珍芪降糖胶囊囊壳中非法添加物——格列苯脲的鉴别

珍芪降糖胶囊囊壳中非法添加物——格列苯脲的鉴别 珍芪降糖胶囊囊壳中非法添加物——格列 苯脲的鉴别 2008年3月第5卷第9期?交流园地? 珍芪降糖胶囊囊壳中非法添加物——格列苯脲的鉴别 佟少辉,李太平,马莹 (辽宁省丹东市药品检验所,辽宁丹东l】8002) 【关键词】珍芪降糖胶囊;格列苯脲;TLC;HPLC 【中图分类号】R927【文献标识码】C【文章编号】1673—7210(2008)03(c)一171 —02 珍芪降糖胶囊足南珍珠,黄芪,黄精等l4味巾药组成的 降糖类中药,具有益气养阴,清热生津的功效.临床用于气阴 两虚,肺胃有热之消渴症.在日常的监督检查中.有用户反映 该药降糖效果义快又好,我们怀疑该药可能非法添加了处方 外化学药成分,于是我们对市售的珍芪降糖胶囊进行了检 验.结果发现样品在胶囊内容物中,未检出格列苯脲,而在囊 壳中检出r格列苯脲. 1仪器与试药 LC一10TAVP高效液相色谱仪.附SPD—M10AVP二极管 阵列检测器;CLASS—VP(日本岛津);CS一930薄层色谱扫描 仪(日本岛津);电子天平HM一202(日本AND).格列本脲对 照品(批号:10135—0103,中国药品生物制品检定所提供).珍 芪降糖胶囊(哈尔滨某药业有限公司生产,批号:050101,规 格:0.5g/粒);甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司), 其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 为提高鉴别实验的准确性,我们采用了两种方法即TLC 法和HPLC法进行鉴别. 2.1TLC法 2.1.1格列苯脲对照品溶液的配制精密称取格列苯脲对照 品,加氯仿制成每lml含1.5mg的溶液,作为对照品溶液. 2.1.2供试品溶液的配制取本品5粒,除去内容物,将空囊 壳置100ml具塞锥形瓶巾,加热水20ml使溶化后转移至分 液漏斗中,滤器用50ml热水洗涤.洗液一并移至分液漏斗 中,加氯仿提取两次(40,30m1),分取氯仿液蒸干,残渣加氯仿 lml使溶解.作为供试品溶液. 2.1_3阴性对照液的配制取不含格列苯脲的空胶囊壳5 粒,置1O0ml具塞锥形瓶中,加热水20ml使溶化后转移至 分液漏斗巾,滤器用50ml热水洗涤,洗液一并移至分液漏 斗中,加氯仿提取两次(40,30m1),分取氯仿液蒸干,残渣加 氯仿lml使溶解,即得. 2.1.4测定法精密吸取上述种溶液各5l,分别点于一 硅胶GF薄层板上,以氯仿一环己烷,乙醇一冰醋酸(8:13:1:1) 为展开剂.展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视.再 照薄层色谱法(《中困药典}2005年版一部附录?B薄层扫捕 法)进行光谱扫捕(200,370nlT1). 2.1.5TLC法结果供试品色谱巾,在与对照品色谱相应的位 置上显相同颜色的斑点;供试品光谱扫捕谱与对照品光谱 扫捕图谱一致阴性对照液色谱罔巾,在与对照品色谱相应 的位置上未flI现相同颜色的斑点. 2.2HPLC法 2.2.1格列苯脲对照液的配制精密称取格列苯脲对照品10mg, 置50ml量瓶中,以流动相溶解稀释至刻度,摇匀. 2.2.2供试品溶液的配制取本品4粒,倾去内容物,擦拭干 净壳内壁后,置50ml锥形瓶中.加入热水20m1.使胶囊完 全溶化后,置分液漏斗中.以60ml氯仿分3次提取,合并提 取液置水浴上蒸干,残渣以流动相溶解并定容至5ml. 2.2.3阴性对照液的制备取4粒胶囊内容物.置50ml锥形 瓶中,以60ml氯仿分3次提取,合并提取液置水浴上蒸十. 残渣以流动相溶解并定容至5ml. 取不含有格列苯脲的空胶囊壳4粒,置50ml锥形瓶 中,加入热水20ml,使胶囊完全溶化后,置分液漏斗中,同法 以60ml氯仿分3次提取,合并提取液置水浴上蒸干,残渣 以流动相溶解并定容至5ml. 2.2.4实验条件与方法为了提高检测的灵敏度和鉴别的准 确性,本实验采用高效液相色谱法二极管阵列检测器.同时 测定色谱和光谱图进行在线鉴别.用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂,甲醇一磷酸二氢铵溶液『取磷酸二氢铵1.725g,加 水300ml溶解,用磷酸调节pH值至(3.50~0.05)](7:3)为流动 相;检测波长300nm;流速:1.0ml/min;色谱柱:DiamonsilTM (钻石)Cl8(250minx4.6mm,5m;Cat.no.99903S/N:8033825). 分别精密量取上述四种溶液各l0l,注入液相色谱仪中,记 录色谱图. 2.2.5稳定性试验取供试品溶液一份,于室温放置,分别在 0,2,4,6,8h后取样l0l,注入液相色谱仪,记录色谱图. 结果见l 表1稳定性试验结果 时间(h)02468平均变化率 峰面积10492151048341104778910477921038297 变化率(%)0—0.083—0.136—0.136—1.041—0.349 文验结果表明,样品溶液在上述时问内基本稳定 2.2.6HPLC法结果供试品色谱中,出现与格列苯脲对照品 色谱保留时问相同的色谱峰,且该峰的紫外吸收光谱网也与 对照品峰的紫外吸收光谱图完全一致.但在两种阴性对照液 的色谱图巾,均未出现与格列苯脲对照品保留时间相同色谱 峰和与其对应的紫外吸收光谱图. 3讨论 经以上实验初步断定:该批珍芪降糖胶囊的囊壳巾非法 添加了处方外化学药品格列苯脲.这说明造假者已不是简单 地把违禁药品添加在药品巾,而是想方设法逃避检查,造假 的手段更加隐蔽,这也给药品质量监督带来一定的难度,对 我们今后打击假药提出了更高的要求. 采用高效液相色谱法二极管阵列检测可同时将样品的 色谱图与光谱图一次在线完成,大大提高了检测的准确度. CHINAMEDICALHERALD田国医药导掘171 ? 交流园地?2008年3月第5卷第9期 银杏内酯在心血管方面的应用研究探讨 余新建一.刘育文,高丽丽,朱文娟,刘星 (1.江西省进贤县人民医院药刹科,汀进贤331700;2.汀两中医学院研究生部,江西 南昌330006) 【关键词】银杏内酯;心血管;应用 [中图分类号】R96[文献标识码】C[文章编号】1673-7210(2008)03(c)-172-01 银杏内酯是迄今为止自然界存在的生理活性最强的山 小板活化因子fPAF)拮抗剂PAF是;rH/J',板和多种炎症组织 分泌产生的一种内源性磷脂,它与许多疾病的产生,发展密 切相关1.特别是对心m管系统有很强作用.现就其在心脑血 管方面的药理作用进行论述. 1对心血管系统的药理作用 1.1银杏内酯能完全阻止PAF引起的血小板聚集作用 血小板激活在m栓彤成过程中发挥着至关重要的作用. 通常认为血小板的激活主要通过以下种途径:一是与ADP 的释放有关:二是以环加氧酶作为中介物彤成的m栓烷A! fTXA2);三是PAF.ADP和花生四烯酸(AA)通过激活前两条 途径,导致血小板聚集:PAF是强有力的血小板激活剂,当有 活化的白细胞存在时.还可以增强血小板和内皮问的黏附,是 TXA:产生的有力刺激因子.研究发现,银杏总内酯可明显 对抗血栓形成,并具有显着的抗PAF和ADP诱导血小板聚 集作用. 1.2对血管平滑肌细胞增殖的影响 血管平滑肌细胞fVSMC)迁移和过度增殖是高电压,动脉 粥样硬化及血管成形术后再狭窄等血管增生性疾病的基本 特征.银杏内酯B呈剂量依赖性地抑制oxLDI诱导的胸主 动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖,IC50为0.586txmol/L,1Ixmol/L GKB可抑制PAF诱导的U937单核细胞MCP一1和lL一8的 分泌并抑制oxLDL诱导的NF—KB亚基p65活化和IKB降 解.表明银杏内酯在体外具有一定的抗促进增殖及刺激单核 细胞趋化因子分泌的作用_引. 1.3预防动脉粥样硬化斑的形成 陆晓茜等[41选片J动脉粥样硬化斑形成的早期危险因素弱 氧化修饰低密度脂蛋白fmmLDL,40mg/L)作为刺激子作用 于体外培养的ECV304细胞,发现组织因子TF蛋白水平及 mRNA水平显着增加,且Ca迅速升高,而抗氧化剂GKB,可 部分抑制mmLDL诱导的细胞内钙超载,在细胞的氧化损伤 中具有一定保护作用.由此推测GKB可预防动脉粥样硬化 斑的形成,减少心血管事件的发生. 1.4对心肌缺血损伤所致心肌电生理变化的影响 心肌缺血是导致心肌损伤的主要素,GKB已被证实具 有改善心肌低氧状态和抗心律失常效应..在生理条件下, GKB可缩短心室肌细胞动作电位时程(APD),增大延迟整流 钾电流.且呈浓度依赖性.在缺血条件下,APD50,APD90明 ,V减小,而GKB则可延缓和减轻缺 显缩短,RP,APA减小 血所引起上述参数的变化,且_口T逆转缺m造成延迟整流钾电 流,L型钙电流这两种离子流的减小.由此提示,GKB对抗心 肌缺血所引起的心肌电生理的变化,从而预防心肌缺血所致 的心律失常的发生. 2银杏内酯产品开发现状 2.1已经上市的药品 现有银杏类药物主要为银杏制剂,银杏制剂所用原料为 银杏叶浸膏EGb761,其质量为:黄酮苷24%以上,萜内 酯f银杏内酯和白果内酯的总和)6%以上,白果酸0.0005% 以下.主要用于治疗冠心病,心绞痛,老年痴呆症及增强记忆 功能等上市的银杏制剂药品主要有:进口的有德国Se. hwabe制药公司的梯波林,岁肯,金纳多等和法罔博福?益普 生(BeanfourIpsen)制药公司的TANAKANf达那康).国产的银 杏制剂主要有天保宁f浙汀康恩lJ1),百路达(上海信谊药厂长 征分厂),银杏天宝(贵阳信邦),银可络(深圳海王药业),999 银杏叶片f九集团立华制药),银杏口服液f河北遵化制药 厂),银杏胶囊f山西心研所)等,其中几种巳被列为国家中药 保护品种.上海杏灵药业有限公司开发的第四代银杏叶制 剂,防治心脑管疾病新药——杏灵颗粒.获美围FDA批准, 进入周际联合二,三期临床试验. 2.2正在研发的产品 合肥1二业大学的课组与解放军总医院联合开发的 "银内酯B及银杏内酯B注射剂"获得国家1类中药临床 试验批件,目前已完成临床前研究,通过国家食品药品监督 管理局的技术评审,近期将进行临床研究.银杏混合内酯 (代号NB52063)作为第一个进入临床试验的强血小板活化 冈子(PAF)拮抗剂即主要含有银杏内酯A和银杏内酯B以 及少量的银杏内酯C(A:B:C=2:2:1),不含白果内酯,是口服制 剂. 3展望 心脑血管疾病是一种多发病,常见病,心脑血管药物也 一 直位居世界药品市场首位.而以银杏为主的天然药物因 "疗效好,毒副作用小"而呈现良好的发展趋势,我们有理由 相信作为纯天然提取药物,银杏内酯及其制剂获得上市许可 后,将会带来很好的经济效益和社会效益,造福人类. 『参考文献1 [11傅林莉.银杏叶制剂的临床应用fJ1.华夏医学,2000,13(2):238—240. 【2]龚晓健,李运曼,F惠敏,等.银杏总内酯抗血小板聚集与抗血栓作用 . 中国临床药理学与治疗学,2006,11(7):822—825. 毛昱嘉,王霖,王文杰.银杏内酯B对oxLDL刺激大鼠胸主动脉平滑 肌细胞和U937细胞功能变化的作用IJ1.药学,2006,41(1):36— 4O. f4]L【lXQ,LiXD,zuSY,eta1.Expression(1ftissuefactorgeneinducedby mmLDLandinhibitedbyginkgolidesBinECV304m.BasicMedSci Clin,2002,22(3):241-243. (收稿13期:2007—12—26) 格列苯脲《中国药典》20()5年版二部采用的检测波长 为274nm,本实验也进行了两个波长下的测定千不最低检出限 的测定.在300nm波长处的最低检出浓度为0.43Ixg/ml.结果 172巾国医药导掘CHINAMEDICALHERALD 表明:格列苯脲在300nm波长处的检测灵敏度高于274nm.而 且十扰峰较少.所以本方法采用300nm为检测波长. (收稿13期:2008—01—10)