猴头菌对实验大鼠胃粘膜保护作用的研究

猴头菌对实验大鼠胃粘膜保护作用的研究 胃肠病学1999年第4卷第2期 猴头菌对实验大鼠胃粘膜保护作用的研究 于成功徐肇敏祝其凯张志宏陈载融孙春洪章宜芬王宁 南京大学医学院附属鼓楼医院消化内科(21o008) 目的:探讨猴头菌对实验大鼠胃牯膜损伤的保护作用及可能机制.方法:在无水乙醇形成大鼠胃粘膜损伤模型 前后.应用猴头菌给予预防和治疗.观察胃粘膜损伤程度及病理改变:并检测胃粘膜氮基己糖及血浆胃泌素含量.结 果:预服猴头菌2周后溃疡抑制率为62%.治疗2周后溃疡抑制率为91%;猴头菌能增进大鼠食欲并可明显减轻胃牯 膜的充血,出血水肿和坏死;减轻粘膜下炎细胞提润;促进粘膜氮基己糖的恢复:防止胃泌素的升高.结论:猴头菌对 胃粘膜有良好的细胞保护作用. 关键词猴头菌胃粘膜细胞保护 CytoprotectiveEffectsofHericiumErinaceusollGastricMucosainRatsYuC heng-gongXu Zhao-rainZhuQbkai,eta1.NawingGutouHospitalNa巧ingUniversityMedicalCoftege,Naing tooos) Background/Aims:TodeterminethecytoprotectiveeffectsandmechanismofHericiumErinaceus ongastricmucosainrats.Methods:TheratsweretreatedwithHericinmErinaceusbeforeorafter receivingabsoluteethanolbyintragastricintubation.Thedamagedegreeofpathologyingastric lllUcosa,themucosa]hexosamineandtheplasmagastrinlevelsweFemeasuredrespectively.Results: Theinhibitiveratesofulcerwere62%and91%inthepreventiongroupandtreatmentgroupwith HericiumEmnaceus,respectively.HericiumErinaceusplayedaroleofpromotingtheratappetiteand decreasingthedegreesofedemaorhemorrhagicnecrosisingastricmucosaandinflammatorycell infiltrationinsubl21ucosaAftergastricmucosawasinjuredbyethanol,thelevelsofhexosaminewere decreasedsignificantlyfP<0.o1)HericiumErinaceusincreasedthelevelsofhexosamineandprevented theincreasingofplasmagastrinConclusions:HericiumErinaceushascytoprotectiveeffectsoil gastricmucosainrat. KeywordsHericiumErinaceusGastricmucosaCyt0protecti0n 猴头菌(HericiumErinaceus)是一种含多糖, 多肽的物质.文献报道猴头干品可治疗消化不良, 神经衰弱和胃溃疡.长期临床观察亦证实,猴头菌 对溃疡病及慢性胃炎均有良好的疗效,但其作用原 理尚不清楚.本文应用大鼠实验性胃粘膜损伤模型 对猴头菌进行初步研究,旨在观察猴头菌对胃粘膜 的保护作用及其作用机制. 材料与方法 一 ,实验动物 雌性SPrague—Daw1ey(SD)大鼠,体重 180--220克(平均210克).购自南京药科大学实验动 物中心,实验前后分别秤重并记录.实验前24小时 禁食,自由饮水 二,主要试剂及仪器 猴头菌片由南京老山制药厂提供(商品名:胃乐 宁),实验剂量为0.32g/kg-d口服氨基己糖标准为 上海化学试剂厂产品,胃泌素放免药盒为中国原子 能科学研究院产品. 三,实验方法 1.胃粘膜损伤模型:实验大鼠禁食24f1~时(自由 饮水)后,经胃管注入无水乙醇1.0ml/只,1小时后 可进行不同的实验. 2.分组及实验方法:本实验共用大鼠85只,分 A,BC,D4gtA组60只,用乙醇造成胃粘膜损伤 模型后随机分成4组,每组各15只:其中A1组,猴头 菌片治疗2周;A2组,猴头菌片治疗1周;A3组,正常 饲养2周;A4组,正常饲养1周B组10只,预服猴头 苗片2周,然后经胃管注入无水乙醇:c组(猴头菌片 治疗前对照2ii)8只,应用乙醇1小时后处死大鼠,检 测各项指标:D组(正常对照组)7只,不使用无水乙 醇及猴头菌片,大鼠自由进食,饮水.以上各组在实 验前后分别抽取静脉血.分离血清测定胃泌素含 量;断颈处死大鼠后取胃组织标本行组织病理学检 查及氨基己糖测定. 3.组织病理学:(1)大体标本:处死大鼠后沿胃大 弯将胃剪开,观察粘膜充血水肿,溃疡或糜烂数量, 大小.反复测量溃疡或糜烂直径(每次测定值的变 异<5%),计算出溃疡指数(ui),根据溃疡指数 计算药物对溃疡的抑制率.计算方法为: 溃疡发生率=形成溃疡的动物数×100%/实 验动物数 溃疡抑制率一(对照组溃疡指数一用药组溃疡 指数)xi00%/对照组溃疡指数 (2)光镜观察:胃组织在4%多聚甲醛,0.04M KtPHO.(pH7.4)中固定16小时后.依次脱水,石蜡 包埋,沿垂直粘膜方向连续切片(厚度5m),HE染 色.光镜观察粘膜充血,水肿,坏死和粘膜下出血水 肿,血管增生,肉芽组织形成及炎细胞浸润程度.粘 膜下出血水肿,血管增生及肉芽组织的判定参照正 常对照组(即D组),依据有无计算其发生率:粘膜下 炎细胞浸润的程度参照病理学(第四版)标准分为无 (一),轻度(+),中度(++),重度(+++)4级. 4.氨基己糖测定:氨基己糖测定方法参照文献 报道方法}3进行. 5.血浆胃泌素浓度:在给药前后分别取血 0.7ml,肝素抗凝,离心取血浆置于一70?待测.胃 泌素测定采用RIA法. 四,统计学处理: 数据处理采用Student检验,分析及Ridit 分析法,P<0.05认为有显着性差异 结果 一 ,实验大鼠体重的变化 实验后各组大鼠体重相似(230--254g),各组 问无显着差异 二,猴头菌片对大鼠消化功能的影响 实验组应用乙醇导致胃粘膜损伤后第1天,大 鼠的食物摄入量均很少:实验第2天,治疗组大鼠食 物摄入量开始有明显增加,第3天后基本恢复正常: 而未服用菌片对胃粘膜的保护作用 1.猴头菌片对胃粘膜充血,水肿和坏死的影 响(见表3). 2.猴头菌片对粘膜下出血,水肿及血管增生的 影响:猴头菌片治疗1周和2周后,粘膜下出血,水肿 较对照组(A4组,A3组)明显减少(P<0.01);而血管 增生却有明显增加,与对照组相比差异显着fP< 0.05)(见表4) ?加0 一抽<8拄率} 胃肠病学1999年第4卷第2期 表l猴头菌片对无水乙醇诱发的太鼠急性胃溃疡的影响 猴头菌片治疗l周和2周后.大鼠胃溃疡的数量及面积分别比相应对照组减少,溃疡抑制率随治疗 时间延长而增加,P<0.05~P<O.01) 表3治疗前后胃粘膜充血,水肿和坏死发生辜(%) ~11i4各组粘膜下出血,水肿和血管增生的发生辜(%) ~11i5各组粘膜下炎细胞浸润的发生辜及程度(%) 3.猴头菌片对炎细胞浸润的影响 胃粘膜被乙醇损伤后1小时,牯膜下即有炎性 细胞的轻度浸润,且以中性粒细胞浸润为主.猴头 菌片治疗1周后开始明显减轻,并与治疗时间呈正 相关;而未治疗组炎性细胞的浸润无明显好转,且 淋巴细胞的数量较前增多,两组问有显着差异.B 组与C组间炎性细胞浸润程度无显着差异(见表5 五,猴头菌片对胃粘膜氨基己糖的影响 30 竖25 20 三 耀L0 5 警. 图3胃粘膜中氨基己糖水平变化 乙醇造成胃粘膜损伤后,粘膜中氨基己糖成分 的含量较正常对照组明显降低(C组比D组,尸< 0,05),而预防组(B组)却无明显降低(P>0,05)在猴 头菌片治疗1周后氨基己糖即恢复正常水平,并在 达到正常水平后并不随猴头菌片治疗时间而变 化(见图3) 六,猴头菌片对血浆胃泌素的影响 乙醇造成胃粘膜损伤后1小时和1周,大鼠血清 ????? I ??? ???—量一—???一圈??量一???? 胃泌素浓度无明显变化:2周后.猴头菌片治疗组胃 泌素浓度维持正常水平,而未治疗组胃泌素浓度有 明显升高(P<0.05)(见图4). 80 70 60 5O =4O 曼30 2O 10 0 i53.9~o,t58,4 ? 图4胃粘膜中胃泌素水平变化 讨论 文献报道,用乙醇诱发的胃粘膜损伤比由阿司 匹林诱发的损伤明显.组织学上乙醇引起的损伤 主要包括粘膜出血及严重坏死,粘膜下层严重水 肿本研究亦得到了相同结果.这种模型已被认为 是研究胃粘膜细胞保护作用的标准方法1. 乙醇导致胃粘膜损伤后,大鼠进食量明显减 少;应用猴头菌片治疗后大鼠食物摄入量开始有明 显增加,第3天后基本恢复正常:而未服用猴头菌片 大鼠恢复较慢,且应用猴头菌片大鼠的食物摄入量 比未应用猴头菌片组明显增多,表明猴头菌片有促 进恢复大鼠食欲,改善消化功能的作用.但这种作 用的确切机理尚不清楚,需待进一步研究 大鼠预服猴头菌片f0.32g/kg—d)2周,可獗少乙 醇诱发的急性胃溃疡(事实上多数为牯膜糜烂和出 血点).胃粘膜损伤后,应用猴头菌片治疗l周即可 减轻由乙醇引起的胃粘膜充血,出血,水肿,糜烂和 坏死程度,尤以粘膜下的出血水肿减轻较为明显. 且伴有粘膜下血管增生:这种作用与治疗时间呈正 相关,在用药2周后尤为明显,提示猴头菌片对胃粘 膜抵御乙醇的损伤有一定的细胞保护作用,其机制 可能与粘膜下的血管增生有关.粘膜下血管的增生 可增加胃粘膜的血流而增强胃粘膜的防御功能这 有利于减轻损伤因子的作用,有助于粘膜损伤的修 复.另外,猴头菌片治疗后还可明显减少或减轻牯 膜下的炎细胞浸润,这对减轻胃炎程度有利.本结 果表明,猴头菌片有明显的促进损伤愈合作用. 胃粘膜损伤后的组织修复依赖于增强胃粘膜 ChinJGastroentero].1999,Vol4, No.2 的屏障机能和降低损伤因子的作用.多糖类物质如 氨基己糖是反映粘膜屏障机能的一个重要指标,氨 基己糖的降低不利于维护粘膜上皮的完整性l本 研究发现,乙醇可使胃粘膜中氨基己糖的含量明显 减少;猴头菌片治疗1周后氨基己糖即可恢复正常, 而胃泌素浓度没有变化.在未治疗组,l周时氨基己 糖的含量明显增高,而胃泌素浓度正常:实验2周 时,氨基己糖水平降至正常而胃泌素水平有所上 升.我们认为,猴头菌片可以防止血清胃泌素浓度 的升高,可避免由此引起的胃酸增多:由于猴头菌 片的主要成分是猴头菌素,其中含多糖,多肽类物 质,这种外援性的胃牯膜屏障物质本身亦具有一定 的保护作用.这与文献报道相似.在未治疗组1周 时氨基己糖的升高可能是一种内源性的代偿反应, 而2周时粘膜损伤修复缓慢可能与胃泌素的升高有 关.但是氨基己糖与胃泌素两者间内在的关系目前 尚不清楚,其确切机制尚有待进一步研究. 本研究结果表明,猴头菌片有促进大鼠食欲和 改善消化功能的作用;对乙醇诱发的胃粘膜损伤有 一 定的预防作用;并可促进损伤后的牯膜修复,减 轻粘膜的充血,出血,水肿和坏死:减少或减轻粘膜 下炎细胞的浸润.说明猴头菌片是一种良好的胃牯 膜保护剂. 参考文献 1PeskarBM,LangeK,HoppeU,eta1.Ethanol stimulatesforffiationofleukotrieneC4inrat gastricmucosa.Prostaglandins.1986.31:283,293 2.张经济主编.消化道生理及腐理生理学——基础与l临床 第一版.广州:广东科技出版社.1997.310 3.徐肇敏,张志宏.陈载融,等幽门螺杆菌破坏胃粘膜屏障 的研究.中华内科杂志.1995.34:6034605 4.RobertA,LeongFW,KaiserDGeta1.Protenti. ationofaspirin-inducedgastriclesionsbyexpo. suretocoldinrats,roleofacid~ecretion.mucosal bloodflow.andgastricmucosalprostanoidc0nt- ent.Gastroenterology.1989.97:1147,ll58 5.RobertA.NezamisJELancasterC.etal Cytoprotectionbypro8taglandin8inrats.Preven. tionofgas~icnecrosisproducedbyalcohol,HC1, NaOH.hypertonicNaCI,andthermalinjury. 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