许范围 5.76.3 5.76.3 g 5.76.3 g 实测值 3.94 3.06 3.04 检查结果表明:三批中试样品的装量差异都符合规定(重量差异限度为平均值的?5.0)。 4. 溶化性 照《中国药典》2010 年?嬉徊扛铰几铰?I C 溶化性检查法进行检查。结果见表 4。 表 4 三批中试样品的溶化性检查结果(n6，单位:分钟) 批 号 100501 100502 100503 结果 全部溶化 全部溶化 全部溶化 检查结果表明:三批中试样品的溶化性都符合规定。 5. 微生物限量 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 XIII C 微生物限度检查法进行检查，结果见表 5。 表 5 三批中试样品的微生物限度检查结果 批 号 100501 100502 100503 细 菌 数 小于 100 小于 100 小于 100 霉菌、酵母菌数 小于 10 小于 10 小于 10 大肠杆菌 未检出 未检出 未检出 大肠埃稀菌 未检出 未检出 未检出 检查结果表明:三批中试样品的微生物限度都符合规定(细菌数小于 30000，霉菌、酵母菌数小于 100，大肠杆菌不得检出)。 6. 重金属 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 IX E 重金属检查法第四法进行检查，结果表明，三批中试制剂中总重金属含量均小于 10 ppm。因此，不列入标准。 7. 砷盐 照《中国药典》2010 年版一部附录附录 IX F 砷盐检查法第一法进行检查，结果表明，三批中试制剂中砷盐含量均小于 2 ppm。因此，不列入标准。 五、含量测定 1、牡丹皮 含量测定: 方法 取本品 20g，研细，取 3g，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约450ml，置 500ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过， A)，在 弃去初滤液，取续滤液。照分光光度法(中国药典 2010 年版一部附录?276nm 波长处测定 1吸收度，按丹皮酚(C9H10O3)的吸收系数(E 1cm )为 862 计算，即得。 三批中试样品的丹皮酚含量测定结果 批 号 100501 100502 100503 实测值 1.87mg/g 1.94mg 1.90mg 结果 本品丹皮含量为“本品每 1g 含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，不得少于 0.80mg” ，符合规定。 2、虎杖的测定 2.1 虎杖含量测定研究 2.1.1 测定条件及方法 2.1.1.1仪器:仪器:高效液相仪(柱温: 30? 泵压:12.1,12.2 Mpa，色谱柱: 250cm×4.6cm 5.0um C18柱，理论板数: 规定应?6000 工作站:Trisep—2003，紫外检测器型号: EasySepTM-1010UV 高压输液泵型号:EasySepTM-1010LC，高效液相仪器生产厂家: 上海通微分析技术有限公司);BS124S型电子天平;HU3120型超声仪。 2.1.1.2 试剂:玻璃薄板〔5cm×10cm〕，双槽玻璃层析缸，甲醇、盐酸、乙醚、三氯甲烷、羧甲基纤维素钠、硅胶 G、石油醚(30,60?)、甲酸乙酯、甲酸、紫外光灯365nm、254nm、氨、硅胶 GF254、正己烷、乙酸乙酯、、硫酸、乙醇、硅胶,、香草醛均为市售，分析纯;清热排毒颗粒(批号:100101 100102100103 100104 100201 100202 100203 100501 100502 100503，我公司自行提供);甲醇(色谱纯) ;磷酸(分析纯) ;水(纯化水) 。 2.1.1.3 色谱条件 用十八烷基硅键合硅胶为填充剂;以甲醇,0.1 磷酸溶液(85?15)为流动相;检测波长为 254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于 2000。 2.1.1.4 检测波长:定检测波长 290nm。 2.1.1.5 流动相:定流动相为:甲醇,0.1 磷酸溶液(85?15)。 2.1.1.6 对照品贮备液的制备:精密取大黄素对照品适量，加无水乙醇,乙酸乙酯(2?1)混合溶液制成每 1ml 含大黄素 0.1mg 的溶液，即得。 2.1.1.7 对照品溶液的制备: 取大黄素对照品适量，加无水乙醇,乙酸乙酯(2?1)混合溶液制成每 1ml 含大黄素 0.025mg 的溶液，即得。 2.1.1.8 供试品溶液的制备: 取本品 20g，研细，取 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 50ml， 置 称定重量， 70?水浴加热 75 分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25ml，置锥形瓶中，蒸干，加 30乙醇—盐酸(10:1)混合溶液 20ml，置沸水浴中加热回流 60 分钟，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取 3 次，每次 25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用无水乙醇—乙酸乙酯(2 :1)混合溶液溶解，转移至 5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。 2.1.1.9 空白样品溶液的制备:取以用淀粉代替虎杖细粉制成的样品 0.3g，按“供试品溶液的制备”方法制成空白对照溶液。 2.1.1.10 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件依法测定，即得。 2.1.1.11 特性测定结果: 取对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液各 10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件依法测定，结果见下图: mV 160 140 120 8.870 大大大 100 80.