多巴胺代谢系统儿茶酚氧位甲基转移酶、多巴胺转运体基因多态性与

多巴胺代谢系统儿茶酚氧位甲基转移酶、多巴胺转运体基因多态性与 南方医科大学,,,,级硕士学位论文多巴胺代谢系统儿茶酚氧位甲基转移酶、多巴胺转运体基因 多态性与卒中后抑郁的相关性分析 ,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,， ,,,,, , ,,,,,,;,,,,,, ,,,,,,;,,,,, ,, ,,,, ,,。, ,‘,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,,( 专 业 名 称 神经病学 学位申请人 蔡卫卫 指导教师 刘振华教授 答辩委员会主席 田时雨教授 答辩委员会成员 徐恩教授 张素平教授 谭盛教授 吴多斌教授 论文评阅人 徐恩教授 张素平教授 ,,, ,年,月,,日 广州 ，,螂嬲多巴胺代谢系统儿茶酚氧位甲基转移酶、多 巴胺转运体基因多态性与卒中后抑郁的相 关性分析 硕士研究生:蔡卫卫 指导教师:刘振华教授 摘 要研究背景: 脑卒中除引起多种神经功能障碍外，还常导致一系列情感行为的变化，抑郁是脑卒中后最常见和最重要的神经精神并发症，对患者的认知、神经功能恢复和生活质量均有不利影响。卒中后抑郁(,,,,(,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,)是指在有明显临床症状的卒中发作后出现的以情绪低落、兴趣下降为特征的脑卒中后常见的并发症。其发病率临床报道不一，国内文献报道,,,发生率为,,(,,’,,,’,,(,,，国外报道为,,,”,,,，从大量的临床报道可见,,,的发生率集中在,,,’,’,,,左右。随着生物医学模式向生物(心理(社会医学模式的转换，卒中后抑郁及抗抑郁治疗备受关注。 ,,,的发病机制目前尚不明确，普遍认为是由社会心理学、神经解剖学和神经生物学等多方面因素介导的，其中神经生物学因素一直是近几年研究的热点。,,,的原发内源性学说认为它是脑的特定区域损伤并伴随有神经递质改变的结果，具体而言，大脑额叶、边缘系统、丘脑及脑干蓝斑核等损伤能使人类产生抑郁情绪，而这些神经结构间的沟通主要是通过各种神经递质传递来完成。去甲肾上腺素(,,,,,,,,,,,,,,，,,)和,,羟色胺(,一,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,)是神经系统的重要递质，其神经元胞体位于脑干，轴突通过丘脑下部、基底神 中文摘要经节区，环绕胼胝体和放射冠，然后由前向后通过深层皮质，并逐渐发出分支，末端终止于表层，形成额叶,颞叶(基底节一脑干腹侧环路，该环路负责调控情绪、睡眠和认知等。脑卒中破坏该环路可引起与神经心理活动有关的各种神经递质的合成、代谢和传导障碍，导致,一,,、,,等神经递质合成减少，或引起突触后膜的受体数目和,或敏感性改变都会导致抑郁。多巴胺(,,,,,,,,，,,)也参与精神和情绪活动，它包含的中脑(大脑皮质、中脑(边缘叶系统亦与人类的精神和情绪活动关系密切。 对于原发性抑郁症的病理生理机制研究提示:抑郁症的发生与脑内单胺类神经递质功能活性的低下有关，尤其是,,,,及,,，二者与抑郁症的关系已经得到可被广泛认可的结论，但由于不少新型抗抑郁药物对,,的代谢有明显作用，使研究者们觉得,,在抑郁的生化机制中起着重要作用。早在,,,,年,,,,,,,,,,等首先提出，多巴胺可能参与抑郁症的发病。也有,;,,,,,,,,,,,,等认为，抑郁症病人不仅仅是,,,,、,,能神经传导异常，,,能神经传导异常也涉及抑郁症的病理生理学机制。最近,,,,,】等发现，使用激动剂、而非抑制剂抗抑郁治疗后有可能增加活性状态的,,、,,受体的密度，,,受体反应下降的患者，使用帕罗西汀抗抑郁治疗效果会更好。这提示也许,,,，,是通过增加,,受体 敏感性起作用，表明了多巴胺在原发性抑郁中起到了非常重要的作用。近年来另有吕路线〔,,等研究表明，,,,患者血浆、脑脊液中的,,浓度低于卒中无抑郁组甚至正常对照组;炎彬,,】等研究了脑缺血再灌注小鼠海马、纹状体、皮层的单胺类神经递质及其代谢物的变化规律，认为,,,的发生与海马脑缺血再灌注损伤后,,、,,系统异常有着密切联系，,,,患者用增加单胺类递质含量的抗抑郁药物治疗后，抑郁症状可以缓解，进一步支持以上理论。这就提示了我们脑卒中后所导致的多巴胺代谢系统功能紊乱在,,,的发生中也可能具有重要地位。 ,,在脑内作为神经递质影响运动、行为、情感和垂体激素的释放，有些能影响,,代谢的药物具有抗抑郁作用，如安非他酮，它是相对选择性,,回 ，, 硕士学位论文收抑制剂，对,,受体也有激动作用，双盲对照研究表明，这种第二代抗抑郁药的效果优于安慰剂，并等同于阿米替林。因此，最近有人提出,,代谢系统功能异常可能与抑郁发病关联的两种学说:一种认为抑郁患者可能存在,, ,,受体功能低下;另一种认为抑郁患者存在中脑边缘系统,,功能失调，由中脑腹侧被盖区及伏隔核等构成的中脑边缘,,通路在奖赏过程中起关键作用，最近人们逐渐认识到，该奖赏通路在调节动力、睡眠、食欲、昼夜节律及人对愉悦或厌恶刺激的反应中起重要作用，几乎所有的长期抗抑郁治疗都会增加,,诱导的奖赏反应。 儿茶酚氧位甲基转移酶(,,,,;,,,—,(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,，,,,,)是广泛存在于人体内的一种代谢酶，主要通过甲基化直接而选择性地降解前额皮质突触内,,,以上的,,，是具有生物活性或毒性的儿茶酚胺的主要代谢酶，也是最关键酶。,,,,基因定位于,,？,,(,，是一个变异较多的基因。现阶段研究最多的是其第,外显子上的一个,—,的点突变，使得其编码的,,,位或,,,位氨基酸由,,,突变为,,,，导致酶活性有,,,倍的改变，因而会导致不同基因型个体体内神经递质含量出现明显的不同。,,,,,,,基因型的,,,,具有高活性，,,,,,,,基因型的酶具有中度活性， ,,,,,,,基因型的酶具有低活性，这是由高活性等位基因,和低活性等位基因,两种等位基因决定的，以共显性方式遗传。,,,,,,,,】等研究发现，高活性,,,, ,,,等位基因，尤其是,,,,,,,基因型与早发抑郁有关，并指出,,,,基因可能在神经精神疾病的易感性及症状学中发挥复杂和多效的作用。,,,的神经递质学说认为，急性脑卒中后抑郁状态的发生与血清中单胺类神经递质的功能活性降低有关，研究证明,,,患者存在,,功能低下，推测,,功能低下可能是由于,,生成减少或降解增加，即有效前体酪氨酸减少或与合成、代谢有关的酶的机制改变，或是胺传递功能减弱所致。而高活性的该酶可使作为底物的多巴胺等神经递质降解及消除加快，从而缩短其作用时间，降低,,作用效率，可增加对抑郁患者的认知功能损害的风险，因而该突变点引发,,,,酶活性的变化在人群中是否会造成相关性状 ,，， 中文摘要的生物学改变，是否与,,,的发病相关联，都是非常值得深入研究的遗传学课题。 多巴胺转运体(,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,，,,,)是位于,,能神经元突触前膜的跨膜蛋白，它特异地再摄取突触间隙的,,，终止,,能信号传递，是维持,,能神经功能稳定的最重要的因子，尤其对脑功能的正常维持非常重要。它限制了多巴胺能受体激活的时间、程度、范围，调节,,浓度，而多巴胺的多少又与许多神经疾病有关。若转运蛋白的摄取功能异常，将导致突触间隙递质浓度的升高或降低，从而引 起相应递质系统功能活性的改变，很多治疗神经疾病的药物将转运蛋白作为其直接作用的靶点，通过调节转运蛋白的功能，调整神经递质在突触间的时程，从而改变神经系统信号通路，达到治疗的效果。 人类,,,基因定位于,,,,(,，目前其,？,,,,,,,?、『,,研究最多。该,,,,多态性位于非编码区，它本身不可能直接改变,,,的结构和功能，但研究发现其与脑内,,,的表达和利用率有关。,,,该多态性位点不沉默，而且影响该基因产生高水平,,,,的表达，研究表明,,次重复等位基因较其他等位基因对于,,,基因的表达具有更强的增强作用，,,,,,基因型个体比,,,,基因型个体的纹状体内,,,蛋白含量增力,,,,左右【,】【,,。而另外两项研究【,】【,伽则认为,次重复等位基因编码的,,,具有更高的表达和利用率。高活性的,,,可以增加突触前膜,,的再摄取量，使突触间隙,,减少、效率下降。,,,,,,,;,〔?】等发现抑郁症患者基底神经节多巴胺转运蛋白的亲合力可能比正常对照组更高，提示抑郁症患者的多巴胺功能是可以变化的，也许这正是抗抑郁药物可能有效的原因。动物实验研究已经证实了所有类型的抗抑郁药物都可以引起多巴胺转运蛋白亲合力的变化。,,,;, ,,〔,,】等认为,,,,,倍重复等位基因是抑郁患者边缘型人格障碍的危险因素，在老年抑郁患者中相关性尤为明显。脑卒中破坏了,,信号传递通路又可反馈引起,,,功能活动及亲和力的变化，推测其在,,,的发生中也可能发挥一定的作用。 ,, 硕士学位论文 目的: 探讨,,递质代谢相关蛋白,,,, ,,,,,,,,,,,,,、,,,,, ,, ,,,,两位点基因多态性与,,,的关系。研究方法及分组: 以珠江医院神经内科住院病人为研究人群，患者根据第四次全国脑血管学术会议做出卒中诊断和汉密尔顿抑郁量表做出抑郁诊断，按入组条件选择入组病人,,,例，分为单纯脑卒中组,,例(男,,例，女,,例)和卒中后抑郁组,,例(男,,例，女,,例)。运用聚合酶链反应(限制性内切酶片段长度多态性分析技术，采集被试者全血,,,，,,,,抗凝后采用苯酚(氯仿抽提法提取外周血白细胞和基因组,,,。,,,引物(上游,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,,(,’，下游为:,’,,,,,〕盯,,,,,,,,,,,,,,(,’)扩增,,,,基因，,,,，，，内切酶检测,,,,基因,,,,,,,,,,,,,多态性。同时利用,,,引物(上游,’,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,一,’，下游:,’一,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,(,’)扩增,,,基因，比较各扩增片段大小。运用,,,,,,(,统计软件包，采用卡方检验比较单纯脑卒中组与卒中后抑郁组各等位基因、基因型频率分布的差异，当理论频数,,时，则改为,,,,,,精确概率法。结果: (,),,,, ,,,,,,,,,,,,,多态性分析:卒中后抑郁组等位基因,频率(,,(,,)低于单纯脑卒中组(,,(,,)，等位基因,频率(,,(,,)高于单纯脑卒中组 (,,(,,)，两组之间总体比较差异有统计学意义(,,,(,,,，,,,,(,,,，,,,，(,,,，,,,,，,,(,,,”,,,(,,,)。但按性别比较，等位基因,和,频率在两组男性之间的比较差异无统计学意义(卢,(,,,，,,,(,,,)，而在两组女性间的比较则差异有统计学意义(,,,(,,,，,,,(,,,，,,,,(,,,，,,,,，,,(,,,,一,(,,,)。卒中后抑郁组野生型,,,占多数(,,(,,)，突变型,『, 仅占(,(,,)，单纯脑卒中组杂合型,,则占多数(,,(,,)，突变型,，,占(,(,,)，两组,种基因型,,,、,,,、 , 中文摘要,,,总体比较差异有统计学意义(,,,,(,,,，,,,,(,,,)，但按性别比较，在两组男性中比较差异无统计学意义(,,,,(,,,，,,,,(,,,)，在两组女性中比较则差异有统计学意义(,《(,,,，,,,,(,,,)。 (,),,, ,, ,, ,,,,多态性分析:,,,基因,, ,, ,,,,以,,倍(,,,,穑?馗雌 挝 鳎 渲泻笠钟糇橛氲ゴ磕宰渲凶榉直鹫迹梗保 梗ズ停梗埃 罚ィ 浯挝 贡叮ǎ矗矗埃猓穑?馗雌 危 阶橹蟹直鹫迹担 梗ァ?担 担ァ,阶橹 涞任换 颉? 蛐推德始霸雍隙缺冉喜钜炀 尥臣蒲б庖澹ǎ妫剑保 梗叮叮 校剑埃 叮常矗弧辏剑玻 玻矗福 校剑 桑 埃埃埃幻 剑铮 保玻担 校剑 埃 罚玻矗 , 模粒曰 蛐秃偷任换 蚍治 保埃 保氨吨馗椿 蛐汀?牵保埃 保氨吨馗椿 蛐汀?保氨吨馗吹任换 蚝头牵保氨吨馗吹任换 虮冉希 阶椋保氨吨馗椿 蛐陀敕牵欤锉吨馗椿 蛐捅冉喜钜煳尥臣蒲б庖澹ǎ冢剑铮 保 埃 罚埃常 涣阶椋保氨吨馗吹任换 蛴敕牵欤媳吨馗吹任换 虮冉矗担 穑剑 喜钜煳尥臣蒲б庖澹 剑铮 保担玻 穑剑 埃 叮梗罚 ,崧郏?,、本研究组中,,,, ,,,,,,,,,,,,,基因多态性与,,,的发生可能有相关性，这种相关性主要体现在女性患者，表明该基因多态性可能在女性卒中后抑郁的遗传发病机制中起更大作用。 ,、,,, ,,,, ,,,,基因多态性与,,,遗传易感性可能无关，需进一步研究验证。关键词:多巴胺卒中后抑郁,,,, ,,,多态性 硕士学位论文 ,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,,( ,,,,:,,, ,(,,,(,, ,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ，,,,,,,;,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,,, ;,,,,,, , ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,, , ,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,，,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ;,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,; ;,,,,,;,,,,,, ,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,’, ;,,,,,,,,、,,,,,,,,,;,, ,,;,,,,, ,,, ,,, ？,,,,,, ,, ,,,,，,,,,,,仃,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,, , ;,,,,, ;,,,,,;,,,,, ,,,,, ,,,,,,，,,,;, ,, ;,,,,;,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,;,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,;,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,(，,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,;,, ,,,,,,,，,,,,,,,;,,,,,,, ,, , ,(,,,, ,,(,,，,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,，,,,, ,,;,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,，,,,;, ,,, ,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ;,,,,;,, ,,,,,,,(,,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,, ,, ,,,,,,,;,,—,,,;,, ,,,,;,,—,,;,,, ,,,,;,, ,,,,, ,,;,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,;,,，,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,, ,, ;,,,,, ,,,,;,,, ,,,;,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,，,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,;,,,,，,,,,, ,,,,，,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,;, ,, ,,;,,, ,,,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,;,,,,, , ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,, ,,, ;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,;,,,;,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,、,,,,,; ,,,,,,、,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,;,,,, ,,; ;,,, ,,,,,，,,, ,,, ;,,,,,,,;, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,( ,, ,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,;,,, ,, ,,,,,,,,,，,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,—,,,,, ,,,,,,,—,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,，,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,，,,,,, ,,, ;,,,,,,,,(,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,, ,,, ;,,,, ,,, ,,,,,,,,,、,,,,,,,,,, ,,, ;,,,,;,,,, ,,,,,;,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,,,,,;,, ,;,,,,,,，,,, ,,, ,,,,;, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,、,,，,, ,,,,;, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,，,,, ,,,,,, ,,, ;,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,;,,,,,,,,，,, ;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,, ;,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, , ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,;,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,;;,,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,、析,,, ,,, ,;,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,，,,,,;,,,,,,,,,、,,，,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,，, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,, ;,,;,,,,,,，,,, ,,;,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,;,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,;，,,,;, ,,,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,，,,(,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,;,, ,,;,,,,,,(,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, , ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,, , ,,,(,;,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,谢, ,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,、,, ,,,,, ;,,,,;,,,, ,,,,,,,,，,, ,,,,,,, ;,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,(,,;,,,,,，,,, ,,,;,,,,,, ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,、,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,;,,,,, ,,, ,;,,,, ,,,,, ,, ,,、,, ,,;,,,,, ,,,,,,,，,,,,,,,,而,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;, ,,,;,,,,,, ,,;,,,,，,,, ,,,,,,,,,, 硕士学位论文 ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,, ,, ,,,,,,(,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,，, ,,,,,,,,, , ,,,, ,, ,,;,,,,,,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,(,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, , ,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,(，, ,,;,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,、;,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,,,,, ,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,,、,,,,,,,,、;,,,,, ,, ;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,，,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,;;,,,,,;, ,, ,,, ,,,, ;,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,、,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,;,,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ;,,,, ,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,,,，;,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,，,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,(,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,( ,, ,, ,,, ,,,,, ,,, ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,、,,,,,,,,、,,,,,,,,,,,,;, ,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,，,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,,;, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,—,,,,,,,,,, ,,,,,，,,;, ,, ,,,,,,,,,，,, ,, , ,,,,,,,,,, ,,,,;,,,,,, ,,;,;, ,, ,,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,,，,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,, ,, ,,;,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,, ,,;,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,, ,,,;,,,，,,, ,？,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,(,,;,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,颍?,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,, , , ,,;,,,,, ,,,;,,,,;,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ;,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,;,,,, ,;;,,,,,, ,,,, , ,,, ,,,, ,, ,,,,,, ,,,;,,,,,,(,,;,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,，,,,,,,,,，;,,;,,,,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,， ,,,,,,,,,,,,,, , ,, ,, ,,, ,,,,—,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, 椋睿悖颍澹幔螅澹椋睿洌酰悖簦椋铮?,,,,,, ,,,;,,,,( ,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,, ,,,,’, ,,,,,,,,; ,,,,,,,，,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,; ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,;,,, ,,, ,,,,;,,,,,,，,, ,, ,,,,,,,;,,,, ,;,,,, ,, ,,,,; ;,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,，,,, ,,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,(,,, ,,,, ,,;,,,, ,, ,,？, ,(,，,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,(,,,，,,,, ,,,,,,;, ,,;,, ,, , ,—, ,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,，,, ,,,,, ,,, ;,,,,, ,, ,, , ,, ,,,,, ,;,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,, ,，,,, ;,,,, ,,,,,,,;,,,,,, ,,,,;,, ,—, ,,,,,，,,,, ;,,,,,, , ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,;,(,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,?,;,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,，,,,, ,, ,,;,,,, ,, ,,, ,,,,—,;,,,, ,,,,,, , ,,, ,,,,,;,,,, ,,,,,, ,，,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,(,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,;,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,，,,,,;,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ;,,;,,,,、，，,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ;,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,;,,, ,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,;,,,,,, ,;,,,,,,,,;,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,, ,,,;,,,,,,,,,,;,, ,, ,,, ,,,,,,,,，,,,, ,,,,, ,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,,，,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,, ,,,,;,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,;,,,,,, ;,,,,,,, ,,,,,,，,, ,,,,, ,, ;,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,(,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,, ,;;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,;, ,, ,,，,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,;,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,，,,,, ,,,,;, ,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,, ;,,,,, ,,, ,,,,,;, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,;,,，,,,, ,,;,,,,, ,,, ,,,, ,, ;,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,,，,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,;, ;,, ,,,,,,, ,,, ,;,,,,,, ;,,,,, ,, 硕士学位论文 ,,,, ,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ;,,,,, ,, ,,,，,,,,,,, ,, ,, ,,,,;,,,,,诵,,,,,, ,, ,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,，,,, ,,,,,, ,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,;, ,,,,,;,( ,,, ,, , ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,;, ,,;,,,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,;，,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,, ,, ,,,,,, ,,;,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,，,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,(，, ,,,,,,;,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,,,,,;,,,,,,, ,,,,、,,,,,,、,,,,,,，,,,,,,, ,, ;,,;,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ;,,;,,,,,、析,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,(，, ,,, ,,,,, ,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,, ,,,, ;,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,; ,,,;,，,,,, ;,,,, ,,, ;,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ,;,,,,,,,,，, ,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,;, ,;,,,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,, ,,, ,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,; ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,，,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,;,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,;,( ,,,,, ,,, ,,,, ,,;,,,, ,, ,,, ,(,，,,, ,？,,, ,,,, ,,,, ,, ,,, ,,,, , ,,,,,,(,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,, ,, ,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,，，, ,,, ,,, ,,,,;,,,;,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,, ,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,, ;,,;,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,,,,(,,, ,,,,,, ,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,，,,, ,,,,;, ,,,, ,,,,,;, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,, ,,,, , , ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,;, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,,、析,, ,,, , ,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,,, ;,,,,,,、),,,,,,,,, , ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,(,,, ,,, ,,,,, , ,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,(,,,,, ,,,—,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,,;,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,;,,,, ,,, ;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,;, ,, , ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,,(,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,;,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,,,;,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,谢,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,, ;,, ,,,, ;,,,,, ,,, ,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,，,,,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,,, , ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,(,,,,;,,,,: ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,、析,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, , ,,,, ,,,,,、,,, ,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,(,,,,,,,: ,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,;, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,;,,,(,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,:, , ;,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,, ;,,,, ,, ,,,, ,,, ,, ;,,,, ,, ,,,,,,),,, ,, ;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,, ;,,,, ,, ,,,, ,,, ,, ;,,,, ,, ,,,,,,)(,,,,,,,,,, ;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,，,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,;,,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,, ,,,,,,; ,, ,,,,,;,,,, ,,,,,,(,’,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,’,, ,,,,,,,, ,,, ,’,,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,一,’,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,, ,,,,(,,, ,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,, , ，,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,(,,,,,,,,, ,’一,,, 牵牵?,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,一,’,, ,,,,,,,, ,,, ,’,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,, ,,,一,’,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,, ,,,,，,,, ;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,(,,,, , ,(, ,,,,,,,,;,,,,;,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,？,,,;,(,,,,,？,,,, ,,,, 硕士学位论文 ,,, ,,,, ,, ;,,,,,, ,,;, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,？,,,;, ,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,？,,,;, ,,, ,,,,,, ,，,, ,,,, ,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,,,, ,,,,,,, , ,,,;, ,,,,( ,,,,,,,: (，),,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,:,,, ,,,？,,,,, ,,, ,,,,,, ,,, , ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,(, ,(,呦,,,, ,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,(,,(,,)，,,,,, ,,, ,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,(,,(,,)，,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,(,,(,,)簦瑁幔睿洌椋妫妫澹颍澹睿?,,,,,,, ,,, ...