[指导]三点测交

[指导]三点测交 果蝇的三点测交试验 一、实验目的 1、本实验通过果蝇的培养、杂交、性状观察和数据统计验证分离规律、自由组合规律、连锁与互换规律等遗传学的基本规律，掌握果蝇的杂交技术。 2、加深理解遗传学基因连锁与互换定律的本质，掌握三点测交的原理及方法;学习三点测交的数据统计处理及分析方法;了解绘制遗传学图的原理和方法。 3、了解伴性遗传与非伴性遗传的区别，了解伴性基因在正、反交中的差异。 二、实验准备知识 三点测交法就是研究三个基因在染色体上的位置。如a、b、c三个基因是连锁的，要测定三个基因的相对位置可以用野生型果蝇(+++，示三个相应的野生型基因)与三隐性果蝇(abc，三个突变型基因)杂交，制成三因子杂种(abc/+++)，再用三隐性个体(abc/abc)对雌性三因子杂种进行测交，以测出三因子杂种在减数分裂中产生的配子类型和相应数目。由于基因间的交换，除产生亲本类型的两种配子外，还有六种重组型配子，因而在测交后代中有8种不同表型的果蝇出现，这样经过数据的统计和处理，一次试验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序，这种方法，就叫三点测交或三点试验。 一次三点测验得到的三个重组值是在同一基因型背景、同一环境条件下得到的，而三次“两点试验”就不一定这样。重组值既受基因型背景的影响，也受各种环境条件的影响，所以，只有从三点试验所得到的三个重组值才是严格地可以互相比较的。 果蝇的白眼、小翅、卷刚毛为X-连锁基因，全部隐性于各自的野生型基因(红眼、长翅、直刚毛)，把白眼、小翅、卷刚毛雌蝇(wmsn/wmsn)与野生型雄蝇交配(，，，/Y)，F1雌蝇全部为野生型，雄蝇则全部表现为三隐性突变型，让F1互交，在F2中，不管雌雄性别，除了出现双亲类型外，还会出现新的表型种类，这是由于F1雌蝇中两个染色体之间发生了互换的结果，根据基因在染色体线性排列的遗传理论，对F2进行分析即可知不同基因间的连锁距离。 三、实验材料 1、材料:黑腹果蝇两个品系,即(1)野生型果蝇,其性状为红眼,长翅,直刚毛,基因型+++(2)三隐性突变体,其性状为白眼(w),小翅(m),焦刚毛(sn),基因型为wmsn. 2、仪器:恒温培养箱、显微镜、解剖镜、培养瓶、吸水纸、棉塞、麻醉瓶、毛笔或解剖针、洁净的白瓷板。 3、试剂:乙醚、乙醇。 四、实验步骤 1、 选三隐性雌性处女蝇(wmsn/wmsn)和野生型雄蝇(，，，/y)5-6对置于新鲜培养瓶中作正交，共放两瓶;同时选野生型雌性处女蝇(，，，/，，，)和三隐性雄蝇(wmsn/y)5-6对置于新鲜培养瓶中作反交，共放两瓶。贴上标签，注明亲本类型，实验日期，组别及姓名。妥善保管，温箱下25?培养。注意谨防瓶塞掉出、瓶子摔破，避开阳光直射，保暖。 2、一周以后倒去亲本果蝇，一定要倒干净。 3、 两周后，F1蝇长出，分别观察F1雌蝇和F1雄蝇的各个性状，看与预期结果是否符合，并观察正反交不同组合的结果如何。 4、 从F1代中选每瓶5-6对果蝇，放到新鲜培养基中，三瓶正交，一瓶反交。 5、三周后倒去F1，要求倒干净。 6、 四周后，F2代成蝇出现。统计各类蝇数，2-3天后再统计一次，统计过的果蝇倒掉。应该统计的是正交的F2，但如果其数目不多，可借用反交的F2中的雄蝇加以统计。 五、实验结果 重组区域F2果蝇表型类型及基因型数目w-snw-mm-sn 白卷小(wmsn/wmsn,wmsn/y)120 红直长(+++/wmsn,+++/y)132 白直小(wm+/wmsn,wm+/y)19 红卷长(++sn/wmsn,++sn/y)2?? 红卷小(+msn/wmsn,+msn/y)30 白直长(w++/wmsn,w++/y)21?? 红直小(+m+/wmsn,+m+/y)97 白卷长(w+sn/wmsn,w+sn/y)58?? 合计479 RF(w-sn)=(19+2+30+21)/479=15.0% 15.0 cM RF(w-m)=(30+21+97+58)/479=43.0% 43.0 cM RF(m-sn)=(19+2+97+58)/479=36.7% 36.7 cM w Sn m 15.0cM 36.7 cM 43.0cM 六、讨论 1、试验中对于果蝇的数量有着一定的要求，因此在培育果蝇时要轻量麻醉，防止降低果蝇的生育能力，也可多投放几对果蝇。 2、培养基在制作时要尽量熬的粘稠一些，否则在放入指管后，会脱水使培养基与管壁分离，不利于果蝇幼虫成长。 3、如果投放的不是处女蝇则很有可能已经受精，在F1代中，引入纯合子。将会影响下一代分离比，从而影响到试验结果。 4、.产卵后亲本需在一周后清理干净。一是会影响子代的计数，二是可能会和下一代交配，从而影响实验结果。同理正交、反交完后的F1也要清理干净。 5、环境要适宜，温度过高容易造成果蝇的不育以及变异，影响到实验结果。而温度过低，则使得果蝇生长缓慢，影响实验进程。培养基不长霉菌，因此配置培养基是要注意加入防腐剂丙酸。 6、实验可能存在统计错误，在计数的时候长翅小翅有时难以分清，会导致误差。