布洛伪麻片质量标准研究

布洛伪麻片质量研究 l73262‘ 分类号 密级 (UDO 学 位 论 文 布洛伪麻片质量标准的研究 作者姓名:曲建国 指导教师: 王林山 教授 潘阳 主任药师 东北大学理学院化学系 辽宁省食品药品检验所 申请学位级别: 硕士 学科类别: 工学 学科专业名称: 化学工程 提交同期: 2009年5月30日论文答辩日期: 学位授予日期: 年月 日 答辩委员会主席: 评 阅 人: (( 东北大学 2009年6月 ? AThesisin of on i Standard Qual Study ty Pseudo ine orideTablets ephedrHydrochl byQujian guo linshan Supervisor:Professor Wang pan yang ? ?JlI ? NortheasternUniversi ty 2009 June ? ^p。 J 一， ? 独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是在导师的指导下完成的。论文中取得 的研究成果除加以标注和致谢的地方外，不包含其他人己经发表或撰写过 的研究成果，也不包括本人为获得其他学位而使用过的材料。与我一同工 作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者签名: 陶悯 日 期: 沙7??彭??二7 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者和指导教师完全了解东北大学有关保留、使用学位论 文的规定:即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人同意东北大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索、交流。 - 作者和导师同意网上交流的时间为作者获得学位后: ?P 。 一年口 一年半口 两年口 学位论文作者签名:?赳司导师签名:司桫 签字同期:弘。T??‘‘砷 签字日期:山pF、‘、哕 ， 东北大学硕士学位论丈 摘要 布洛伪麻片质量标准的研究 摘 要 HCI，PSE 两种药物的配伍而成，是国内外较为流行的复方制剂，用于治疗由感 冒引起的头痛、发 ( 热、咳嗽、鼻塞等。布洛伪麻片质量标准从2005年版开始被收载于《中国药典》，根据 +’， 药品科研项目会议纪要的”要求、各生产单位对标准的修订及国内外质量标准 情况，本次研究采用高效液相色谱法对布洛伪麻片质量标准修订了溶出度检查项及含量 测定项。 本研究修订了原布洛伪麻片质量标准的溶出度检查项的溶出条件，使该项实验更好 的模拟了药品在体内溶出的实际情况，得出的数据与药品的生物利用度更Dn4 lTl关，从而 更好地控制了药品质量;修订了原布洛伪麻片质量标准的溶出度检查 项的检测方法，新 检测方法中的色谱系统消除了靠洛芬峰形不理想、样品分离度达不到要求等情况。本方 结果显示，本方法操作简便精密度好，结果准确可靠。 修订了原布洛伪麻片质量标准的含量测定的检测方法，新检测方法中的色谱系统消 除了布洛芬峰形不理想、基线不平稳等情况。本方法测定布洛芬的回收率为99(9,'--- 度好，结果准确可靠。 本次研究的布洛伪麻片质量标准消除了原标准的弊端，并且更易操作、方法更为合 一，- - 理、测得数据更为准确，从而更好地控制了药品质量。 关键词:布洛伪麻片;溶出度;含量测定;高效液相色谱法( 一II― ^ ， 一 ,’ N on of and Standard Quality lbuprofen Study Tablet PseudoephedrineHydrochloride Abstract of and kind Tablet，a popular PseudoephedrineHydrochloride Ibuprofen ? ?爹 东北大学硕士学位论文 Abstract more itwouldbe in the of comtrolling simple，reasonable，accurate，SOhelpful quality more thismedicine effectively( and Tablet; Dissolution; KeyWord:IbuprofenPseudoephedrineHydrochloride Performance Chromatography( Assay;High Liquid ^ 一 (?( 东北大学硕士学位论丈 目录 目 录 独创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„I 摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(II Abstract„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(„„„„„(„„„„„„(„„„„„„„„„III 第1章绪论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((1 1(1布洛伪麻片概 述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(1 1(1(1布洛伪麻片的使用背 景„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„l 1(1(2布洛伪麻片的药理与作用机制„„„„„„„„„„„„„„„„„(3 l。1。3布洛伪麻片的生物利用 度„„„„„„„„„„„„„„„„„„一4 1(2现行布洛伪麻片质量标准情况已报道的检测方法概述„„„„„„„„4 1(2(1布洛伪麻片质景标准情 况„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 1(2(2布洛伪麻片已报道的检测方法„„„„„„„„„„„„„„6 1(3布洛伪麻片样品收集情 况„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„6 1(4现行布洛伪麻片质量标准的弊端„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 1(5本课题的研究意义和内 容„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((8 1(5(1本课题的研究意义„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„,8 1(5(2本课题的研究内容„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究„„„„„„„„„11 1 2(1方法原理„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„l 2(1(1药代动力学方面„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1l 2(1(2天然药物及中成药方面„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1l 2 2(1(3抗生素方面„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 2(1(4药物残留检测方面„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(12 2 2(1(5毒物分析方面„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 3 2(2实验材料及仪 器„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 3 2(2(1实验材料„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((1 3 2(2(2实验仪器„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(1 2(3色谱条件的选 择„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„13 3 2(3(1流动相的选择„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 2(3(2检测波长的确定„„„„„„„„„„„„„„„„„,„??„„„„15 7 2(4方法学验 证„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(((„„„„„„(1 2(4(1山东新华制药股份有限公司产品(((„„((((„„„„„„„„„„„(17 2(4(2浙江亚克药业有限公司产品„„„„„„„„„„„„一„„,„„23 2(4各个生产单位的各批次样品的检测结 果„„„„„„„„„„„„„((27 2(5实验结 论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(((„„„„„„(((„„27 第3章布洛伪麻片溶出度方法学研究„„„„„„„„(((„(((„(29 (V( 东北大学硕士学位论文 目录 3(1方法原 理„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(29 3(1(1溶出度测定的基本方 法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„一29 3(1(2溶出溶剂的选择„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29 3(1(3溶出度的检测方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30 3(1(4溶出度的数据处理方法„„„„„„„„„„„„„„„„((30 l 3(2实验材料及仪 器„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 l 3(2(1实验材料„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(3 3(2(2实验仪 器„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(31 3(3方法学验 证„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(31 3(3(1山东新华制药股份有限公司产 品„„„„„„„„„„„„„„„(3l 3(3(2浙江亚克药业有限公 司„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„36 3(3(3哈药集团制药六 厂„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(41 3(4各个生产单位的各批次样品的检测结 果„„„„„„„„„„„„„。43 3(5实验结 论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„((44 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 第1章绪论 1(1布洛伪麻片概述 1(1(1布洛伪麻片的使用背景 HCl，PSE 两种药物的配伍而成，是国内外较为流行的复方组成，用于感冒、急 性鼻炎、急性鼻窦炎等引起的发热、头痛、鼻塞、流涕、咽喉痛、全身酸痛等症 状。 布洛芬是抗炎解热止痛类OTC产品，为芳基丙酸类非昌体抗炎药，主要通 过抑制外周前列腺素的合成而产生镇痛、抗炎、解热作用【I】，是临床使用最普遍 的NSAID类药物之一，被广大医师广泛地用于治疗风湿或类风湿疾病，以及 关 节肌肉痛、头痛、痛经等多种疼痛。因非甾体类抗炎药物 NSADS 具有良好的解 热、镇痛，抗炎作用，故临床应用经久不衰。长期以来，国内外学者对NSADS 在临床应用方面进行了深入研究【?】。NSADIS类药物因具有较好的消炎、镇痛、 缓解热作用而广泛应用于各种疼痛性骨关节炎 风湿性或类风湿性关节炎、强制 性脊柱炎、通风性关节炎等 、关节周围炎、软组织和神经损伤等，以及上呼吸 道感染、月经紊乱、晚期肿瘤以及其它发热、疼痛等体征和症状。实验iiEnJ]t1(5j 多种癌细胞中COX一2均上调，而诱导的PGEZ可刺激肿瘤细胞的增殖，促进癌细 胞迅速扩散和入侵组织，而通过Cox(2选择性抑制剂可阻断其产生，使前列腺素 抑制免疫反应的作用减弱影响癌细胞的增殖、凋亡以及肿瘤的血管发生。临床流 行病研究发现，长期服用NSADS药物可降低结肠直肠癌细胞的发病率，且与服 用时间成J下比:在服用Cox(2抑制剂的人群中，结肠癌的发生率显著低于未服用 者嘲;对高度表达的胃腺癌有治疗作用。另外有报道NSAIDs可治疗家族性肠道息 肉病[71。研究表明，阿尔茨海默病 AD 患者脑内存在慢性炎症反应，Cox(2有过 度表达。临床观察证实，通过Cox(2抑制剂的抗炎及其自由基清除作用，NSAIDS 可减轻脑内炎症作用，延缓 AD 的发展进程和推迟发病年龄。临床研究显示: 服 老年人，其发生AD的相对危险为O(65，长期服用对65岁以上的老年人认知功 能有保护作用【81。目前由于AD炎症尚未定论，NSAIDs未能推广至临床治疗。 东北大学硕士学位论丈 第1章绪论 布洛芬是20世纪50年代和60年代，在开发治疗类风湿关节炎的“超级阿司 匹林”过程中长期研究的产物。将布洛芬誉为“超级阿司匹林”，意味着与当时的 其他药物相比，疗效相同，但更具安全性，布洛芬具有比阿司匹林更强的抗炎和 解热镇痛作用，并且相对安全性较高，副作用较d、tg,,ol。1964年，当人们发现几 个有前途的化合物的临床试验结果令人失望后，选择性地开发了布洛芬，布洛芬 的半衰期比较短，并且胃肠道耐受性良好19】。 目前，布洛芬在临床上主要用于缓解类风湿关节炎等各种的急性发作期或持 续性的关节肿痛症状，无病因治疗及控制病程的作用;治疗非关节性的各种软组 织风湿性疼痛，如肩痛、腱鞘炎、滑囊炎、肌痛及运动后损伤性疼痛等;急性的 轻、中度疼痛如:手术后、创伤后、劳损后、原发性痛经、牙痛、头痛等;对成 人,OJL童的发热有解热作用。在用药安全性上，临床研究短期应用布洛芬没有明 显的胃肠道副反应发生，引起严重肾不良反应的发生率很低，由于其良好的 耐受 性和长期服用不良反应少，很多国家将其列为非处方药物[1,ll-14】1。 的差向异构体，默克1889年从麻黄中提取。1968年首次载入英国副药典，1985 年美国药典增载了其复方制剂，目前伪麻黄碱的复方制剂有逾百种，有片剂、胶 囊、水剂、糖浆剂等十几种剂型。伪麻黄碱的作用单纯，复方制剂扩大了其治疗 范围。最常见与抗组胺药、解热镇痛药及镇咳切痰药配伍，这些药物间的作用是 协同还是相加尚无定论，但临床试验结果证实至少是相加【17】。盐酸伪麻黄碱具 有选择性的收缩血管作用，消除鼻咽部黏膜充血，肿胀，减轻鼻塞症状。盐酸伪 麻黄碱拟交感神经药，以间接方式起拟交感神经作用，可选择性收缩上呼吸道血 管，消除鼻咽部粘膜充血和水肿，减轻因感冒引起的鼻塞症状，对全身血管和血 压的影响较弱。临床上用于治疗由感冒和呼吸道感染引起的急慢性、过敏性鼻炎。 PEH对支气管平滑肌的扩张作用肾上腺素弱而持久，单剂量口服时对血糖和胰 岛素水平均无影响。其副作用比麻黄碱和苯丙醇胺小，反复用药易产生耐药性。 几十年的临床实践证明，PEH是一种安全有效的药物，PEH原料药及其制都非 常稳定，国内外目前应用相当广泛。剂型遍及糖浆、胶囊、片剂、溶液和滴剂， 尤以缓释胶囊为多。PEH主要作用就是消除鼻咽部粘膜肿胀，通鼻咽通道。 PEH 的复方制剂扩大了其治疗范围，最常见PEH与抗组胺药、热镇痛药及镇咳祛痰 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 药配伍，这些药物问的作用是协同还是相加尚无定论，临床试验结果证实至少是 相加的，将其制成口腔速崩制剂可以迅速起效，治和预防感冒引起的过敏症状， 具有很大的实用价值和市场前景f18,19】。 HCI，PSE 两 种药物的配伍是国内外较为流行的复方组成，将布洛芬与盐酸伪麻黄碱组成复方 使药物作用时间延长，血药浓度波动小，药物不良反应少，用于治疗由感冒引起 的头痛、发热、咳嗽、鼻塞等【20】。 1(1(2布洛伪麻片的药理与作用机制 但也可以直接抑制白细胞的活化和聚集并减少白三烯B4 白细胞趋化因子和激 活因子 的生成。经水解作用形成羟基和羧基，两个异构体代谢成乙酰葡萄糖醛 酸甙。R ( 异构体的活性形式，布洛芬S + 辅酶A也能够抑制前列腺素的产生， 这种代谢路线可能导致混合甘油三酸酯的形成。除了抑制前列腺素的合成外，布 洛芬的其它作用也可能有助于它的抗炎特性，包括减少炎症前细胞因子的产生， 如白细胞介素1D、肿瘤坏死因子仅、氮氧化物和白细胞来源的白三烯B4，还可 能对氧自由基的产生及通过核因子通道 NF KB的信号转导有抑制作用。文献报 道 利用原代肝细胞培养技术证明了R ( 构型在长链脂肪酸CoA连接酶的催化 下反向转化成药理活性较强的S + 构型。COX―l为结构型，主要存在于血管、 胃、肾等组织中，参与血管舒缩、血小板聚集、胃粘膜血流、胃粘液分泌及’肾功 能等的调节。COX(2为诱导型，多种损伤因子和细胞因子可诱导其表达，参与 发热、疼痛、炎症等病理过程。目前多数学者认为NASIDS对COX(2的抑制作 用为其治疗作用的物质基础，对COX(1的作用则成为其不良反应的原因 【1,21-24】。 总之，布洛芬具有广阔的临床应用前景，通过布洛芬在离体肝细胞中代谢的研究 (-IY习其在人体的药动学研究提供依据[25-28】。 伪麻黄碱口服用药，通过刺激交感神经末梢释放去甲肾上腺素，间接起到拟 交感神经作用，其抗呼吸道与鼻充血的作用与麻黄碱相同，但升压作用仅为麻黄碱 的l,5，增强心率和收缩血管的作用仅为麻黄碱的l,2，在扩张支气管平滑肌方面仅 为其1,2。伪麻黄碱收缩血管具有一定的选择性，主要收缩上呼吸道血管使呼吸通 畅，用于收缩鼻粘膜血管以减轻鼻塞症状，疗效显著且副作用小，该药在使用中通 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 常用其盐酸盐或硫酸盐。与解热镇痛药阿司匹林、对乙酞氨基酚、布洛芬配伍治 Chhildren’S 疗头痛、发热、鼻塞。如美国MeneilProds公司生产的片齐JJCorylenol Chewablecold 苯那敏O(5mg ,片[291。 1(1(3布洛伪麻片的生物利用度 布洛芬口服易吸收，与食物同服吸收减慢，但吸收量不减少。血浆蛋白结合 肾由尿排出。布洛芬是外消旋的混合物，非活性形式是R ( 结构体，大约30,, 60,的非活性形式经生物转化成活性的S + 结构。在健康志愿者中，S + 异构体 洛芬在骨关节炎病人中的半衰期与健康人相似，但在一些类风湿关节炎病人和肾 脏功能不全的病人中可能有轻微增加，在某些老年病人中可能显著延长。在70 岁以上并有肾脏损害的病人或有高血压的病人中，S + 结构体的血浆浓度一时间 曲线下面积 AUC 是升高的。有肝脏疾病的病人，消除半衰期轻微增加，但是代 谢物的血浆浓度仅有轻微降低。尽管在减轻疼痛方面男女之间有显著差异，但在 药代动力学方面男女之间没有区别【30】。 盐酸伪麻黄碱口服后吸收快，一次口服60mg在1小时内达高峰，0(5"-'2 小 身各种体液。约有55,--一75,以原型从尿中排出，其余由肝脏代谢。盐酸伪麻黄 碱口服后在肠内易吸收，皮下注射吸收较口服为快。吸收后在体内仅少量经脱氨 氧化，约60(75,以原形从尿排泄。由于麻黄碱在体内不易被破坏，所以其作用 时间较’肾上腺素为长，一般可维持3-6小时。口服后可进入脑脊澍3l】。 1(2现行布洛伪麻片质量标准情况已报道的检测方法概述 1(2(1布洛伪麻片质量标准情况 年版以前未收载于《中国药典》。根据国家药典委员会国药化发[2008125号文“关 于发送《中国药典》2010年版 二部 化学药品科研项目会议纪要的通知”要求， 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 本研究开始对布洛伪麻片现行质量标准进行复核、修订。通过查阅《美国药典》 【331、《欧洲药典》、《英国药典》、《同本药局方》等国外药典对布洛伪麻片的收载 情况，得知仅《中国药典》2005年版二部及美国药典31版收载了该品种，质量 标准对比见表1(1。 表1(1 《中国药典》2005年版二部与美国药典30版中质量标准对比 TableI(1 The ofChina 10 Part edition， Secondandthe compare Pharmacopoeia，20 UnitedStates edition Pharmacopoeia，30 从标准对比可以看出，中美两国该品种的质量标准在项目设置上基本一致， 美国药典仅比我国多进行了一个含量均匀度检查，鉴于本品含盐酸伪麻黄碱的量 不是很低，该项检查可不列入标准中。其余的项目进行比对，发现在溶出度检查 项及含量测定的方法均比中国药典收载的方法合理。在剩余项目的设置上中国药 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 典的标准较为合理，不需修订。 1(2(2布洛伪麻片已报道的检测方法 用布洛芬和盐酸伪麻黄碱配伍而成的制剂有很多，常见的有片剂、颗粒剂、 胶囊、混悬剂等等，因两个物质的极性相差较大【34,35】，因此很难使两个峰形都令 人满意，所以有许多学者对该药品的检测方法进行了研究。 刘海风，郑一美九使用C18柱，流动相为A液:乙睛:磷酸二氢钾溶液 法类似，配置繁琐，从附图上看，峰形不能令人满意。 张文军，焦建杰等人【371使用C18柱，流动相:甲醇(0(01mol,L磷酸二氢钾 nm，流速:1(0ml,min，测定布 洛伪麻分散 一磷酸 75:25:0(1pH 3(6 、检测波长:210 片，从附图上看，峰形不能令人满意。 min为215 min为260 测波长 0---,6 hi,1，6,10 nm 测定布洛伪麻颗粒剂，从附图 上看，峰形不能令人满意。 李吉龙【39】使用C1 波长:256nln，流速:1(0ml,min，与现行标准类似，操作繁琐，未附图。 8:2 为流动相，流速1(0mL??min-1,检测波长215nm，峰形较理想，但使用氰基柱 很难保证方法的耐用性。同时该文章指出，其查阅的同时测定布洛芬和盐酸伪麻 黄碱的6篇文献【34,36,41-441，均有样品峰拖尾的情况。 王启砚，邓长英[451用二阶导数法测定布洛伪麻片中布洛芬和赫酸伪麻黄碱 的含量。 1(3布洛伪麻片样品收集情况 本次研究共收到哈药集团制药六厂等四个生产厂家的11批样品，并提供了 处方工艺和起草说明，详见表1(2。 东北大学硕士学位论文 第l章绪论 表1(2 收到布洛伪麻片的生产厂家及其生产批号 Table1(2 The andthelot( sample’sproduct company 通过对各生产单位的样品处方工艺的研究，发现山东新华制药股份有限公司 及浙江亚克药业有限公司的处方中使用的辅料较多，所以方法学验证主要以这两 个厂家的产品为主，进行研究工作。 1(4现行布洛伪麻片质量标准的弊端 现行布洛伪麻片质量标准有很多弊端，通过标准的研究和生产单位同常的 质量监控中发现的问题，可以归纳为以下几点: ?原布洛伪麻片质量标准的溶出度检查项的溶出条件较为剧烈，不能如实 地模拟了药品在体内溶出的实际情况，得出的数据也与药品的实际生物利用度相 关性差，应着手修订。 ?哈药集团制药六厂提出的修订意见为流动相系统在进行溶出度检测时，布 洛芬峰形不理想，先后用5种牌号色谱柱测定，峰形均出现前沿、拖尾或肩峰等 (7， 东北大学硕士学位论文 第1章绪论 情况，建议修订流动相。 ?湖北百科亨迪药业有限公司提出的修订意见为溶出度测定项下，样品分离 度达不到要求，建议修订流动相。 ?浙江亚克药业有限公司提出的修订意见为含量测定项下盐酸伪麻黄碱在振 摇条件下很难溶解完全，建议超声溶解。 ?山东新华制药股份有限公司提出的修订意见为布洛芬峰形不理想，建议修 订流动相。 低， 出度 不能 点使 设置 生产 能令 ，研 的可 出条 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片 含量测定方法学研究 第2章 布洛伪麻片含量测定方法学研究 本章针对原色谱条件的峰形不理想等问题通过实验选定色谱条件，并通过准 确度、精密度、耐用性、溶液稳定性、定量限等试验来验证该方法的可行性。 2(1方法原理 Performance 高效液相色谱[46] High Liquid 的一个分支，是一种分离、分析方法。高效液相色谱的分离原理和其他色谱法相 同，混合物中各组分由于它们在固定相和流动相之问的分配系数不同而被分离。 近年来高效液相色谱法在药物分析中己占主要地位。据美国药典22版载【47】， HPLC在含量测定方法中位居第一。其特点是分析速度快、分离效率高、检测灵 敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单。本文按高效 液相色谱在药物分析中的作用从以下几个方面综述了高效液相色谱法在药物分 析中的研究进展。 2(1(1药代动力学方面 高效液相色谱测定药物在肌体内的浓度，并结合一定的统计方法对数据进行 测定了尼素地平人体中的血浆浓度并进行了药代动力学实验。本法灵敏度高，最 星 10mg,kg 后，鲤鱼体内不同时间的血浆药物浓度。结果表明，氧氟沙星在鲤 鱼体内吸收较迅速，出峰时间较短，血药峰浓度高，适用于鱼类细菌性疾病的预 防和治疗。 高效液相色谱在药物代谢动力学上的研究主要是为药物代谢动力学软件提 供数据，并最终通过药代动力学软件处理得到药物动力学结果。其中动力学参数 度 C 等。通过这些动力学参数对药物代谢动力学进行研究，并通过这种方法 对药物对机体的作用情况进行比较，有利的指导药物的开发和研制，在这个方向 的研究可能是高效液相色谱与药代动力学软件联用分析的发展方向。 2(1(2天然药物及中成药方面 Detecor， Light―scattcring 高效液相色谱与蒸发光散射检测器 Eaporative 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 ELSD 联用，能够分离检测没有紫外吸收或为紫外末端弱吸收的样品，天然产物 中的许多成分无疑找到了直接、准确的测定方法。皂昔无紫外吸收或仅为木端吸 收，ELSD能够对其不经衍生进行检测，这方面的报道比较多。主要有一次性分 离分析天然人参、生脉散复方、育精胶囊中的多种人参皂苷【47,50,51】，西洋参中的 人参皂苷和拟人参皂苷定量测定【52(531，三七中的三七皂苷的含量分析 【541等。这些 研究主要采用C18柱、乙腈与水作流动相，不经衍生直接测定多组分含量，结 果显示方法灵敏度高 ,般检测限低于3lag,L 、线性关系良好。 2(1(3抗生素方面 HPLC(ELSD分析抗生素类药物的报道多见于氨基糖苷类抗生素。氨基糖苷 类抗生素是临床上常用的抗生素，可通过微生物发酵或半合成制得，是一类单组 分或多组分糖基取代的氨基环醇类化合物。对这一类抗生素的含量测定多采用微 生物法，但微生物法测定的是各活性组分的总量，无法反映各组分组成。为克服 这个缺点，国内外的药典采用HPLC法进行测定，但这类抗生素无紫外吸收， 只 能采取衍生化法 多为柱前衍生 ，结果易受衍生化反应条件的影响而不够准确， ELSD法很好地解决了这个问题【471。 2(1(4药物残留检测方面 由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量分析，被广泛使用于药物残 留的测定上。周东海等【47,551高效液相色谱法建立了猪、羊肝组织中西维因残留 量的检测方法。采用ODS色谱柱，二极管阵列检测器，甲醇,水 65,35 为流动相， 222nm检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低检测限为O(1m‖L，线性 良好 r:0(9999 。平均回收率均大于80,，日间和日内变异系数均小于 10,。 2(1(5毒物分析方面 食品中，曾发现这种毒素不仅能引起动物患病如马脑白质软化，猪肺水肿及兔肝 癌，而且，FB还可能与南非和中国人群食道癌发病率有关。因此，引起人们的 高度重视。实验采用YMC C18柱，以乙睛(水(三氟醋酸 pH 2(7 为二元系统流动 (12( 东北大学硕士学位论丈 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 LINC离子束接口，对143 罗毅等吲采用SPHPLC(DVD和VGMS及HPLC(MS 个大骨节病区及非病区采集的玉米、小麦样品进行了毒物检测。结果从病区粮食 中分离得到的互隔交链抱霉菌培养物中，不同程度地检出了AOH和AME二个 毒素，并用HPLC(MS进行了鉴定。 2(2实验材料及仪器 2(2(1实验材料 磷酸二氢钟 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 冰醋酸 分析纯囤药集团化学试剂有限公司 CHEMICAL 十二烷基硫酸钠 电子纯 香港迪韵科技有限公司,GFCO SUPPLIES 磷酸 分析纯沈阳经济技术不发区试剂厂 色谱柱: 1 C18kromasil150x4(6mm 5pm 2 C18 inertsil250x4(6mm 59m 布洛芬对照品 中国药品生物制品检定所100179(200303 盐酸伪麻黄碱 中国药品生物制品检定所171237(200505 制剂所需各种原料、辅料均由生产厂家提供 2(2(2实验仪器 岛津LC(20AD高效液相色谱仪 岛津UV-2450紫外分光光度计 奥利龙520A+酸度计 2(3色谱条件的选择 2(3(1流动相的选择 通过对原标准和国外药典中收载的标准的研究，试制定以下三个色谱条件， 分别试验，发现色谱条件B，较为理想，该条件与美国药典中方法类似，只是用 十二烷基硫酸钠代替美国药典方法中的辛丁酯磺酸钠。美国药典方法中使用的辛 丁酯磺酸钠在我国是当做止泻药使用，不作为试药使用，在中国药典的附录中并 未收载该试药，因此在我国该物质作为实验室使用较难获得，考虑到该标准 作为 国家标准，因此将其替换为实验室容易获得的十二烷基硫酸钠，十二烷基硫酸钠 (13( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 与辛丁酯磺酸钠结构类似，均含有十二个碳原子，此流动相系统复核本次研究的 要求。 动相;该条件为原标准方法，色谱图峰形不理想，基线不稳定。见图2(1。 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片含量测定方法学研究 条件C:每1000ml水中加入十二烷基硫酸钠5克使溶解，再加磷酸2ml， 混匀后用氨水调pH值至2(6，等比加入乙腈为流动相。该方法与美圜药典 中方 定时，色谱峰形差异大。见图2(3、2(4。 ^ E V 测 鞋 时闸 min 图2(3条件C的色谱图 1 ofconditionC 1 Fig(2(3Chromatogram inertsil250x4(6mm 注:该条件使用的色谱柱牌号:C18 5岬 ^ 净 占 趔 :蛋 图2(4条件C的色谱图 2 ofconditionC 2 Fig(2(4Chromatogram kromasil150x4(6mm 注:该条件使用的色谱柱牌号:C18 51am 2(3(2检测波长的确定 取布洛芬、盐酸伪麻黄碱的原料药，分别用流动相稀释至每ml含0(25mg 芬与盐酸伪麻黄碱的紫外图谱。见图2(5、2(6。 根据布洛芬、盐酸伪麻黄碱的紫外图谱，盐酸伪麻黄碱的吸光度较低，仅存 在末端吸收，为保证两个物质都能有较好的检出，又不至于有太多的溶剂干扰， (15( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪 麻片含量测定方法学研究 故仍用原标准的检测波长215nm。 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 2(4方法学验证 2(4(1山东新华制药股份有限公司产品批号:0707145 1 处方 布洛芬 2009 盐酸伪麻黄碱 309 淀粉 1209 预胶化淀粉 969( 羟丙甲纤维素 2(8339 滑石粉 7(1679 微粉硅胶 14(1679 硬脂酸镁 3(5839 羧甲淀粉钠 19(1679 按以上比例制成1000片 2 线性关系试验: 精密称取布洛芬对照品10(16mg，置50ml量瓶中，加入流动相使溶解; 另精取盐酸伪麻黄碱15(31 mg，置50ml量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻 度，摇匀，精密量取5ml置布洛芬量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀。 分别 与绝对进样量 X 进行线性回归。盐酸伪麻黄碱的回归方程为 Y 1359549(3X+l 1845;相关系数r 1(000。布洛芬的回归方程为 Y 2407997(7X+l 8866(5;相关系数r 1(000。 2_f白J线性关系良好。 1(016"-'8(12899 (17( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 图2(7线性关系实验色谱图 The oflinearwidth Fig(2(7 chromatogram 表2(3仪器精密度试验结果 resultsofinstrument Table2(3Determination precision 峰面积 mV×s 样品 1 2 3 4 5 RSD , 0-2, 10105722 10062811 1XXXXXXXXXX88941 布洛芬 10058139 848898851XXXXXXXXXX52193 0(2, 盐酸伪麻黄碱849039 4 样品溶液稳定性试验:取供试液，分别于0、1、4、8、10小时进 样， 测定峰面积。结果见表2(4、2(5，表明溶液稳定性良好。 ^ 5 饵 :譬 时向 mia 图2(8溶液稳定性试验色谱图 ofsolution The stability Fig(2(8 chromatogram 表2(4溶液稳定性布洛芬试验结果 2(4Theresultsofsolution of Table stabilityIbuprofen 时间 h 01 4 8 10 RSD , 0(05, 10423297 1XXXXXXXXXX31XXXXXXXXXX4 峰面积 mV×s 10438243 (19( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量 测定方法学研究 表2(5溶液稳定性盐酸伪麻黄碱试验结果 of Table2(57nleresultssolution of stability Pseudoephed^ne 5 方法重复性试验:取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量 约 相当于布洛芬100mg，盐酸伪麻黄碱15mg ，置50ml量瓶中，加流动相适量， 振摇使布洛芬与盐酸伪麻黄碱溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量 取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取209l， 注入液相色谱仪，色谱图;另分别取布洛芬与盐酸伪麻黄碱对照品适量，精 密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含布洛芬0(2mg与盐酸伪麻黄 碱0(03mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。测定同一批号的 实验次数 1 2 3 4 5 6 平均值RSD , 测定结果 , 103(1103(7102(8105(4104(3104(3103(9 O(93 表2(7方法重现性布洛芬试验结果 Table2(6Theresultsofmethod of reproducibilityIbuprofen 实验次数 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD , ( 测定结果 , 100(0 99(8 1 100(698(999(299(5 100(5 0(7 6 辅料干扰试验:按处方比例配制空白辅料溶液，取20I(tl，照上 述色谱 条件注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明辅料对含量测定结果无干扰。 (20― 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片含 量测定方法学研究 ^ :蓍 u 韬 谜 墨 图2(9辅料干扰色谱图 The ofaccessoriesinterference Fig(2(8 chromatogram 7 回收率试验:精密称取布洛芬，盐酸伪麻黄碱对照品按80,、100,、 120,各三份按处方加其余辅料用流动相制成供试品溶液，摇匀，精密量取20lrtl 注入色谱仪，记录色谱图。另精密称取对照品同法制成相同浓度的溶液。计算回 收率，结果见表2(8、2(9。实验结果表明布洛芬的回收率为99(91,-,101(29,， 101(97,，RSD n-9 _0(64,，方法定量限为0(61ng。回收率良好。 表2。8同收率试验布洛芬结果 Table2(8Theresultsof of recoveryIbuprofen (21( 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片含量测定方法学研究 表2(9同收率试验盐酸伪麻黄碱结果 Table2(9Theresultsof of recoveryPseudoephedrine 序号tJnA(量t mg 测得量 mg 同收率 , 平均同收率 , RSD , l 12(54 12(58 100(3 100(5 0(64 2 12(63 12(66 100(2 3 12(37 12(49 101(0 - 4 14(97 14(96 100(O 5 15(25 15(26 100(1 6 15(20 15(50 102(0 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻 片含量测定方法学研究 ^ - 3 翻 递 善 图2(11布洛芬定鼙限试验HPLC图谱 1(The of limitof Fig(2(1 chromatogramquantitateIbuprofen 色谱柱进行含量测定，结果见表2(10。本方法耐用性良好。 表2(10不同牌号色谱杠测定含鼙试验结果 Table2(10Theresultsof betweendifferentcolumn assay 2(4(2浙江亚克药业有限公司产品批号:070508 1 处方 布洛芬 敝眦g 盐酸伪麻黄碱 圪独g 淀粉 列钒g 羧甲淀粉 钠 :黜 g 羟丙纤维素 互名 《 药用滑石粉 2强键 微晶纤维素 ?， 您蛇膳路昭蝣潞鹏鹏键 (23( 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片 含量测定方法学研究 10,--20,淀粉浆与5,6,羟丙甲纤维素浆 I:1 的混合浆 30kg 按以上比例制成40力(片 2 样品溶液稳定性试验:取供试液，分别于0、l、4、8、10小时进 样， 测定峰面积。结果见表2(11、2(12，表明溶液稳定性良好。 时闸 rain 图2(12溶液稳定性色谱图 2(The ofsolution Fig(2(1 chromatogramstability 表2(1l溶液稳定性布洛芬试验结果 ofsolution of Table2(11Theresults stability Ibuprofen 表2(12溶液稳定性盐酸伪麻黄碱试验结果 Table2(12Theresultsofsolution of stabilityPseudoephedrine ((24(( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含 量测定方法学研究 3 方法重复性试验:按含量测定项下的方法，测定同,批号的样品6 份， 结果见表2(13，表明方法重现性良好。 表2(13方法重现性试验结果 Table2(13Theresultsofmethod reproducibility 4 辅料干扰试验:按处方比例配制空白辅料溶液，取20pl，照上述 色谱 条件注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明辅料对含量测定结果无干扰。 罨 i 善 图2(13辅料干扰色西图 3The ofaccessoriesinterference Fig(2(1 cllromato訇_aTn 5 回收率试验:精密称取布洛芬，盐酸伪麻黄碱对照品按80,、100,、 120,各三份按处方加其余辅料用流动相制成供试品溶液，摇匀，精密量取201(tl 注入色谱仪，记录色谱图。另精密称取对照品同法制成相同浓度的溶液。计算回 收率，结果见表2(14、2(15。表明回收率良好。 (25( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻 片含量测定方法学研究 表2(14网收率试验布洛芬结果 Table2(14Theresultsof of recoverylbuprofen 表2(15同收率试验盐酸伪麻黄碱结果 Table2(15Theresultsof of recoveryPseudoephedrine ((26(( 东北大学硕士学位论文 第2章 布洛伪麻片含量测定方法学研究 色谱柱进行含量测定，结果见表2(16。本方法耐用性良好。 表2(16不同牌号色谱柱测定含毓试验结果 Table2(16Theresultsof betweendifferentcolumn assay 2(4各个生产单位的各批次样品的检测结果 按照新检测方法，各批样品的含量测定结果如下，深圳市药品检验所对这些 样品使用该方法进行了复核，两结果基本一致。 表2(17各批样品的含量测定结果及比对 Table2(17The of betweendifferentinstitute compareassay 2(5实验结论 本次研究的布洛伪麻片含量测定的新检测条件，通过进样后的色谱图可知， 峰形得到了很大改善，实验操作也简便了许多;经过两个厂家样品的方法学 (27( 东北大学硕士学位论文 第2章布洛伪麻片含量测定方法学研究 证明此方法定量准确、精密度良好、溶液稳定性良好、方法的耐用性良好、辅料 不干扰测定，该方法能保证布洛伪麻片中两个主药成分的准确检出，方法切实可 行。根据国家药典委员会国药化发[2008125号文“关于发送《中国药典》 2010年 版 二部 化学药品科研项目会议纪要的通知”要求，深圳市药品检验所复核了 该方法，给出的复核意见为方法可行含量测定结果与我所基本一致。经对两组数 据做统计处理，两组数据无显著性差异 T O(05 ( ((28(( 东北大学硕士学位论文 第3章布洛伪麻片溶出度方法学研究 第3章 布洛伪麻片溶出度方法学研究 本章针对原色谱条件的峰形不理想等问题通过实验选定色谱条件，并通过准 确度、精密度、耐用性、溶液稳定性、定量限、溶出曲线等试验来验证该方法的 可行性。 3(1方法原理 溶出度是指在一定条件下，在规定介质中，药物从片剂或胶囊剂等固体剂型 溶出的速度和程度‘581溶出度试验现己成为药品质量的重要控制项目之一，成为评 价制剂处方和生产工艺的一种有效手段，以及评定固体制剂生物利用度和制剂均 匀度的一种方法。近年固体制剂的溶出度检测方法和品种逐年增加，方法也不断 改进。笔者在此综述如 下。 、， ; 3(1(1溶出度测定的基本方法 根据药物与介质混合的类型，溶出度测定方法主要分为两类，一类是由于搅 拌或旋转而在介质中产生的强制对流导致混合，如转篮法、桨法等;另一类是由 于介质的自然对流导致混合，使样品一直暴露于均匀的无涡流新鲜介质中，以保 持漏槽条件，如循环法、流通池法，《中国药典》2005年版二部主要收载有转篮 法、桨法及小杯法3种方法【58】，流通池法则用于药物释放度的测定。各种测定方 法均有其优缺点。转篮法的主要缺点是篮网易堵塞，篮网上易