抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP

抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)定量测定 一、简介和用途、适用范围 大量的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)是由骨吸收的破骨细胞和有活力的巨噬细胞所释放的。在血液循环中的TRACP有TRACP 5b 和TRACP 5a二种形式， TRACP 5b 来源于破骨细胞，而TRACP 5a来源于巨噬细胞。 由破骨细胞刚分泌到血液中的TRACP 5b是有活性的酶，但当TRACP 5b在血液循环中被清除之前已无活性，并被降解为碎片。这样TRACP 5b不会因肝、肾功能受损而在血液中积蓄。血清中TRACP 5b均来源于破骨细胞，此酶在昼夜的活性水平变化不明显，且不受进食的影响，故可在一天的任何时候都可以采集标本进行检验。 此试剂盒依据测定由破骨细胞释放的TRACP 5b的特异性测定。它可以用于测定骨吸收亢进的病人，如原发性骨质疏松和肾性骨病，也可以预测骨折的危险性，并便于了解抗骨吸收治疗的效果。在肿瘤病人中，当TRACP 5b的活力增高提示肿瘤骨转移。 在体外，培养基中TRACP 5b的活力大小代表了破骨细胞数量的多少，因此应用于此试剂盒在进行人的破骨细胞培养时，可用于检测破骨细胞的数量。 二、试验原理 测试孔内已包被抗TRACP单克隆抗体?加入校准液、质控品和样品?加入释放剂?有活性的TRACP 5b从结合蛋白质上离解?TRACP 5b与孔内包被的抗TRACP单克隆抗体结合 ?加入底物pNPP孵育?加入终止液终止反应?在酶标仪上检测结果。 此试验的优点 1、所测定的TRACP 5b是由破骨细胞专一释放的。 2、此试验对TRACP 5a或其它磷酸酶没有干扰。 3、溶血不影响结果。 4、不受昼夜变化的影响。 5、不受肝脏、肾脏疾病的影响。 6、不受进食的影响。 7、酶标板容易拆卸，方便检测。 三、试剂盒 (一)组成 1、酶标板:96孔，已包被抗—TRACP抗体。 2、质控液:3×0.5ml。 3、校准液:3×0.5ml(3×1U/L,3×5U/L,3×10U/L)。 4、冲洗缓冲液:1×100ml，浓缩10倍。 5、样品稀释液:1×15ml。 6、释放剂:1×8ml。 7、底物缓冲液:2×15ml。 8、底物:4片。 9、终止液:1×6ml。 (二)贮存和试剂的有效期 1、试剂在2-8度中保存，在此温度中可稳定到试剂包装上所标定的日期。 2、试剂使用后应及时放回至2-8度中保存。 3、在外包装盒的有效期内使用为准。 4、过期的试剂不得使用。 (三)、自备器材 1、重蒸馏水 1 200610 BoneTracp英国IDS公司原装进口 2、可调微量进样器 3、盛洗液和样品的容器 4、洗板设备(如洗板机) 5、37?孵箱 6、振荡器:850-950次/分，振幅4mm。 四、试剂准备 试验操作前，应将所有试剂恢复至室温。 1、每次取出所需用的酶标板孔条后，其余部分应放回原装口袋中，密封，于2-8?保存。 2、冲洗缓冲液:1份10倍浓缩的冲洗缓冲液加9份重蒸馏水混合。 3、校准液:用0.5ml重蒸馏水复溶，需15分钟。 4、质控液:用0.5ml重蒸馏水复溶，需15分钟。 5、底物试剂:每片用5ml底物缓冲液溶解，用前新鲜配制。 注意:不同批号或不同厂家的试剂不能混用。 只有严格地按操作进行试验，并使用专用的试剂盒，才能得到有效和可重复性的结果。 五、标本 1、用血清或EDTA抗凝的血浆。 2、要防止细菌污染标本，失活的标本必须弃去。 3、标本在室温可稳定8小时;在2-8?可稳定3天;在-20?可保存2个月;要长期保存时，应将标本放在-80?保存。 4、标本检测结果如果大于高值时应按1:5稀释。 六、操作方法 1、打开铝箔袋，按照标本数量取出所需的酶标板孔条。 2、在头2孔中加入100ul样品稀释液作为空白对照，接着分别加入校准液、质控液和所有的待检样品各100ul，且上述各检测物也均需加2孔。 3、在每孔中加入50ul释放剂。 4、置室温，将酶标板放在开着的振荡器上(850-950次/分)孵育60分钟。 5、每孔每次加入300ul的冲洗缓冲液，洗板4次。注意所有的孔都应充满，并在冲洗后要在滤纸上拍干。不要让孔干燥，操作时不能停顿。 6、在每孔中加入100ul底物试剂。 7、在37?环境中孵育60分钟。 8、在每孔中加入25ul终止液终止反应，轻轻混匀。 在比色读取结果时，酶标板板底应清洁透亮，孔内不得有气泡。加入终止液后应在15分钟内比色读取结果。 检验程序表格 空 白 标 准 质 控 样 本 样本稀释液 100ul —— —— —— 标准品 —— 100ul —— 质控品 —— —— 100ul —— 样 本 —— —— —— 100ul 释放剂 50ul 50ul 50ul 50u1 在850——950rpm的震荡器上室温孵育60分钟(?5分钟)，每孔300ul洗液洗涤4次 底物酶 100ul 100ul 100ul 100ul 37?孵育60分钟(?5分钟) 终止液 25ul 25ul 25ul 25ul 405nm读取吸光度 2 200610 BoneTracp英国IDS公司原装进口 七、警告与预防(注意事项) 1、此试剂仅用于体外诊断。 2、不要用嘴吸取。 3、在工作区不得吃喝或吸烟。 4、接触标本和试剂之后应将手洗净。 5、某些试剂尽管经现有的方法进行检测没有传染性，但仍然要作为有潜在的有感染性的生物样品来处理。 6、本试剂盒含有0.1%的叠氮钠。误食立即征求医生意见。 6、叠氮钠与铅和铜反应形成高爆炸性的金属叠氮化合物，处理时用大量的水进行冲洗，以避免形成叠氮化合物。 7、终止液中含有1N NaOH具有腐蚀性，应避免接触皮肤和眼睛，不要吸入。工作时要戴眼镜、手套和工作帽。 8、操作中要防止微生物污染试剂。 八、结果计算 (一)、基本方法 1、所用酶标仪的波长为405nm. 2、将已测定的A值减去空白A值。 3、以校准液所测A值为纵坐标，酶活力为横坐标绘制校准曲线。校准曲线可用线性回归方程求出。 4、从校准曲线上查出质控液和样品TRACP 5b的活力。 5、检测范围为1-10U/L。样品结果小于低值时结果为，1U/L，样品结果大于高值时，要稀释样品以后再进行检验，并将检测结果×稀释倍数。 6、质控品的范围小瓶的贴签已经给出。 (二)、标准和质控的判断指标 1、质控液所测的活力应落在所指定的范围。 2、校准曲线相关系数要?0.99。 如果检测结果达不到上述要求，要重新进行检验。 (三)、结果解释与方法学的局限性 1、TRACP 5b的活力增加提示骨吸收增加。 2、结果在参考值范围之内，不能排除骨代谢没有异常，因此所有的结果应该结合临床症状和其它的诊断指标来解释。 3、高浓度的血红蛋白不影响结果。 4、高脂标本可降低A，对结果产生负干扰。 九、检测底限 本试剂盒的最低检测线为，1ul 十、期望值 TRACP 5b的期望值来源于239例健康献血员的血清标本所检测的结果。 组别 例数 平均年龄(范围) TRACP 5b(U/L) 均值?SD 健康绝经前妇女 144 39.5(22-54) 2.59?0.78 健康成年男性 32 36.0(22-54) 3.06?0.88 健康绝经后妇女 46 60.3(41-81) 3.19?0.85 健康老人 17 68.5(55-79) 3.31?0.72 对于绝经期妇女和成年男性的期望值上限为均值，2SD: 组别 期望值上限:均值，2SD 健康绝经前妇女 4.15U/L 健康成年男性 4.82U/L 3 200610 BoneTracp英国IDS公司原装进口 每个实验室要建立本室的期望值。 仅供参考，请以原版英文为准～ 医疗器械注册证书编号: 产品标准编号:YZB/IDS 001-2005 生产企业:Immunodiagnostic Systems Limited (IDS Ltd). 注册地址:10 Didcot Way, Boldon Business Park Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD, UK 生产地址:10 Didcot Way, Boldon Business Park Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD, UK 生产企业电话:+44(0)191 519 0660 售后服务机构:北京荣志海达生物科技有限公司 售后服务电话:+86-10-51657820 4 200610 BoneTracp英国IDS公司原装进口 5 200610 BoneTracp英国IDS公司原装进口