药理学专业优秀论文 黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表达作用的研究

药理学专业优秀论文 黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表达作用的研究 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 药理学专业优秀论文 黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表 达作用的研究 关键词:黄连解毒汤 快速老化模型 海马 蛋白质组学 双向电泳 差异蛋白 记 忆能力 阿尔茨海默病 摘要:本研究选择包括六味地黄汤、八味地黄汤、当归芍药散、调心方及黄连解毒汤在内的几种功能主治不同的中药复方作为工具药物，以与阿尔茨海默病(AD)具有相似病理特点的快速老化模型小鼠(SAM)P8亚系(SAMP8)为模型，通过实验治疗并结合抑制消减杂交、基因芯片和蛋白质组学等技术从与学习记忆或认知功能密切相关的脑区寻找药物反应基因和蛋白，旨在通过分析与比较，确定上述中药复方发挥抗AD作用的主要环节或靶点，并据此提出并通过验证确定一组或几组AD防治药物筛选和评价的“组合靶标”，为新型抗AD药物筛选和评价体系的建立奠定基础。 本文主要研究在于，首先应用学习记忆行为实验初步验证清热解毒方剂黄连解毒汤对SAMP8学习记忆能力的改善作用，进而应用蛋白质组学技术，观察黄连解毒汤作用下海马这一与AD病理变化及学习记忆损害密切相关脑区蛋白表达的变化，并通过对其中的差异蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，初步获得海马中的黄连解毒汤反应蛋白，为揭示黄连解毒汤作用环节或作用靶点提供依据。同时通过与六味地黄汤、八味地黄汤和当归芍药散进行分析与比较，获得黄连解毒汤与这三个方剂的共同反应蛋白和各自特异性的反应蛋白，为抗AD药物筛选和评价“组合靶标”的提出和后续的靶标验证工作提供线 一、黄连解毒汤对12月龄SAMP8学习记忆行为的影响 本研究以SAMP8索。 作为学习记忆障碍模型，通过Moms水迷宫实验和跳台实验观察了黄连解毒汤(HLJDT)对SAMP8空间学习记忆能力和被动回避能力的影响。Morris水迷宫实验结果表明，与同龄SAMRl相比， SAMP8在定位航行实验中的逃避潜伏期明显延长，空间探索实验中的目标穿环次数明显下降，灌胃给予HuDT(2.5g/kg)，连续2个月，可明显缩短SAMP8的逃避潜伏期，并且可明显提高目标穿环次数。跳台实验结果表明，训练期间SAMP8逃避电击成功率低于SAMRl，灌胃给予HLJDT后，提高了SAMP8逃避电击成功率;测试阶段SAMP8的跳台错误次数高于SAMR1，灌胃给予HLJDT后跳台错误次数明显下降。结果提示SAMP8被动回避反应能力降低，HUDT对其具有一定的改善作用。 二、黄连解毒汤对12月龄SAMP8海马蛋白表达的影响 (一)12月龄SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的分离和鉴定 1 SAMR1和SAMP8海马蛋白表达谱的建立及差异分析 首先采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察12月龄SAMR1和SAMP8的海马蛋白表达谱，结果表明，与SAMR1相比，SAMP8海马中表达存在明显差异的蛋白点有29个，其中8个蛋白点显著上调，21个蛋白点显著下调。 2 SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析 选取上述差异蛋白点中的15个，经胶内酶切、MALDI-TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据库查询进行蛋白鉴定，结果表明这15个蛋白点对应15个蛋白，且均为已知功能蛋白，其中有3个蛋白在SAMP8中表达显著上调，12个蛋白表达显著下调。 利用公共数据库对上述15个差异蛋白的功能及相关信息进行检索，结果表明，这些蛋白功能可分为以下8类，其中不均一核内核糖核蛋白K、腺苷酸激酶4和β-微管蛋白3个蛋白在SAMP8中表达上调;其它蛋白，包括α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、突触后密度蛋白 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 95、Stathmin蛋白、蛋白酶体β&lt;,4&gt;、肽酰脯胺酰胺顺反式异构酶、泛素结合酶E、CDCrel-1和Villin2等在SAMP8海马中表达下调。 (二)黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达的影响 1 黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达谱的影晌及差异分析 采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察了连续灌胃给予2.5α/kgHLJDT 2个月后SAMP8海马蛋白表达谱的变化。结果表明，与SAMP8对照组比较，给予HUDT后SAMP8海马中出现明显差异表达的蛋白点共有38个，其中18个蛋白点表达显著上调，20个蛋白点表达显著下调。 2 黄连解毒汤反应蛋白点的质谱鉴定及生物信息学分析 选取14个给予HUDT后表达水平具有明显变化的蛋白点经胶内酶切、MALDI-TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据库查询进行蛋白鉴定，结果有13个蛋白点鉴定获得了肽质量指纹谱，数据库查询表明它们对应13个蛋白，其中11个蛋白为已知功能蛋白，2个为未知功能蛋白。11个已知功能蛋白中，有5个蛋白在给予HLJDT的SAMP8海马中表达显著上调，7个表达显著下调;2个未知功能蛋白给予HLJDT后表达均下调。 利用公共数据库对己知蛋白的功能及相关信息进行了检索，结果表明，上述13个具有明确功能的蛋白可分为5类，其中α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、腺苷酸激酶4、Stathmin 1蛋白及髓细胞性白血病因子2共5个蛋白，它们在灌胃给予HLJDT后的SAMP8海马中表达上调;醛缩酶C、α烯醇酶、不均一核内核糖核蛋 、septin 11、谷氨酰胺合成酶和磷酸甘油酸变位酶1共6个蛋白在给予HLJDT白H2 的SAMP8海马中表达下调。 三、黄连解毒汤与六味地黄汤、八昧地黄汤和当归芍药散对SAMP8海马蛋白表达影响的比较 将它们与HUDT的反应蛋白进行了生物信息学分析与比较，旨在从这四个方剂中寻找它们的共同反应蛋白和各自特异的反应蛋白。 (一)四方剂的共同反应蛋白 对12月龄SAMP8分别给予LW、BW、DSS及HUDT后获得的差异蛋白及药物反应蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，得到四方剂的共同反应蛋白共计14个，按功能可分为7类。 (二)四方剂特异性的反应蛋白 上述四个方剂除了共同的反应蛋白之外，还有其特异性的反应蛋白。其中HLJDT特异性的反应蛋白点按其功能可以分为5类。BW特异性的反应蛋白为β伴侣素，属于热休克蛋白类。DSS特异性药物反应蛋白按功能可以分为4类。 四、蛋白免疫印迹对部分差异蛋白的验证 根据差异蛋白的功能提示，选择了醛缩酶3，C异构体和还原型辅酶I-辅酶Q氧化还原酶，谷胱苷肽-S-转移酶，谷氨酰胺合成酶，酪氨酸蛋白激酶2共5个蛋白进行验证。双向电泳结合质谱鉴定结果表明，与同龄SAMRl相比，醛缩酶3和C异构体蛋白在SAMP8海马中表达显著上调，给予DSS或HLJDT后它们的表达水平明显下调，给予BW后它们的表达水平有下调趋势;酪氨酸蛋白激酶2在SAMP8海马中表达也显著上调，而给予LW或BW后其表达水平明显下调。 五、腺苷酸激酶4(AK4)在SAM海马中表达的动态变化情况 SAM海马蛋白的双向电泳结合质谱鉴定的结果表明，腺苷酸激酶4(AK4)在2、6及12月龄SAMR1海马中均未见表达，而在各个月龄SAMP8海马中呈高表达，提示AK4可能与老化的发生密切相关。本研究应用免疫印迹实验，进一步观察了AK4在2、6、12及18月龄SAMP8海马中的动态变化情况，并与同龄SAMR1进行了比较。结果显示，AK4在2-18月龄SAMP8中呈高表达，且随增龄其表达水平有逐步升高的趋势，与此相反，其在SAMR1海马中的表达仅出现于18月龄时，且表达非常微弱，其余月龄SAMR1均未见表达。 通过以上研究，本论文得到以下结论: 1(与同龄SAMR1相比，SAMP8空间学习记忆功能明显下降，被动回避反应能力降低，灌胃给予HLJDT可明显提高SAMP8的空间学习记忆能力，对其被动回避反应能力也有一定改善作用，说明 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 HUDT具有益智作用。 2(12月龄SAMP8和SAMR1海马中有29个差异蛋白点，经质谱鉴定，共鉴定出15个蛋白，均为已知功能蛋白，它们的功能涉及能量代谢、蛋白合成降解、细胞骨架组成、信号转导等。上述差异蛋白可能与SAMP8学习记忆功能障碍有关，可为SAMP8脑老化机制或防治AD药物靶标的研究提供线索。 3(灌胃给予HLJDT2个月后SAMP8海马蛋白表达变化的蛋白点有38个，选择其中14个点进行质谱鉴定，鉴定出13个，其中5个蛋白在给予HLJDT后表达显著上调，8个蛋白给予HLJDT后表达显著下调。结果说明HLJDT对SAMP8海马蛋白的表达具有调节作用，对这些蛋白的功能进行分析和研究有望为揭示HLJDT作用机理乃至发现抗AD药物作用新靶标提供线索。 4(比较六味地黄汤、八味地黄汤、当归芍药散及黄连解毒汤这四个临床和实验药理学均证明可有效防治AD的方剂对SAMP8海马蛋白表达的影响，结果表明，这四个方剂既有共同的反应蛋白，也有各自特异的反应蛋白。共同反应蛋白可能是四方剂防治AD 组过程中存在的共同或关键作用环节或靶点，有望成为抗AD药物筛选和评价“合靶标”的重要组成部分。 5(运用蛋白免疫印迹实验对醛缩酶C、还原型辅酶I-辅酶Q氧化还原酶等五个差异蛋白的表达进行了验证，结果表明，与双向电泳结合质谱的结果基本一致，提示采用双向电泳结合质谱分离鉴定差异蛋白的结果基本可靠。 6(应用免疫印迹实验，观察差异蛋白腺苷酸激酶4(AK4)在 动态变化情况，结果显示AK4在2-18月龄快速老化小鼠SAMP8SAM海马中表达的 中呈高表达，且随增龄其表达水平有逐步升高的趋势，而在正常对照小鼠SAMR-1海马中的表达仅出现于18月龄时，且表达非常微弱，其余月龄SAMR1均未见表达。提示AK4可能是一个老化相关的蛋白，值得进一步深入研究。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 正文内容 本研究选择包括六味地黄汤、八味地黄汤、当归芍药散、调心方及黄连解毒汤在内的几种功能主治不同的中药复方作为工具药物，以与阿尔茨海默病(AD)具有相似病理特点的快速老化模型小鼠(SAM)P8亚系(SAMP8)为模型，通过实验治疗并结合抑制消减杂交、基因芯片和蛋白质组学等技术方法从与学习记忆或认知功能密切相关的脑区寻找药物反应基因和蛋白，旨在通过分析与比较，确定上述中药复方发挥抗AD作用的主要环节或靶点，并据此提出并通过验证确定一组或几组AD防治药物筛选和评价的“组合靶标”，为新型抗AD药物筛选和评价体系的建立奠定基础。 本文主要研究内容在于，首先应用学习记忆行为实验初步验证清热解毒方剂黄连解毒汤对SAMP8学习记忆能力的改善作用，进而应用蛋白质组学技术，观察黄连解毒汤作用下海马这一与AD病理变化及学习记忆损害密切相关脑区蛋白表达的变化，并通过对其中的差异蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，初步获得海马中的黄连解毒汤反应蛋白，为揭示黄连解毒汤作用环节或作用靶点提供依据。同时通过与六味地黄汤、八味地黄汤和当归芍药散进行分析与比较，获得黄连解毒汤与这三个方剂的共同反应蛋白和各自特异性的反应蛋白，为抗AD药物筛选和评价“组合靶标”的提出和后续的靶标验证工作提供线 一、黄连解毒汤对12月龄SAMP8学习记忆行为的影响 本研究以SAMP8索。 作为学习记忆障碍模型，通过Moms水迷宫实验和跳台实验观察了黄连解毒汤(HLJDT)对SAMP8空间学习记忆能力和被动回避能力的影响。Morris水迷宫实验结果表明，与同龄SAMRl相比， SAMP8在定位航行实验中的逃避潜伏期明显延长，空间探索实验中的目标穿环次数明显下降，灌胃给予HuDT(2.5g/kg)，连续2个月，可明显缩短SAMP8的逃避潜伏期，并且可明显提高目标穿环次数。跳台实验结果表明，训练期间SAMP8逃避电击成功率低于SAMRl，灌胃给予HLJDT后，提高了SAMP8逃避电击成功率;测试阶段SAMP8的跳台错误次数高于SAMR1，灌胃给予HLJDT后跳台错误次数明显下降。结果提示SAMP8被动回避反应能力降低，HUDT对其具有一定的改善作用。 二、黄连解毒汤对12月龄SAMP8海马蛋白表达的影响 (一)12月龄SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的分离和鉴定 1 SAMR1和SAMP8海马蛋白表达谱的建立及差异分析 首先采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察12月龄SAMR1和SAMP8的海马蛋白表达谱，结果表明，与SAMR1相比，SAMP8海马中表达存在明显差异的蛋白点有29个，其中8个蛋白点显著上调，21个蛋白点显著下调。 2 SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析 选取上述差异蛋白点中的15个，经胶内酶切、MALDI-TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据库查询进行蛋白鉴定，结果表明这15个蛋白点对应15个蛋白，且均为已知功能蛋白，其中有3个蛋白在SAMP8中表达显著上调，12个蛋白表达显著下调。 利用公共数据库对上述15个差异蛋白的功能及相关信息进行检索，结果表明，这些蛋白功能可分为以下8类，其中不均一核内核糖核蛋白K、腺苷酸激酶4和β-微管蛋白3个蛋白在SAMP8中表达上调;其它蛋白，包括α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、突触后密度蛋白95、Stathmin蛋白、蛋白酶体β&lt;,4&gt;、肽酰脯胺酰胺顺反式异构酶、泛素结合酶E、CDCrel-1和Villin2等在SAMP8海马中表达下调。 (二)黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达的影响 1 黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达谱的影晌及差异分析 采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察了连续灌胃给予2.5α/kgHLJDT 2个月后SAMP8海马蛋白表达谱的变化。结果表明，与SAMP8 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 对照组比较，给予HUDT后SAMP8海马中出现明显差异表达的蛋白点共有38个，其中18个蛋白点表达显著上调，20个蛋白点表达显著下调。 2 黄连解毒汤反应蛋白点的质谱鉴定及生物信息学分析 选取14个给予HUDT后表达水平具有明显变化的蛋白点经胶内酶切、MALDI-TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据库查询进行蛋白鉴定，结果有13个蛋白点鉴定获得了肽质量指纹谱，数据库查询表明它们对应13个蛋白，其中11个蛋白为已知功能蛋白，2个为未知功能蛋白。11个已知功能蛋白中，有5个蛋白在给予HLJDT的SAMP8海马中表达显著上调，7个表达显著下调;2个未知功能蛋白给予HLJDT后表达均下调。 利用公共数据库对己知蛋白的功能及相关信息进行了检索，结果表明，上述13个具有明确功能的蛋白可分为5类，其中α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、腺苷酸激酶4、Stathmin 1蛋白及髓细胞性白血病因子2共5个蛋白，它们在灌胃给予HLJDT后的SAMP8海马中表达上调;醛缩酶C、α烯醇酶、不均一核内核糖核蛋 、septin 11、谷氨酰胺合成酶和磷酸甘油酸变位酶1共6个蛋白在给予HLJDT白H2 的SAMP8海马中表达下调。 三、黄连解毒汤与六味地黄汤、八昧地黄汤和当归芍药散对SAMP8海马蛋白表达影响的比较 将它们与HUDT的反应蛋白进行了生物信息学分析与比较，旨在从这四个方剂中寻找它们的共同反应蛋白和各自特异的反应蛋白。 (一)四方剂的共同反应蛋白 对12月龄SAMP8分别给予LW、BW、DSS及HUDT后获得的差异蛋白及药物反应蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，得到四方剂的共同反应蛋白共计14个，按功能可分为7类。 (二)四方剂特异性的反应蛋白 上述四个方剂除了共同的反应蛋白之外，还有其特异性的反应蛋白。其中HLJDT特异性的反应蛋白点按其功能可以分为5类。BW特异性的反应蛋白为β伴侣素，属于热休克蛋白类。DSS特异性药物反应蛋白按功 根据差异蛋白能可以分为4类。 四、蛋白免疫印迹对部分差异蛋白的验证 的功能提示，选择了醛缩酶3，C异构体和还原型辅酶I-辅酶Q氧化还原酶，谷胱苷肽-S-转移酶，谷氨酰胺合成酶，酪氨酸蛋白激酶2共5个蛋白进行验证。双向电泳结合质谱鉴定结果表明，与同龄SAMRl相比，醛缩酶3和C异构体蛋白在SAMP8海马中表达显著上调，给予DSS或HLJDT后它们的表达水平明显下调，给予BW后它们的表达水平有下调趋势;酪氨酸蛋白激酶2在SAMP8海马中表达也显著上调，而给予LW或BW后其表达水平明显下调。 五、腺苷酸激酶4(AK4)在SAM海马中表达的动态变化情况 SAM海马蛋白的双向电泳结合质谱鉴定的结果表明，腺苷酸激酶4(AK4)在2、6及12月龄SAMR1海马中均未见表达，而在各个月龄SAMP8海马中呈高表达，提示AK4可能与老化的发生密切相关。本研究应用免疫印迹实验，进一步观察了AK4在2、6、12及18月龄SAMP8海马中的动态变化情况，并与同龄SAMR1进行了比较。结果显示，AK4在2-18月龄SAMP8中呈高表达，且随增龄其表达水平有逐步升高的趋势，与此相反，其在SAMR1海马中的表达仅出现于18月龄时，且表达非常微弱，其余月龄SAMR1均未见表达。 通过以上研究，本论文得到以下结论: 1(与同龄SAMR1相比，SAMP8空间学习记忆功能明显下降，被动回避反应能力降低，灌胃给予HLJDT可明显提高SAMP8的空间学习记忆能力，对其被动回避反应能力也有一定改善作用，说明HUDT具有益智作用。 2(12月龄SAMP8和SAMR1海马中有29个差异蛋白点，经质谱鉴定，共鉴定出15个蛋白，均为已知功能蛋白，它们的功能涉及能量代谢、蛋白合成降解、细胞骨架组成、信号转导等。上述差异蛋白可能与SAMP8学习记忆功能障碍有关，可为SAMP8脑老化机制或防治AD药物靶标的研究提供线索。 3(灌胃给予HLJDT2个月后SAMP8海马蛋白表达变化的蛋白点有38 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 个，选择其中14个点进行质谱鉴定，鉴定出13个，其中5个蛋白在给予HLJDT后表达显著上调，8个蛋白给予HLJDT后表达显著下调。结果说明HLJDT对SAMP8海马蛋白的表达具有调节作用，对这些蛋白的功能进行分析和研究有望为揭示HLJDT作用机理乃至发现抗AD药物作用新靶标提供线索。 4(比较六味地黄汤、八味地黄汤、当归芍药散及黄连解毒汤这四个临床和实验药理学均证明可有效防治AD的方剂对SAMP8海马蛋白表达的影响，结果表明，这四个方剂既有共同的反应蛋白，也有各自特异的反应蛋白。共同反应蛋白可能是四方剂防治AD过程中存在的共同或关键作用环节或靶点，有望成为抗AD药物筛选和评价“组合靶标”的重要组成部分。 5(运用蛋白免疫印迹实验对醛缩酶C、还原型辅酶I-辅酶Q氧化还原酶等五个差异蛋白的表达进行了验证，结果表明，与双向电泳结合质谱的结果基本一致，提示采用双向电泳结合质谱分离鉴定差异蛋白的结果基本可靠。 6(应用免疫印迹实验，观察差异蛋白腺苷酸激酶4(AK4)在 -18月龄快速老化小鼠SAMP8SAM海马中表达的动态变化情况，结果显示AK4在2 中呈高表达，且随增龄其表达水平有逐步升高的趋势，而在正常对照小鼠SAMR-1海马中的表达仅出现于18月龄时，且表达非常微弱，其余月龄SAMR1均未见表达。提示AK4可能是一个老化相关的蛋白，值得进一步深入研究。 本研究选择包括六味地黄汤、八味地黄汤、当归芍药散、调心方及黄连解毒汤在内的几种功能主治不同的中药复方作为工具药物，以与阿尔茨海默病(AD)具有相似病理特点的快速老化模型小鼠(SAM)P8亚系(SAMP8)为模型，通过实验治疗并结合抑制消减杂交、基因芯片和蛋白质组学等技术方法从与学习记忆或认知功能密切相关的脑区寻找药物反应基因和蛋白，旨在通过分析与比较，确定上述中药复方发挥抗AD作用的主要环节或靶点，并据此提出并通过验证确定一组或几组AD防治药物筛选和评价的“组合靶标”，为新型抗AD药物筛选和评价体系的建立奠定基础。 本文主要研究内容在于，首先应用学习记忆行为实验初步验证清热解毒方剂黄连解毒汤对SAMP8学习记忆能力的改善作用，进而应用蛋白质组学技术，观察黄连解毒汤作用下海马这一与AD病理变化及学习记忆损害密切相关脑区蛋白表达的变化，并通过对其中的差异蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，初步获得海马中的黄连解毒汤反应蛋白，为揭示黄连解毒汤作用环节或作用靶点提供依据。同时通过与六味地黄汤、八味地黄汤和当归芍药散进行分析与比较，获得黄连解毒汤与这三个方剂的共同反应蛋白和各自特异性的反应蛋白，为抗AD药物筛选和评价“组合靶标”的提出和后续的靶标验证工作提供线索。 一、黄连解毒汤对12月龄SAMP8学习记忆行为的影响 本研究以SAMP8作为学习记忆障碍模型，通过Moms水迷宫实验和跳台实验观察了黄连解毒汤(HLJDT)对SAMP8空间学习记忆能力和被动回避能力的影响。Morris水迷宫实验结果表明，与同龄SAMRl相比， SAMP8在定位航行实验中的逃避潜伏期明显延长，空间探索实验中的目标穿环次数明显下降，灌胃给予HuDT(2.5g/kg)，连续2个月，可明显缩短SAMP8的逃避潜伏期，并且可明显提高目标穿环次数。跳台实验结果表明，训练期间SAMP8逃避电击成功率低于SAMRl，灌胃给予HLJDT后，提高了SAMP8逃避电击成功率;测试阶段SAMP8的跳台错误次数高于SAMR1，灌胃给予HLJDT后跳台错误次数明显下降。结果提示SAMP8被动回避反应能力降低，HUDT对其具有一定的改善作用。 二、黄连解毒汤对12月龄SAMP8海马蛋白表达的影响 (一)12月龄SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的分离和鉴定 1 SAMR1和SAMP8海马蛋白表达谱的建立及差异分析 首先采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察12月龄SAMR1和SAMP8的海马蛋白表达谱，结果表明，与SAMR1相 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 比，SAMP8海马中表达存在明显差异的蛋白点有29个，其中8个蛋白点显著上调，21个蛋白点显著下调。 2 SAMR1和SAMP8海马差异蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析 选取上述差异蛋白点中的15个，经胶内酶切、MALDI-TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据库查询进行蛋白鉴定，结果表明这15个蛋白点对应15个蛋白，且均为已知功能蛋白，其中有3个蛋白在SAMP8中表达显著上调，12个蛋白表达显著下调。 利用公共数据库对上述15个差异蛋白的功能及相关信息进行检索，结果表明，这些蛋白功能可分为以下8类，其中不均一核内核糖核蛋白K、腺苷酸激酶4和β-微管蛋白3个蛋白在SAMP8中表达上调;其它蛋白，包括α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、突触后密度蛋白95、Stathmin蛋白、蛋白酶体β&lt;,4&gt;、肽酰脯胺酰胺顺反式异构酶、泛素结合酶E、CDCrel-1和Villin2等在SAMP8海马中表达下调。 (二)黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达的影响 1 黄连解毒汤对SAMP8海马蛋白表达谱的影晌及差异分析 采用双向凝胶电泳结合图像分析技术观察了连续灌胃给予 α/kgHLJDT 2个月后SAMP8海马蛋白表达谱的变化。结果表明，与SAMP8对2.5 照组比较，给予HUDT后SAMP8海马中出现明显差异表达的蛋白点共有38个，其中18个蛋白点表达显著上调，20个蛋白点表达显著下调。 2 黄连解毒汤反应蛋白点的质谱鉴定及生物信息学分析 选取14个给予HUDT后表达水平具有 -TOF-MS测定肽质量指纹谱、Mascot数据明显变化的蛋白点经胶内酶切、MALDI 库查询进行蛋白鉴定，结果有13个蛋白点鉴定获得了肽质量指纹谱，数据库查询表明它们对应13个蛋白，其中11个蛋白为已知功能蛋白，2个为未知功能蛋白。11个已知功能蛋白中，有5个蛋白在给予HLJDT的SAMP8海马中表达显著上调，7个表达显著下调;2个未知功能蛋白给予HLJDT后表达均下调。 利用公共数据库对己知蛋白的功能及相关信息进行了检索，结果表明，上述13个具有明确功能的蛋白可分为5类，其中α异柠檬酸脱氢酶、ATP合酶、腺苷酸激酶4、Stathmin 1蛋白及髓细胞性白血病因子2共5个蛋白，它们在灌胃给予HLJDT后的SAMP8海马中表达上调;醛缩酶C、α烯醇酶、不均一核内核糖核蛋白H2、septin 11、谷氨酰胺合成酶和磷酸甘油酸变位酶1共6个蛋白在给予HLJDT的SAMP8海马中表达下调。 三、黄连解毒汤与六味地黄汤、八昧地黄汤和当归芍药散对SAMP8海马蛋白表达影响的比较 将它们与HUDT的反应蛋白进行了生物信息学分析与比较，旨在从这四个方剂中寻找它们的共同反应蛋白和各自特异的反应蛋白。 (一)四 《《《特别提醒》》》:正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。 " 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 垐垯櫃 换烫梯葺铑? endstream endobj 2 x滌甸??*U躆? 跦??ǜ?l, 墀VGi?o嫅#^4K錶c&伣嘰呐q 虻U節鉡c姥 ? ?BL偤7.X 哖?]驳疗" g讍` l/<5蔍`7sQ\I vs疖 ?S [J%J 7鑥 伍妰遠Y 魥 靤 /W鐼E v I雓1傀 霯q聊湝 ECu?knb?.:?澍羈 7?坋:;俐hEan[2 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 P6?!八帊/=櫕貵`Wp?U脞姦%?qj ?颬 儼噃I V 壂 G邊??Vг忣鏕裚?靈模? ?慞 擭昄X?;萕屄P,' 枍U霩R嚵蝆RC`珵墂锬襵")焟滫?ob#噡滴覇羘幥d Peブt?Pf臕?m稅盠?恁 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 v_關lm ,OMK?^'vOp牯V睟艶頛4. ?鮠4l 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 O??鼎? #濔%滷?腵鳐 #C?另 v|j'珬 i|葙K 羇胞Tt?"1鱳忞1? ?#1? ?# 谺? 豣? 豅? 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