乐卡地平与贝那普利体内外相互作用研究（可编辑）

乐卡地平与贝那普利体内外相互作用研究（可编辑） 乐卡地平与贝那普利体内外相互作用研究 分类号: 单位代码: 密 级: 学 号: ?‖篥办孚 硕士学位 专业学位 论文目:乐卡地平与贝那普利体内外相互作用研究 作者 姓 名 陈克广 学院 名 称 山东大学药学院 专业学位名称 制药工程 指导 教师 郭瑞臣教授 导 合作 师;,? 嚣已巍诬薪撕盼蕊 ??.,?缱? 魁裂’ .舢.口 燃 粼 再:瓶蜉 时? 瓣:.:搿 四 蚶.:当瓣 臻一 孵 量 舰 黔殍 ??扒. 释一 ,“ .‰ 孵黔,撑 鬻一?移 潦需溅 廿 量 , 蕊髫 斟 镒 静. 。器 .? ? 群麟 节,谬占 帮甜黑 “, 氍 ?,..柏俨.伽.山东大学硕士学位论文 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本 其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的 献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本声明的 承担。 日 期:?丛?业 论文作者签名:瞬 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学 校保 留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论 文被查阅 和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容 编入有关 数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文 和汇编本 学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定 论文作者签名: 导师签名:兰盟日 期:垒坠』二凇镧 弧汀? 叫’: ’ 蜘幽氰 黼瓣 燃纵 。‖?磐奠 爨 黻 ?..粗 。.叫惯; ?们黝 嚣崭蛰毒, 瓣 瓣 豁 %滞~ ,渊 霸 黼再黔一 ?.二... 馘磐瓣纷 器 鎏 渤 甄 藤 吼聊燃把一 胪秒州 黪 一一 黔撵四 。.。:‖。:‘?】?州 一 一 ,..蜒~帆艋 瓤潞撇 毽吲?硝 ....片。咄?.?霹 漱 酝蕤 桤? 徽 “‘. 。。山东大学硕士学位论文 目 录 缩略语说明中文摘要 英文摘要 前 日 言 吾??... 第一部分:./法同时测定血浆中乐卡地平、贝那普利和贝那普利 拉浓度?. 材料与.. .实验仪器,药品与试剂?.. ..主要仪器??. ..药品与试剂?. 实验方法? .标准溶液配制 ..乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉储备液及标准系列溶液配制 ~ ..内标溶液配制.. .样本分析..样本处理??。 ..色谱条件??~ ..质谱条件??.. .方法确证..乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉及内标质谱图.. ..方法专属性?.. ..基质效应与绝对回收率??.. ..标准曲线??.. ..最低定量限?.. ..方法精密度与准确度.. ..稳定性考察?.. 讨仓??.. .质谱条件的优化.色谱条件的优化?...山东大学硕士学位论文 .血浆样品处理方法的优化? 小结??.. 第二部分:乐卡地平与贝那普利大鼠体内药代动力学相互作用. 实验方法?.. .实验材料..药品试剂??. ..主要仪器??. ..实验动物??. .实验..大鼠分组及给药方法. ..样本分析与数据处理. 结果.. .实验动物状况 .药代动力学实验结果 讨论??.. 小结??.. 第三部分:贝那普利与贝那普利拉大鼠尿液及粪便排泄研究?. 实验材料.药品与试剂? .主要仪器.实验动物实验方法?.. .给药方法.样本收集.样本预处理? ..尿液预处理?.. ..粪便预处理?.. .样本测定..色谱条件??.. ..质谱条件??..山东大学硕士学位论文 .结果 ..方法学考察?.. ..各组大鼠尿液中贝那普利和贝那普利拉的浓度?.. 讨论??.. 小结??.. 第四部分:贝那普利对大鼠肝微粒体中乐卡地平代谢的影响?. 材料与方法.... .仪器与药品? .肝微粒体孵育体系? ...磷酸盐缓冲液的配制.. ...生成系统的配制?.. ...肝微粒体孵育体系? ..肝微粒体代谢实验设计?.. ..样本处理与含量测定??.. ..样本处理??.. ..色谱条件??.. ..质谱条件??.. .数据处理结果??. .方法学考察? .肝微粒体孵育条件考察..肝微粒体浓度的选择.. ..孵育时间的选择??.. .肝微粒体孵育结果? 讨念??.. 小结??.. 结论??.. 参考文献??. 致 谢? 攻读学位期间发表的论文目录??.山东大学硕士学位论 文..?.??.?.??.??..?.??.??.??.??.?.??.?.. ?/? , ;?. ....?...?....?..?...........?.?.??...?......?.?.... ...... ; ., ... ......??....??..? .. ...?.??.??.??.?.? ..??.. :....?.......?.??.........?..?.??....?..?..?...。??.... ?...... ..。.??.. ...:.. ... ,, ..? ..?. ..?.?..?.?... ..??. ..?. ..?.?.. .? ...??.....?...?.?。?.??.?????????????????一一 一????????????????一一 些奎奎兰堡主兰垡鲨茎 一 ????????????????????????????一一 。。 . 。。。咖 一一山东大学硕士学位论文?..??.?.??.?... .............??.??....? ...?...?. ...?. ... ... 。 ..??..?.. .. ..?.. ..?.?.?.?..??. .. .??.?.?.??. .?.??.. ......?.. ..?.?.?.. ..?.. ..?.??... .??.??.?.?.??..??.??.?..?.?.?.?..??..?.. ..??.?.?.?.??......?.??.?..??...?..?.?.?.?..??..?..?..? .?.. .??..山东大学硕士学位论文 缩略语说明 英文缩写 英文全称 中文全称血管紧张素转化酶抑制剂 ‘ 。。 药时曲线下面积 贝那普利 钙通道阻滞剂清除率 峰浓度细胞色素药物分析统计 程序电子倍增电压 电喷雾离子源气相色谱 高效液相色谱 % ‘。半数抑制量抑制率.. 内标米氏常数 。一‘ ./ 液相色谱.串联质谱 乐卡地平 最低定量限代谢率多级反应监测 平均滞留时间质谱 / 质荷比 磷酸盐缓冲液 质控样本每天一次 相关系数 相对误差大鼠肝微粒体 相对代谢率相对标准偏差标准差 统计产品与服务解决方案 半衰期/ 总离子流 达峰时间 表观分布容积 山东大学硕士学位论文 乐卡地平与贝那普利体内外相互作用研究 陈克广 研究生: 郭瑞臣教授 指导教师: 中文摘要 目的:.建立灵敏度高、专属性强、方便可行的?/分析方法,同时测定 血浆中乐卡地平、贝那普利和贝那普利拉的浓度。.大鼠长期灌服乐卡地平与贝那普 利,研究两药在大鼠体内药代动力学的相互影响。.大鼠长期灌服乐卡地平与贝那普 利,研究乐卡地平对贝那普利与贝那普利拉在大鼠尿和粪便中排泄的影响。.体外考 察贝那普利对肝微粒体中乐卡地平代谢的影响。 方法:.本实验采用?/法。血浆样品采用固相萃取的方法进行提取,萃 //, 取剂为甲醇。选用的内标为地西泮。色谱柱为 ×. ; 流动相:.%乙酸:乙腈:;采用速度梯度,流速:. /. :. , /... ,. /.?. / ;.?. /:. 。柱温:。;迸样量:“。采用离子源,正离子模式,干燥气流 速. /,干燥气压力 ,多级反应 ,干燥气温度为。,毛细管电压 监测模式,..乐卡地平,..贝那普利,.?. , 贝那普利拉,..地西泮,为 。碎片电压分别为 , , , 。 和 ,碰撞能分别为 和 .分别考察大鼠体内乐卡地平对贝那普利及贝那普利对乐卡地平 药代动力学的影 响。贝那普利对乐卡地平药代动力学的影响:只健康大鼠随机分 为组, 各组给药方法分别如下,乐卡地平组:乐卡地平 /,:贝那普利低剂量组: 乐卡地平 /贝那普利 /,;贝那普利中剂量组:乐卡地平 / 贝那普利 /,:贝那普利高剂量组:乐卡地平 /贝那普利 /,。连续给药天。第天给药后,分别于给药前及给药后.、.、、.、 、、、、、、、 颈静脉窦取血. ,采用己建立的浆样本处理方法 和./法分析血浆中乐卡地平浓度,采用 .计算药代动力学参数并进行山东大学硕士学位论文 统计学分析。 乐卡地平对贝那普利药代动力学的影响:只健康雄性大鼠随机分为 组,各组给药方法分别如下,贝那普利组:贝那普利 /,;乐卡地平低剂 量组:贝那普利 /乐卡地平. /,;乐卡地平中剂量组:贝那 普利 / /乐卡地平 /,;乐卡地平高剂量组:贝那普利 乐卡地平 /,。连续给药天。第天给药后,分别给药前及给药后.、 ,采用 .、.、.、、.、、、、、、、、 颈静脉窦取血. 已建立的血浆样本处理方法和./法分析血浆中贝那普利和贝那普利拉浓度, 采用 .计算药代动力学参数并进行统计学分析。 .建立测定大鼠尿液及粪便中贝那普利和贝那普利拉浓度的./法。健康 大鼠,按第二部分乐卡地平对贝那普利药代动力学的影响实验的给药方法给药后 后,于实验第天,将大鼠置于代谢笼中,分别收集大鼠.,..,.,.,., 。,.,. 的尿液和粪便,采用己建立的尿液和粪便样本处理方法和./ 法分析尿液和粪便中贝那普利和贝那普利拉浓度,根据各时间段收集的尿液体积计算 贝那普利与贝那普利拉的累积排泄量。 .乐卡地平与贝那普利或酮康唑与. ,终止反 /肝微粒体共同孵育 应。采用?/法分析孵育液中乐卡地平含量的变化,考察贝那普利对肝微粒体 活性以及乐卡地平代谢的影响。 结果:.乐卡地平、贝那普利与贝那普利拉的线性范围均为 /,最低 定量限均为 /。乐卡地平绝对回收率为.%~.%,基质效应为.%~ .%:贝那普利绝对回收率为.%~.%,基质效应为.%~.%:贝 质回收 利与贝 下放置 、、 药量增 普利的 ,其中 .%山东大学硕士学位论文 .。 与贝那普利单方给药组相比,贝那普利联合乐卡地平低、中、高 剂量给药后,贝 那普利依次递增,其中.分别增加了.%,.%和.%.。 。分别增加了.%,.%和.%.。其余参数均无明显变化。贝那普 利拉体内药量依次递减,分别减少了.%,.%,.%,?分别减少 了.%,.%,.%。各组间虽有下降的趋势,但无统计学差异。高剂量 乐卡地 平 /可引起贝那普利体内药量明显增加,此剂量远高于临床剂量。 .大鼠长期灌胃给药贝那普利,以及贝那普利联合低、中、高剂量 的乐卡地平, 连续给药七天后。各组的大鼠尿液中贝那普利小时累积排泄量分 别为.士 .,. .,. .,.士. 。经统计学配对.检 验,各给药组间贝那普利排泄量没有显著差异。各组贝那普利拉小时累积排泄量分 另为. .,. .,.士.,.士. 。经统计学配对.检验,各给药组间贝那普利拉排泄量没有显著差异。乐卡地平与贝 那普利合用,不影响贝那普利和贝那普利拉在尿中的排泄,联合用药不会引起贝那普 利和贝那普利拉在体内的蓄积。 .采用./法测定肝微粒体孵育体系中乐卡地平浓度,乐卡地平在 /范围内线型良好.。经肝微粒体孵育显示,酮康唑 /对乐卡 地平 /代谢具有强的抑制作用 /,贝那普利,,, , /对大鼠肝微粒体中乐卡地平 /的代谢没有抑制作用 /。 结论:大鼠长期灌服贝那普利对乐卡地平在体内的暴露量没有明显变化。大鼠长 期灌服低、中剂量乐卡地平对贝那普利和贝那普利拉在体内的暴 露量没有明显变化, 高剂量乐卡地平可使贝那普利在大鼠体内暴露量显著增加。尿液排泄检测显示,乐卡 地平对贝那普利与贝那普利拉在尿液中排泄无影响。微粒体结果显示,贝那普利对乐 卡地平代谢没有抑制作用。 关键词:乐卡地平;贝那普利:药代动力学;肝微粒体;./山东大学硕士学位论文 一。?一????????????????????????????????????????????????????????? ?????????????一 : :.:. / ?, .. ? ... . ..:../.&, , ,.. .%。 ., . , /; / ;. :,/ /;. /.. . /.. ;.?. ,. /. ,:。,. .,.. ,.? ,砒:.... .. . ., .. 钐. 杉钐 ,, ..: . : : / .; ??????????堂塑型型坠 ‖; : / /,; : / /,. ?引锄 。 ,.,.,,.., :。.。‘. . .髋 。。 姗,二 三二::三 三国’‘“’,幻,. 。/ , 。 锄 二.:. 。【 ‘. 删。 。 。 。 ..’ : /三. 甜竺吼叫如门,; 删,; 啪: / ; 未 : / /,. 二 :。; 。 ’.,. ,.,., ::‘誓? ..腧 锄焉? ’’攀‘’.’.,.,. 钯 ?/ 。, :印譬 猢. . 咖删 。 锄 硼。 ,./灿 印一洒‘ .、懈 “., ? ““。 . 『::: 叫 , .三 ?:‘也 ’ . 。。 妇 :舢.,.,,,.’ 锄,肋 油 ?/ 。。 。 . . 。 嗽 . 。. / / 。 .。.. “。/。 ,,,, 。/ ,觚 。洳。啪。?,~ .。?..? 濂 。。.洲趴 ‘..: 。 。。。.,:?“ 咖,咖 ‘“ 二/惝 。 ?%~. %, 。 。三‘ 。三,‘ 。 .% %;盯觚。 。 。二苫: / /,/. : 山东大学硕士学位论文.%~.%,.%~. %; ?/ /,.%~ .%, /. .%~.%.一 %., . , . , ,, .%,.% .%,. /,. .%,.% 。 .%,. . . .戤 / , 矾 .%. / .%.. ., , .% .%. /,. .% .%,. 曲 /,.%.,。 .% . .. .%, .. . %.%,.%.%,.. . .%,. . ?/ ., / .,,.士.,.土., . ..,. ,. ..士.,.士., .士 . .,. .. . . ..?/ 山东大学硕士学位论文 ~ / .. .%. / / , , ,,/ /. :, . .. . . :;;; ; ?/ 山东大学硕士学位论文 ?上.?一 日 吾 是以动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病,主 高血压 要症状是静息状态下动脉收缩压和/或舒张压的增高兰/ ?。高血 压不 仅是血流动力学异常的疾病,而且也伴随脂肪、糖代谢紊乱和/ 或靶器官的不良重塑。 其心、脑、肾并发症、病死率、致残率都很高【】。 目前对于原发性高血压的治疗原则是使血压尽量降低至正常范 围,同时减少或防 止多器官衰竭的并发症,降低患者的病死率和病残率。单一用药治疗高血压的有效率 仅为%,增加药物剂量虽可提高疗效,但同时也提高了不良反应的发生率,加重 了患者的治疗费用。 降压药物联合治疗是提高高血压控制达标率最重要的途径。临床资料显示,超过 %的高血压患者需要两种或两种以上的降压药物联合治疗才能使血压控制达标【?。 高血压具有多种不同的发病机制,降压药物联合治疗有助于干预血压升高的各种机制 【,消除个体遗传变异而引起的对药物的不同反应【】,协同或补充各自的药理作用。 同时,联合用药可在一定程度上中和或抵消不同药物引起的不良反应。联合应用还 可降低单一药物治疗剂量,将不良反应降低。降压安全有效,减少不利效应,更好保 护靶器官,提高患者依从性。 不同种类的降压药物作用机制各不相同,正确的联合用药能够起到最优化的结果, 即采用尽可能少量的药物取得最佳疗效。其中钙通道阻滞剂联合血管紧张素转化酶抑 制剂的联合用药以其独有的优势越来越受到人们的关注。 钙通道阻滞剂可选择性的与血管平滑肌上的钙通道结合,阻断型钙离 子通道,抑制血管平滑肌内流,从而松弛血管平滑肌,使血管扩张,外周阻力减 。对周围 小,同时减少心肌对能量和氧的消耗,降低心肌收缩力,使血压下降 血管和冠状动脉均有扩张作用,同时耐受性良好,无明显不良反应【,在减少心肌 的氧耗量的同时还可增加冠状动脉痉挛患者的心肌供氧【】。降压同时并不引起重要器 官的血流量降低【’ ,不引起脂质代谢及葡萄糖耐受性的改变【. 。还可抑制 皮细胞对的重吸收,铂,选择性的扩张肾小球入球小动脉,增加肾小球 起到利尿的作用。 道阻滞剂作用于型钙通道,结合部位在仅亚单位,根据其具体结合点,可山东大学硕士学位论文 将分为】:二氢吡啶类;苯噻氮卓类;三苯哌嗪类。其中二氢毗啶类钙通道阻滞 剂,具有更高的血管选择性,作用持续时间更长,在持续平稳降压 的同时,还可改善 冠状动脉侧支循环,舒张脑、。肾、肠系膜与肢体血管平滑肌,保护血管内皮功能,抑 制血管平滑肌细胞增生,抗动脉粥样硬化【】。此外,二氢吡啶类钙通道阻滞剂可明显 降低老年高血压患者脑卒中发生的危险。 血管紧张素转化酶抑制剂通过作用于循环系统与局部组织中过度的肾 素.血管紧张素系统,抑制血管紧张素转化酶的活性,减少血管紧张素的生成,使周 围的小动脉扩张,血压下降。同时增加缓激肽释放与血管前列环素的生成,减少醛固 酮分泌和钠潴留,减少神经末梢释放肾上腺素‘,,起到扩张血管,降低周围阻力, 改善动脉顺应性,逆转左室肥厚,改善心室舒张功能,调解内皮功能及抗动脉粥样硬 化【。尤其适用于伴有左室肥厚、心力衰竭、糖尿病伴轻度肾功能损害的及老年单纯 性收缩期高血压患者。 与结合可显著降低血压。能缓冲类对交感神经系统和肾素一 血管紧张素轴的不良反应,而且类引起的负钠平衡能增强的降压效果”。 有直接扩张动脉的作用,而通过阻断肾素.血管紧张素系统,抑制血管紧张 素的生成,降低交感神经活性,对动脉和静脉均有扩张作用【们,因此二者有协同降 压作用,联合使用降压效果好】。 与合用,可明显降低二者各自的不良反应。类药物可使血管紧张 素?的生成减少,抑制交感神经活性,反射性引起心率升高,此副作用可被二氢吡啶 缓解【。最主要的不良反应是踝部水肿,水肿是由小动脉扩张引起的,导 致体内毛细管跨膜压力增加。而具有扩张静脉的作用,能降低过高的毛细血管 压力,避免液体外渗而缓解水肿【,显著提高的耐受性。可缓解对 交感神经和肾素.血管紧张素系统的活化作用,而的负钠平衡能减少体内水钠潴 留,且对肾小球系膜及肾小球有保护作用【引。此外,现己证实两种药物在抗增殖、减 少尿白蛋白等方面有协同作用,对血管壁局部及心、肾有保护作用。和 联合应用还可改善碳水化合物代谢参数并纠正高尿酸血症,且对糖脂代诱无影响,故 。 特别适用于糖尿病合并高向压患者 乐卡地平,化学名称为士。二甲基一..硝基苯基..二氢毗啶.,.吡啶二 所示。 羧酸,一【,,.三甲基..,.二苯丙基..氨基乙酯】.甲酯,结构式如图 是第三代新型的长效钙通道阻滞剂。通过选择性的作用于管平滑肌细胞膜型钙通山东大学硕士学位论文 道,阻滞内流,扩张外周血管而降低血压。乐卡地平具有高度的血管选择性,血 浆,较长而疗效作用持久。由于其独特的药理学和药代动力学特征,使得乐卡地平具 有血管选择性强、起效平缓、降压作用强、作用持续时间长、负性肌力小等特点。 一宁一吁甲一%弋埯 喝 % 人 ~图乐卡地平、贝那普利和贝那普利拉结构式:乐卡地平,:贝那普利,:贝那普利拉 . ::,: 研究表明,乐卡地平同硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、硝苯地 平以及尼群地平 相比,其疗效较为显著,且耐受性良好,常见的不良反应较少】。与其他相 比,在给予治疗剂量后,反射性心动过速的发生率明显低于其他,包括其他二氢吡啶 类钙通道阻滞剂血压水平相当时,乐卡地平所引起的踝部水肿、面红、皮疹、头 痛和眩晕发生率显著低于其他钙通道阻滞剂【引。 乐卡地平具有独特的膜控药代动力学。由于在,一二氢毗啶环上引入了,一二 苯基丙基甲氨基.一甲基一.丙基,使得乐卡地平亲脂性增强,在血浆和组织之间交换更 容易,因而血浆半衰期较短,为.~ :同时可使乐卡地平牢固地与组织壁结合,从 ,且长期使用不产生 细胞膜解离和流脱速度非常缓慢,因而组织半衰期长,为 其降压作用温和,作用时间持久,临床不良反应小,患者耐受性 口服乐卡地平 ,最大血药浓度 ,达峰时间瓠为. 。乐卡地平主要由细胞色素 ,血浆半衰期/为.山东大学硕士学位论文 系统的催化,使二氢吡啶环氧化,生成失活的氧化代谢产物,代谢 产物约%经 泌尿系统排出,%经肝脏转至肠道,随粪便排出。 二氢吡啶类钙通道阻滞剂主要经代谢,是的特异性底物。该类药 物对细胞色素没有抑制或诱导作用,与药物发生相互作用主要与其他药物抑制此类药 物的代谢有关。乐卡地平与的抑制剂酮康唑合用,乐卡地平增加约 倍:乐卡地平与环孢素抑制合用时,环孢素会使乐卡地平的升高 倍,而乐卡地平使环孢素 升高%;乐卡地平与抑制剂氟西汀合用时,乐卡 地平的药代动力学代谢无影响;乐卡地平与美托洛尔抑制两药合用时,其 血浆水平不会改变,但乐卡地平的生物利用度减少一半【】。 贝那普利,化学名称为:一.乙氧羰基一.苯基一.丙基氨基】,,,.四氢 ..氧代.一.苯并氮杂卓..乙酸,结构式如图 所示。是不含巯基的强效、 长效血管紧张素转化酶抑制剂贝那普利是一种前体药物,需在体内经肝脏水解, 转化成贝那普利拉而发挥降压作用。贝那普利拉化学名称为:.【羰基..苯基. 一丙基氨基】,,,.四氢..氧代一.苯并氮杂卓..乙酸,结构式如图 所示。原药抑制血管紧张素转化酶活性的作用仅为代谢物的千分之一【。本品发 挥作用慢,但降压维持作用时间长,对心功能指标有良好改善作用,能改善充血性心 力衰竭的临床症状及运动能力。 贝那普利从胃肠道吸收,然后通过肝脏代谢转化成活性代谢产物贝那普利拉。本 品口服吸收率约为%,达峰时间为. 。口服后转化成贝那普利拉,后者达峰时间 为. 。进食能降低吸收速度,但不减少吸收率。原药及贝那普利拉的血浆蛋白结合 率均大于%,后者清除率为.~. /,消除半减期为 ,主要从尿中排泄,少 量经胆汁排泄,肾功能减退者,胆汁排泄可代偿性增加,但总清除率下降【】。 药物在代谢环节发生的相互作用称为代谢性药物相互作用 ,在药动学相互作用发生率最高,约占药动学相互作用的%,其中由酶 抑制引起的药物相互作用约占%,酶诱导引起的占%,其他类型占%。代谢酶 的活性和含量改变是引起药物相互作用的主要方式。酶抑制剂通过降低相应代谢酶的 活性或含量,引起底物代谢减慢,导致药物在体内蓄积,血药浓度升高,多数情况下, 表现为药理作用增强,但对于前药和治疗指数窄的药物,可能引起疗效降低或发生毒 副作用。酶诱导剂通过提高相应代谢酶活性或含量,使底物代谓加快,原药血药浓度 降低,代谢物皿药浓度升高。对于前药而占,会提高药物疗效,减少不良反应。但多山东大学硕士学位论文 数情况下,会导致药物疗效减弱或消失。 酶系是最重要的代谢酶。该酶系在机体内广泛分布,其中在肝脏分布最多, 与药物代谢有关的酶系主要有三大家族、、,其中含量最多, 参与临床%以上药物的代谢【】。人体内的有种亚型:、、 及,其中,是最主要的同工酶,主要分布在肝脏和小肠。 经鉴定,大鼠体内主要有和两种亚型,最为重要。催化乐 卡地平代谢的酶为酶系, 人体内主要为,大鼠体内主要为 的同工酶。 肾脏排泄是药物的主要排泄途径,主要包括肾小球滤过、肾小管重吸收及分泌三 部分。其中肾小管分泌是主动转运过程,主要涉及酸性药物载体和碱性药物载体。同 性药物合用时,可能存在竞争性抑制现象,使药物的分泌量变化, 影响其从肾排泄, 随之引起血药浓度的改变,发生药动学相互作用。 研究证实,贝那普利在肝内经介导转化成其活性代谢产物贝那普利拉 】,而乐卡地平则是的特征底物,经代谢成无活性的氧化代谢产物。 二者合用在肝内可能存在对的竞争。贝那普利与贝那普利拉的主要从尿中排泄, 少量经粪便和胆汁排泄,乐卡地平几乎全部转化为无活性的代谢产物,经尿液粪便排 泄,二者合用时,药物的排泄可能存在相互影响。 临床上已有贝那普利与氨氯地平复方制剂的应用【?。但未见贝那普利与乐卡地 平体内外相互作用的相关报道,本课题旨在研究贝那普利和乐卡地平的体内药动学特 点及其贝那普利和乐卡地平在体内外的相互作用以及机制的研究,为临床用药提供数 据参考。 建立了./同时测定血浆中乐卡地平,贝那普利与贝那普利拉浓 通过对乐卡地平与贝那普利长期给药在大鼠体内的代谢,贝那普利联合乐 给药后,大鼠尿液和粪便中贝那普利和贝那普利拉的排泄以及采 用肝微粒 技术,考察贝那普利对肝微粒体中乐卡地平的代谢影响。考察乐卡地平与 能的相互影响。为两药复方制剂的研究开发以及临床合理应用提供依据。山东大学硕士学位论文 第一部分:./法同时测定血浆中乐卡地平、贝那普利和 贝那普利拉浓度 材料与方法 .实验仪器药品与试剂 ..主要仪器 系列液相色谱.三重四级杆串联质谱?肌,美国安捷伦科学 技术公司;梅特勒一托利多.电子天平,瑞士梅特勒.托利多仪器有限公司;梅特 勒。托利多电子天平,瑞士梅特勒.托利多仪器有限公司:梅特勒一托利多 计,瑞士梅特勒.托利多仪器有限公司;离心机,美国科峻仪器公 司;;型离心机,美国雅培公司;型旋涡混合器,上海精科 实业有限公司;超声清洗器,德国;型电热恒温水温箱, 北京医疗设备厂;固相萃取柱,美国公司; 色谱柱,迪马科技。 ..药品与试剂 乐卡地平化学对照品,深圳信立泰药业股份有限公司提供,批号:,纯 度.%:贝那普利化学对照品,深圳信立泰药业股份有限公司提供,批号:, 纯度.%;贝那普利拉化学对照品,深圳信立泰药业股份有限公司提供,批号: ,纯度.%;地西泮化学对照品,中国药品生物制品鉴定所,纯度:.%, 批号:.:乙腈,色谱纯,美国?.公司生产,批号:甲醇, 色谱纯,美国公司生产,批号;冰醋酸,色谱纯,美国公司生 产,批号;哇哈哈饮用纯净水,双蒸水,杭州娃哈哈集团有限公司生产,批号 】】 。 实验方法山东大学硕士学位论文 .标准溶液配制 ..乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉储备液及标准系列溶液配制 精密称取乐卡地平标准品. 容量瓶中,用纯净水溶解并稀释至 ,置 刻度,摇匀,配成浓度为 /的乐卡地平储备液。 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 精密吸取 乐卡地平储备液,置 得浓度为 ./的乐卡地平储备液; 精密吸取 容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得 乐卡地平储备液,置 浓度为 /的乐卡地平储备液?; 精密吸取 乐卡地平储备液?,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度,得 浓度为 /的乐卡地平储备液; 精密吸取 容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得 乐卡地平储备液?,置 浓度为 /的乐卡地平储备液。 以标准储备液配制乐卡地平血浆标准系列,过程如表所示。 精密称取贝那普利. 容量瓶中,用纯净水溶解并稀释至刻度, ,置 摇匀,配成浓度为. /的贝那普利储备液。 贝那普利储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻度,‘ 精密吸取. 得浓度为 的贝那普利储备液; 精密吸取. 贝那普利储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度, 得浓度为 /的贝那普利储备液; 贝那普利储备液,置 精密吸取 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 得浓度为 /的贝那普利储备液; 精密吸取 贝那普利储备液?,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度, 得浓度为 /的贝那普利储备液; 精密吸取 贝那普利储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 得浓度为 /的贝那普利储备液?; 精密吸取 贝那普利储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 得 /的贝那普利储备液?, 储备液配制贝那普利血浆标准系列,过程如表所示。山东大学硕 士学位论文 精密称取贝那普利拉标准品. 容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至 ,置 刻度,摇匀,配成浓度为. /的贝那普利拉储备液。 精密吸取 贝那普利拉储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度, 得浓度为 /的贝那普利拉储备液; 精密吸取. 贝那普利拉储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 得浓度为 /的贝那普利拉储备液; 精密吸取 贝那普利拉储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度, 得浓度为“/的贝那普利拉储备液; 精密吸取 贝那普利拉储备液?,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻度, 得浓度为 /的贝那普利拉储备液。 精密吸取 贝那普利拉储备液,置 容量瓶中,加流动相稀释至刻 度, 得浓度为 /的贝那普利拉储备液。 以标准储备液配制贝那普利拉血浆标准系列,过程如表所示。 表乐卡地平标准曲线和质控样本的配制 血浆标准系列 稀释过程 乐卡地平/山东大学硕士学位论文 表贝那普利标准曲线和质控样本的配制 璺鱼曼兰里曼巳竺堂里鱼里垒鱼型旦望里型巳箜坐垒塑堡堡兰 婴旦箜堡曼堕 血浆标准系列 稀释过程 贝那普利/ 表贝那普利拉标准曲线和质控样本的配制 生篁里呈巳型型望鱼竺型垒翌堕里里竺型璺箜里垒垫堕竺兰型 皇兰旦 垒呈望垒垄巳蔓型 血浆标准系列 稀释过程 贝那普利拉/ ..内标溶液配制 精密称取. 容量瓶中,用甲醇溶解,并用流动相定容, 地西泮,置 得. 容量瓶中,用流动相稀释至刻度,得 /母液,取母液此,置 /标准溶液,于冷藏备用。 .样本分析 ..样本处理 取血浆样品. 氢氧 ,加入 /内标地西泮溶液“,混匀,加入,充分涡旋混匀,采用 ’零件号: .小柱;批号: ; , ,用前经甲醇山东大学硕士学位论文 和水活化。将血浆样品加到萃取柱上,滤出血浆,再用水 洗涤, 弃去 洗涤液。用甲醇 洗脱,洗脱液于。水浴吹干,残渣用 流动相溶解, 进样分析。 ..色谱条件 色谱柱为 ×. ,岬:流动相:.%乙酸:乙腈:; /. 流速:. ;.. , /: /... :... , . /... /;. 。柱温:。;进样量:“。 ..质谱条件 离子源,正离子模式,干燥气流速. /,干燥气压力 ,干燥 气温度为?,毛细管电压,多级反应监测模式,..乐 卡地平,..贝那普利,..贝那普利拉,..地 , , 西泮。碎片电压分别为 和 ,碰撞能分别为 , , 。 和 .方法确证 ..乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉及内标质谱图 在电喷雾离子源下,正离子扫描下,乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉及 内标地西泮的分子离子质谱图见图,在多级反应监测模式下,乐卡地平、 贝那普利、贝那普利拉及内标地西泮的特征子离子质谱图见图所示。 .刚。曲咿四 .咱一 一 山东大学硕士学位论文 一????????????????????????????????????????????????????? ??????????一 . . .一., .. 图:乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉及内标地西泮的全扫描及子离子质谱图 一级质谱图:二级质谱图 ,,..? ..方法专属性 /的标准溶 配制乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉 /与内标地西泮 液,分别进样,即得乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉和内标的标准品色谱图图.: 取空白血浆 ,按“样品处理’’项下操作,不加内标,得空白血浆色谱图图.: 取含乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉 的血浆“,按“样本处理”项下操 山东大学硕士学位论文 作,即得含乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉和内标血浆提取色谱图图.;取 号大鼠灌胃给药乐卡地平 后,血浆 , ,按“样本处理”项下操作,取 号大鼠灌胃给药贝那普利 ,. 后血浆?,按“样本处理”项下操作,即 得大鼠血浆乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉提取色谱图图.。 . . . . . ... . ? 山东大学硕士学位论文 。 一????????????????????????????????????????????????????????? ???????????一... . .? 一 . ? . 一 一 . . ~ . .山东大学硕士学位论文 .~.?.一.?..? 图血浆样本测定专属性色谱图 一乐卡地平 /,贝那普利 /,贝那普利拉 /和内标 /标准 溶液:.空白血浆;.含 /乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉提取后色谱图;.号大鼠灌 胃乐卡地平 血浆中乐卡地平提取后?;号大鼠灌胃贝那普利 /后, /后, . 血浆中贝那普利一和贝那普利拉.提取后色谱图. ?/,/, / /; ;?/ ;? .. . / ?, / :,?: ..基质效应与绝对回收率 取空白血浆. ,分别配制乐卡地平浓度为 /、 /、 /血 浆溶液:贝那普利浓度为 /、 /、 /血浆溶液;贝那普利拉浓度 为 /、 /、 /血浆溶液,地西泮浓度为 /血浆溶液。按“样 本处理”项下操作不加内标,每一浓度进行样本分析,获得相应峰 面积为;制 备低、中、高三个浓度乐卡地平 /, /, /、贝那普利 /, /, /、贝那普利拉 /, /, /标准样品以 及/地西泮标准溶液,进样,得峰面积;同时取空白血浆. ,按“样 本 处理”项下操作,不加内标。吹干后分别用 /乐卡地平 /, /, 标准溶液, /, /, /的贝那普利标准溶液和 /, /, /的贝那普利拉标准溶液和 /的地西泮标准溶液复溶,进样,得相应 峰面积为。以 /比值计算低、中、高三个浓度测定绝对回收率,以/比值计 算低巾高个浓度的基质效应。数据分别见表,,。表乐卡地平和内标的基质效应和回收率: 生里垦璺坚鱼墨望三 墨垡旦型婴坠 ???币五丽??丽面亟五口【亟巫 什个 样本?业%型堂?%?幽%蛆幽%?』幽%蛐丝%?鬻酱垫 竺兰翌 ????????????????????????????????????????,?????????????? ????????????一。??一 表贝那普利的基质效应和回收率 竺 / ??????币面焉百????而面面两石一一。 什十 样本?%卫咝盟%???旦%堕业生%????%???一% ??????????????????????????????????????????????????????? ?????????????????????一。 .一 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . % . 表 贝那普利拉的基质效应和回收率 .???????????????????????????????????? ?????????一 ?????????? ???????????????????????????????????????????? / / ~。 / ”’ % % 样本.?蕊乒?可画广?丽????%??丙函??弋面一 %匣% . . . . . . . . . . . . . . . . . . 山东大学硕士学位论文 ..标准曲线 取空白血浆适量,用标准储备液系列配制含乐卡地平,,,,、、 /血浆样本,含贝那普利,,,,、、 /血浆样本, 含贝那普利拉,,,,、、 /血浆样本,按“样本处理”项下操 作,每一浓度进行样本分析,进样 ,记录色谱图;以待测物浓度为横坐标, 待测物与内标峰面积比值为纵坐标,用加权/最小二乘法进行回 归运算, 求得直线回归方程。血浆中乐卡地平、贝那普利、贝那普利拉标 准曲线如图,, 所示,各标准曲线数据分别见表,,。山东大学硕士学位论文 。????????????????????????????????????????????????????? ???????????????一 图乐卡地平血浆测定标准曲线 . 表乐卡地平标准曲线数据.峰面积比值 ?????.??????? .???????????????????????????????????????/.. 。??。。。。?。。。。?。。?。。? ??????????????????????????????????????????????/ / / / / / / 慧 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 一 . . . . . . . 工山东大学硕士学位论文 图贝那普利血浆测定标准曲线 . 表贝那普利标准曲线数据.峰面积比值 .??....??.???......?? /.. .???.?.,......?? / 咖 / / 咖 咖 咖 样本. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . % . . . . . . . 山东大学硕士学位论文 图贝那普利拉血浆测定标准曲线.表贝那普利拉标准曲线数据一 峰面积比值 .?.?...??., ..????...?.?..?.???? /. / 咖 / / 咖 /札 咖 样本. . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . ;. . . . . . . . . . . % . . . . . . 一 乐卡地平在 /范围内线型范围良好,标准曲线方程为. .,.。贝那普利在/范围内线型范围良好,标准曲线方程 一.,.。贝那普利拉在 为. /范围内线型范围良 山东大学硕士学位论文 .,. 好,标准曲线方程为. 。可满足血浆样本浓度测定的要 求。 ..最低定量限 取空白血浆. ,用标准储备液系列配制成相当于乐卡地平、贝那普利、贝那 普利拉血浆浓度为 /的样本,按“样本处理”项下操作,进行样本分析,进样 。根据标准曲线计算测得浓度。结果表明该方法最低定量限为 /,数据见表 ,,。 表乐卡地平的最低定量限 . . ? , ? ? ? ?. , ?? ? ?表 贝那普利的最低定量限 一 一??????????????????????????????????’??。??’。’。。。。。。 ?。。。。。。。。。。。‘’。。?。。。。。。。。。。。。。。。‘。。??。????‘一 . . .】 . .. . . . . . . 表 贝那普利拉的最低定量限 . .. . . . . ?. . ?.