高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷

高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷 高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼 草皂苷 . 目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷?b的 含量。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6 mm× 200 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(80?20)，检测波长为250 nm，流速为1 ml?min-1。结果醉鱼草皂苷?b在3.17,31.7 μg/ml范围内峰面积与其浓度 呈良好的线性关系，平均回收率为99.4%(RSD=1.2%)。结论此法简便、准确， 可作为断血流胶囊含量测定的方法。 . 断血流胶囊; 醉鱼草皂苷?b; 高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveTo establish a method of HPLC for determination of Buddlejasaponins ?b in Duan Xueliu Capsules.MethodsThe RP HPLC method was used.The Sim pack was Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm,5μm).The mobile phase was methanol water(80? 20) and the detection wavelength was 250 nm. The flow rate was 1.0 ml?min-1.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 3.17,31.7 μg/ml for Buddlejasaponins ?b .The average recovery of Buddlejasaponins ?b was 99.4%(RSD=1.2%).ConclusionThe method is simple ,accurate and can be used for determination of Duan Xueliu Capsules. Key words:Duan Xue Liu Capsules; Buddlejasaponins ?b ; HPLC 醉鱼草皂苷?b又名断血流皂苷A，断血流胶囊原质量中采用薄层 扫描法测定其在制剂中含量,1,，此法由于杂质干扰，薄层色带颜色深，结果 重现性差,2,。本文作者尝试采用文献方法,2,4,测定断血流胶囊中的醉鱼 皂苷?b的含量，并进行方法学验证。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪(岛津LC 10AT，检测器SPD 10A，浙大N 2000软件)，数控超声波清洗器(KQ 300DE型，昆山市超声仪器有限公司)，分析天平(德国塞多利斯GENIUS210型);断血流胶囊(江苏晨牌药业有限公司生产， 050610;自制，规格:0.35 g/粒，批号规格:0.35 g/粒，批号050529， 050901，050902，050903)，醉鱼草皂苷?b .(断血流皂苷A)对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号110782 200301)，甲醇(色谱纯)，其他试剂均为分析纯。水为重蒸水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱为C18(大连依利特Hypersil BDS C18，4.6 mm×200 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(80?20);检测波长为250 nm;流速1 ml/min;柱温为室温;灵敏度0.04 AUFS。 2.2 系统适用性实验在上述色谱条件下，精密吸取醉鱼草皂苷?b 对 μl，分别注入液相色谱仪，色谱图(见图照品溶液及供试品溶液各20 1,2)。在该色谱条件下，供试品色谱中在与醉鱼草皂苷?b 对照品色谱相应的保留时间位置上有相应的色谱峰，理论板数按醉鱼草皂苷?b 峰计算，对照品为2619，供试品为4737，主峰和杂峰之间的分离度均大于1.5，符合《中国药典》要求，规定理论板数按醉鱼草皂苷?b 峰计算不得低于2000。 在上述色谱条件下，精密吸取线性验证中序号为4的对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，连续进样操作5次，醉鱼草皂苷?b 峰面积RSD值1.9%，对照品进样重复性符合《中国药典》要求。 2.3 专属性验证按照工艺，制成不含断血流的阴性样品，同供试品溶液制备法制备得阴性样溶液。在上述色谱条件下，精密吸取阴性样品溶液20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(见图3)。在该色谱条件下，在与醉鱼草皂苷?b 保留时间相同的位置未出现色谱峰，表明其它成分对醉鱼草皂苷?b 的测定无干扰，方法的专属性符合要求。 2.4 线性验证精密称取醉鱼草皂苷?b 对照品3.17 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，使溶解，摇匀，精密量取0.5，1，2，4，5 ml，分置10 ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。吸取上述5种浓度的溶液各20 μl注入液相 色谱仪，以醉鱼草皂苷?b 峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得线性方程为:Y=7621.5X,2317.2，r=0.999 8。表明醉鱼草皂苷?b 浓度在3.17,31.7 μg/ml范围内峰面积线性关系良好。 2.5 重复性实验取同一批号的供试品(050901)，按供试品含量测定项下方法测定6次，结果醉鱼草皂苷?b 平均含量为2.2 mg/粒，RSD值为1.4%。 2.6 稳定性实验精密吸取断血流胶囊供试品(050901)溶液20 μl， ，4，8，24，28 h测定，结果醉鱼草皂苷?b 峰面积平均值为分别在0 117154.4，RSD值为1.0%。供试品溶液28 h内稳定性良好，可满足测定时间的要求。 2.7 加样回收率实验精密称取已知含量的样品(050901)6份，分别精密加入不同浓度醉鱼草皂苷?b 对照品溶液10 ml，按供试品含量测定项下 。表1 的方法进行操作，测定并计算样品中醉鱼草皂?b 的回收率。结果见表1醉鱼草皂苷?b 加样回收率实验结果(略) 2.8 供试品的含量测定 2.8.1 对照品溶液的制备精密称取醉鱼草皂苷?b 对照品适量，用甲醇制成每毫升含15 μg的溶液，作为对照品溶液。 2.8.2 供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取0.3 g，用75%乙醇50 ml分别超声提取(300W，40 kHz)2次，15 min/次，滤过，滤液置100 ml量瓶中，加75%乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。 2.8.3 测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，在上述色谱条件下注入液相色谱仪，测定，即得。 2.8.4 5批样品含量测定结果见表2。表2 样品含量测定结果(略) 3 讨论 用高效液相色谱法测定断血流中醉鱼草皂苷?b 含量，经线性、精密度(重复性实验、稳定性实验)、准确度(加样回收率实验)、专属性等方法学验证，其符合定量分析的要求，且简便、快速，适于作为断血流胶囊的含量测定方法。故将已有标准中含量测定的方法由薄层扫描法修改为高效液相色谱法是可行的。 3.1 检测波长的选择取醉鱼草皂苷?b 对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含0.01 mg的溶液，结果在250 nm处有较强的吸收，与文献,2,4,记载一致，故选择250 nm处作为检测波长。 3.2 供试品溶液制备方法的选择将用3种方法制备的同一批号的供试品溶液注入色谱仪，测定。结果醉鱼草皂苷?b 含量，方法1(按断血流片标准,4,中的方法)为1.48 mg/粒，方法2(按文献,3,方法)为2.04 mg/粒，方法3(溶剂改为甲醇，余同方法2)为1.92 mg/粒。3种制备方法测得的醉鱼草皂苷?b 含量以方法1最低，方法2最高，且方法2操作的简便性、环保性也较好，故供试品制备方法选择方法2为宜。 . ,1,卫生部药品标准?新药转正标准，第27册,S,.2000:53. ,2,徐国兵，方晓明，樊和平.高效液相色谱测定断血流颗粒中断血流皂苷的含量,J,.中国药学杂志，2005，40(2):317. ,3,杨 絮，余世春，王有胜，等.HPLC法测定断血流片中断血流皂苷A的含量,J,.中国药学杂志，2002，16(4):15. ,4,国家药典委员会，中国药典，?部.,S,.北京:化学工业出版社，2005:608.