盐酸帕罗西汀缓释胶囊临床前研究（可编辑）

盐酸帕罗西汀缓释胶囊临床前研究（可编辑） 盐酸帕罗西汀缓释胶囊临床前研究 广东药学院 硕士学位 盐酸帕罗西汀缓释胶囊的临床前研究 姓名:白才堂 申请学位级别:硕士 专业:药剂学 指导教师:吕竹芬 2011-05广东药学院硕士研究生学位论文 中 文 摘 要 选择性 5-羟色胺再摄取抑制剂 SSRIs为目前治疗抑郁症药物中较安全有效的 一类。盐酸帕罗西汀作为 SSRIs的代表药物之一,因其起效快、疗效确切,已成为当 前畅销的抗抑郁药之一。恶心是目前市售盐酸帕罗西汀普通片最常见的不良反应。有 研究报道称盐酸帕罗西汀普通制剂的胃肠道副反应发生率高达 25%,其原因与普通制 [1,2] 剂在胃部和小肠上段局部浓度较高有关 。为了进一步降低盐酸帕罗西汀不 良反应发 生率,提高患者顺应性,葛兰素史克GlaxoSmithKline公司研制的帕罗西汀控释片 Paxil CR已通过美国 FDA批准上市。帕罗西汀肠溶缓释片、速释片和安慰剂的随机 对照研究结果显示,帕罗西汀肠溶缓释片较速释片有更好的耐受性,且胃肠道不良反 [3,4] 应发生率较低,更适于临床治疗抑郁症患者 。 本研究采用挤出滚圆法制备了具有骨架结构的盐酸帕罗西汀微丸,再通过流化床 包衣法在微丸表面包以缓释层和肠溶层,得到具有 12小时肠溶缓释效果的微丸。 本研究建立了高效液相法用于肠溶缓释微丸的体外释放度考察及含量测定,并用 高效液相色谱法研究了盐酸帕罗西汀半水合物的理化性质。溶解度实验显示:盐酸帕 罗西汀半水合物在水,0.l mol/L HCl和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液中的溶解度均大于 1mg/ml;表观油水分配系数随 pH的增大而增大。 考察了多种缓释材料对微丸成型的影响,最终选取微晶纤维素为骨架材料,乳糖作为 释放速率调节剂,羟丙甲纤维素 E5为粘合剂,以水为润湿剂,制备了盐酸帕罗西汀 微丸,并对影响微丸粉体学性质和释放速率影响因素进行了考察,通过正交试验优化 了工艺参数。以优化工艺制得的微丸具有一定的缓释效果,但前期释放较快。通过流 化床包衣法对骨架微丸进行缓释包衣,采用 Eudragit RS、Eudragit RL为缓释包衣材 料,Eudragit L100为肠溶材料,并对微丸释放度的影响因素进行了考察,确定了最佳 包衣工艺和包衣液处方。制备的微丸具有 12小时肠溶缓释效果。释药机理研究结果 显示,微丸符合一级释药模型。 PAX肠溶缓释胶囊的质量研究结果显示,胶囊含量未超过含量限度,释放均匀性 良好,且 12h累积释放量超过 80%。肠溶缓释胶囊的影响因素试验结果表明,该制剂 在光照、高温、高湿和加速条件下微丸的体外释放行为不变,高湿和加速条件下微丸 I 广东药学院硕士研究生学位论文 外观变黄,加速条件下三个月开始药物含量有所下降关键词:盐酸帕罗西汀;抗抑郁症;挤出滚圆法;缓释 II 广东药学院硕士研究生学位论文 Preclinical studies on sustained release capsule of Paroxetine Hydrochloride Supervisor: Lu zhufenprofessor Chen yanzhong professor Abstract Selective serotonin reuptake inhibitors SSRIs are a kind of the safe and effective medicine for depression treatment at present. paroxetine hydrochloride as the representative medicine of SSRIs , which is the best-selling antidepressants for its fast and clear effect at presentThe most common adverse reaction of the immediate release preparations of paroxetine hydrochloride is nausea. Researches were reported that higher concentration of paroxetine hydrochloride in the stomach and the upper small intestine was the reason of gastrointestinal side effects , and the incidence of [1,2] adverse effects could up to 25 percentTo further reduce the incidence of side effects of paroxetine hydrochloride and improve patient compliance, the paroxetine controlled release tablets that developed by GlaxoSmithKline was approved and listed by U.S. FDA. The randomized comparative study of paroxetine enteric-coated sustained-release tablets, rapid release tablets and placebo showed that paroxetine enteric-coated sustained-release tablets had improved tolerance and lower incidence 、 [3 4] of side effects , which was more suitable for clinical treatment of depression In This study paroxetine hydrochloride pellets with skeleton structure were prepared by extrusion-spheronization, and the pellets were coated with sustained-release layer and the enteric layer by the fluidized bed coating technology to obtain a 12-hour intestinal dissolving sustained-release effectThe high performance liquid chromatographyHPLC method was established for enteric release pellets vitro release and determination, and the physical and chemical properties of Paroxetine Hemihydrochloride was studied with HPLCSolubility experiments showed that the solubility of Paroxetine Hemihydrochloridei 广东药学院硕士研究生学位论文 was more than 1mg/ml in water, 0.l mol/L HCl and pH7.5 TRIS-NaCl buffer; apparent partition coefficients with the increase of pHThe effects of forming pellets of sustained-release materials were investigated, and microcrystalline cellulose was chosen for skeleton material ultimately, lactose as a release rate regulator, HPMC E5 as the binder, water as wetting agent, and Paroxetine hydrochloride pellets was prepared with these materials, and the factors of properties of powders and pellets release rate were investigated. The process parameters were optimized by orthogonal test, Pellets prepared with optimized parameters showed an effect of sustained-release, but pre-release was over limitationPellets having a 12-hour effect of intestinal dissolving sustained-release were prepared using Eudragit RS, Eudragit RL as a sustained-release coating material, Eudragit L100 for the enteric material, by fluidized bed coating method. The influence factors of release were investigated to determine the best solution coating process and coating formulation.Mechanism study of drug release showed that the drug release behavior fitted the first order release model betterThe quality of enteric-coated sustained-release capsules of PAX showed that content does not exceed the limits of capsules, the release uniformity was well, and the cumulative release at 12h was over 80%.Influence factors test of enteric-coated sustained-release capsule showed that the in vitro release behavior of pellets did not changed in the light, high temperature, high humidity and accelerated conditions ,but the appearance of pellets changed from white to yellow under conditions of high humidity and accelerated , and after three Months under accelerated conditions the drug content decreased Keywords: paroxetine hydrochloride ; anti-depressant ; extrusion-spheronization method ; sustained release ii 广东药学院硕士研究生学位论文 缩略语 PAXParoxetine 帕罗西汀 PAXHH Paroxetine Hemihydrochloride 盐酸帕罗西汀半水合物 CR controlled-release 控释 SSRIs Selective serotonin reuptake inhibitor 选择性 5-羟色胺再摄取 抑制 剂 TRIS Trishydroxymethylaminomethane 三羟甲氨基甲烷 Papp 表观油水分配系数 RSD Relative standard deviation 相对标准偏差 r Correlation coefficient 相关系数 HPLC High performance liquid 高效液相色谱 chromatography UV Ultraviolet spectrophotometry 紫外分光光度法 HPMC Hydroxypropyl methylcellose 羟丙基甲基纤维素 MCC Microcrystalline cellulose 微晶纤维素 TEC Triethyl citrate 柠檬酸三乙酯 Eudragit 罗姆公司聚丙烯酸树脂商品 名 -1 r?min Revolutions per minute 转/分 -1 ml?min Milliliter per minute 毫升/分 Lx lux 勒克斯 光照度单位 cp 厘泊(粘度单位) 79 广东药学院学位论文原创性声明 本人郑重声明: 本人所呈交的学位论文,系我个人在导师的指导下 进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外,不 包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的 其它个人和集体,均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的 法律结果完全由本人承担。 学位论文作者签名:_____日 期: 年月日 学位论文使用授权的声明 本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定,学校有权 保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版,允许论文被查阅 和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库,可以 采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名:_____论文导师签名:_____ 日 期: 年月 广东药学院硕士研究生学位论文 前 言 抑郁症是由各种原因引起的以抑郁为主要临床表现的心境障碍或情感障碍, 抑郁症患者的主要特征归纳起来有:漠不关心、索然无味、容易疲劳、睡眠紊乱、 食欲改变、情绪低沉、焦虑不安、自杀倾向、小病不断等。据统计,目前全球有 近两亿人罹患不同程度的忧郁症,世界卫生组织于2005年10月将抑郁症、癌症和 AIDS并列为二十一世纪威胁人类生命的三大疾病。到2020年,就疾病负担而言, [5,6] 抑郁症将成为中国继心脏血管病后的第二大疾病 。 抑郁症的病理改变主要涉及中枢神经系统功能、免疫功能和神经内分泌功 能。其确切发病机制尚不清楚,目前,主要有单胺假说、神经递质受体假说、受 体后假说、情感性精神障碍的神经激肽假说、神经内分泌功能改变假说、免疫系 统异常假说等神经生物学争论。但较多研究提示,中枢神经系统单胺类神经递质 传递功能下降为其主要病理改变,各种抗抑郁药的作用机制均通过不同途径提高 [7,8] 神经元突触间隙单胺类神经递质浓度,以期达到治疗目的 。 单胺氧化酶抑制剂(MAOI)是上世纪五十年代初期诞生的第一代抗抑郁药, 第二代抗抑郁药为三环类抗抑郁药TCA,如丙咪嗪、阿密替林、多虑平等,但 是由于这些药物有明显的副作用如:增重、性功能障碍、心血管疾病等,临床上 已逐步减少使用。现常用的抗抑郁药有 5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂 SNRIs 及选择性 5-羟色胺再摄取抑制剂selective serotonin receptor inhibitors, SSRI,如氟西汀、帕罗西汀、舍曲林等,以其安全、有效、副作用轻受到医生 [9] 和病人的青睐 。 选择性5-羟色胺再摄取抑制剂 SSRIs为目前治疗抑郁症药物中较安全有 效的一类。礼来公司的氟西汀(Fluoxetine,商品名为:百忧解,Prozac)及葛兰 素史克的帕罗西汀(Paroxetine,商品名为:赛乐特,Seroxat)为SSRIs类药物的 代表药物。 盐酸帕罗西汀的结构式为: 1 广东药学院硕士研究生学位论文 其半水合物分子式为 C H FNO ?HCL ?1/2H O 分子量:374.84(自由基形 19 20 3 2 式分子量为 329.4)。它是一种白色或类白色结晶性粉末,无臭、味微苦。易溶于 甲醇,在乙醇中溶解,在水中溶解度为 5.4mg/ml。熔点为 120?~138?。该药物 专利于 2005年到期,故帕罗西汀成为近几年研究的热点。 盐酸帕罗西汀是美国 Smith-Kline Beecham 公司开发的产品, 1991年在英国 首次上市,1992年 FDA批准在美国上市。1995年我国卫生部批准中美史克制药 有限公司生产的盐酸帕罗西汀片(赛乐特)在我国上市。现在,盐酸帕罗西汀已 在加拿大、澳大利亚、纽西兰、巴西、瑞士、法国、拉丁美洲等多个国家和地区 上市。盐酸帕罗西汀因起效快、疗效确切,已成为当前畅销抗抑郁药之一。 盐酸帕罗西汀口服可在胃肠道完全吸收,不受食物或合并使用抗酸药物的影 响。因为帕罗西汀为苯基呱啶类化合物,具有亲脂肪特性可迅速广泛分布于机体 各组织中,包括中枢神经系统,仅 1 %存在于体循环。口服后 2-10 h内可达到血 浆峰值浓度,T 为 20 h,每日口服 20 mg,在 7-14 d内可达到稳态血浆浓度, 1/2 治疗浓度的帕罗西汀血浆蛋白结合率约 95 %,固定剂量的帕罗西汀在老年人中 [10] 血浆浓度比在年轻人高 78 % 。 盐酸帕罗西汀的不良反应少而轻微,可有轻微口干、厌食、恶心、便秘、头 晕、震颤、乏力、性功能障碍等,恶心是最常见的不良反应。市售盐酸帕罗西汀 普通片的胃肠道副反应发生率较高25%,其原因与普通片剂在胃部和小肠上段 [1,2] 局部浓度较高有关 。有研究认为,服用帕罗西汀产生的恶心和呕吐是导致抑 [11] 郁症患者治疗过程中中止用药的主要原因之一 。 由于抑郁症、强迫症等精神疾病类患者需要长时间反复服用帕罗西汀,因此 研制其肠溶缓控释制剂,减少药物在胃部释放,可减轻胃肠道不适,并有效地延 缓药物在体内的吸收,从而使血药浓度平稳、降低副作用,提高患者顺应性。2 广东药学院硕士研究生学位论文 目前盐酸帕罗西汀的国外的专利剂型有口服混悬液、制颗粒后压成片、滴丸、 胶囊、缓释片、控释片等;而国内专利则有滴丸、微丸和胶囊剂。目前国内上市 的产品为片剂,国外有普通片、控释片及混悬液。 口服缓释控释制剂是近年来药物制剂研究的热点之一,其注册申报量也逐年 递增,目前已有多种药物的口服缓控释制剂获准上市。口服缓释制剂通常采用的 剂型为片剂和胶囊(内含缓释小丸或缓释颗粒),其他有缓释颗粒、缓释混悬剂 [12] 等 。 近年来,以微丸制剂为代表的多单元型给药系统multiple-unit drug delivery system以其特有的优越性,逐渐成为目前缓控释制剂的研究热点之一。与缓释 片剂相比,缓释微丸其优越性如下:(1)微丸很少受消化道输送食物节律(尤其 是幽门启闭)的影响;(2)微丸在胃肠道表面分布的面积增大,使生物利用度提 高而局部刺激减少或消除;(3)缓释微丸使药物在体内滞留时间延长,血药浓度 波动减小;(4)由不同释药速率的微丸组成的多单元系统,可获得理想的释药效 果,提高疗效,减少不良反应。(5)其释药行为是组成一个剂量的多个小单元释 药行为的总和,个别小单元制备工艺上的缺陷不会对整个制剂的释药行为产生严 [13] 重的影响,因此药物释放动力学可以得到较准确的预测而且重现性好。 缓控释微丸的释药机制与其组成结构相关,目前缓控释微丸制剂多数以含药 丸芯作为包衣底物,选用在消化道前段或全段不溶的聚合物作为衣膜材料包衣制 备成膜控型微丸,或将药物与合适的骨架材料混合后通过挤出-滚圆等工艺制备 成骨架型微丸,或将上述两种工艺结合起来制备成骨架与膜控结合型微丸,主要 通过控制衣膜材料或骨架材料的种类及用量,或者调整微丸的结构层次,使其定 位释药或缓慢近恒速释药。目前,缓控释微丸的制备技术有挤出滚圆技术、流化 [14] 床技术喷雾干燥技术以及层积技术。 挤出滚圆技术于1970年首次被应用于药剂学领域,因其具备生产能力大,设 备费用较低;造粒范围广,可以制造0.3-30mm的球粒,且粒径分布窄;造粒后 球粒内的含量均匀等优点,已发展成为目前制备球形颗粒中应用最广泛的之 [15] 一。 本文对盐酸帕罗西汀肠溶缓释微丸胶囊进行研究。首先采用挤出滚圆技术制 备一具有缓释特性的骨架型缓释微丸,并对制备工艺和处方进行优化,再利用流 3 广东药学院硕士研究生学位论文 化床包衣技术,采用低喷式流化床在缓释微丸外包一层肠溶衣,再装胶囊,使药 物能够减少在胃的释放,降低药物对胃的刺激作用,当药物进入肠道后开始缓慢 释放,得到具有理想释药效果的肠溶缓释微丸,以提高药物的生物利用度、降低 副作用,提高患者顺应性。 4 广东药学院硕士研究生学位论文 第一部分 盐酸帕罗西汀体外分析方法的建立 及理化性质的研究 建立准确、可靠的体外分析方法是药物制剂研究工作的首要前提。本章建 立了盐酸帕罗西汀的体外含量测定和释放度测定分析方法,通过高效液相色 谱法 进行制剂的体外研究。并对影响药物生物活性的理化性质(溶解度、油水分 配系 数)进行了系统的研究,以便为制剂工艺的提供依据。 1.仪器与材料 1.1 仪器 UV1101型紫外-可见分光光度计 (上海天美科学仪器有限公司) 电子天平 (BA110S,Sartorius) 高效液相色谱仪 (Dionex Ultimate 3000 Pump Dionex Ultimate 3000PAD) PHS-25型 pH计 (上海精密科学仪器有限公司雷 磁仪器厂) 电热恒温水浴锅 上海医疗器械五厂 KQ-400型超声波清洗器(功率 300w,频率 45Hz,昆山市 超声仪器有限公司) THZ-82 水浴恒温振荡器 (江苏省金坛市宏华仪器厂) GZX-9246MBE鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设 备厂) SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)1.2 材料 盐酸帕罗西汀半水合物 (PAXHH) (99.78%,浙江临海金桥化学有限 公司) 磷酸二氢钾 (AR,广州化学试剂厂)5 广东药学院硕士研究生学位论文 氢氧化钠(AR,广州化学试剂厂) 氯化钠 (AR,广州化学试剂厂) 三羟甲基氨基甲烷TRIS (AR,上海生工生物工程有限公 司) 盐酸 (AR,广州化学试剂厂) 正辛醇 (AR,广州化学试剂厂) 三乙胺 (AR,广州化学试剂厂) 磷酸 (AR,广州化学试剂厂) 乙醇 (AR,广州化学试剂厂) 甲醇 (HPLC,依能色谱有限公司) 乙腈 (HPLC,依能色谱有限公司) 2.实验方法 2.1 含量测定方法的确定 2.1.1检测波长的选择及专属性 2.1.1.1检测波长的选择 称取一定量的不同释放介质中 PAXHH对照品及辅料在 200~800nm波长范 围内进行扫描,结果见图 1-1,1-2,1-3。 Fig.l-1 UV-scanning of paroxetine and excipients in methanol solution6 广东药学院硕士研究生学位论文 Fig.l-2 UV-scanning of paroxetine and excipients in 0.1mol/LHCl solution Fig.l-3 UV-scanning of paroxetine and excipients in pH7.5 TRIS-NaCl solution 由上图可知:盐酸帕罗西汀半水合物在甲醇,0.1mol/L HCl 和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液中最大吸收波长为 293nm,拟选择 293nm作为检测波长。但 所用辅料在 0.1mol/L HCL 和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液中,波长 293nm处有较低 吸收,将影响测定结果的准确性,所以采用高效液相色谱法测定帕罗西汀的含量。 2.1.1.2专属性 色谱条件: 缓冲液:水:磷酸: 三乙胺 100:0.6:0.3 流动相:缓冲液:乙腈 7:3 色谱柱:Kromasil C 5?m 250mm×4.6mm 18流 速:1ml/min 7 广东药学院硕士研究生学位论文 检测波长:293nm 进样量:20?l对照品溶液制备:精密称取 PAXHH对照品 11.45mg(含 PAX 10mg),置于 100ml量瓶中,加适量甲醇,超声 10min使其溶解。超声后放冷,用甲醇稀释 至 刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液备用(含 PAX 0.1 mg/mL)。 供试品溶液制备:取样品(相当于含 PAX 100 mg),研细,精密称取适量(含 PAX10mg)各 3份, 按上述方法制备供试品溶液。 空白溶液制备:按处方取辅料,按上述方法制备空白辅料溶液。 将上述样品分别进样,结果见图 l-4、l-5、l-6。 Fig.l-4 HPLC of paroxetine in methanol solution Fig.l-5 HPLC of excipients in methanol solution8 广东药学院硕士研究生学位论文 Fig.l-6 HPLC of paroxetine and excipients in methanol solution 结果表明 PAX出峰时间为 19min左右,且所用辅料在保留时间处无干扰。 2.1.2标准曲线的制备 标准储备液配置:精密称取 PAXHH对照品 11.44mg(含 PAX 10mg),置于 50ml量瓶中,加适量甲醇,超声 10min使其溶解。放冷至室温,用甲醇稀释至 刻度,摇匀,即得浓度为含 PAX 200?g/ml的储备液,备用。 标准曲线的建立:精密量取储备液 2.0,4.5,5.0,6.5,8.0,9.5ml分别置于 10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制备成浓度为 40,70,100,130, 160,190?g/ml的系列溶液。在 293nm波长处测定上述溶液峰面积 A,以峰面 积 A为纵坐标,浓度 C为横坐标,绘制标准曲线。 以峰面积(A)对浓度(C,?g/mL)进行线性回归分析,得标准曲线方程分 别为: 2 A 4.1871 C + 0.5099 R 0.9999 结果表明 PAX浓度在 40~190?g/ml范围内线性关系良好。 2.1.3含量测定方法 取肠溶缓释微丸(约含 PAX 100 mg)研细。精密称取细粉适量(约含 PAX 10 mg),置 50ml量瓶中,加适量甲醇,超声 10min,放冷后加甲醇稀释至刻 度。 摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液 5ml至 10 ml容量瓶中,加甲醇稀 释 至刻度,作为供试品溶液。 用上述的高效液相方法测定溶液在 293nm波长的峰面积,与对照品的峰面 积对照,按外标一点法计算样品含量。9 广东药学院硕士研究生学位论文 2.1.4重复性试验 按照含量测定的方法分别配制微丸供试液 6份(约含 PAX 100?g/mL),依法 测定,计算供试液浓度的 RSD值,结果见表 1-1。 Tab.1-1 Results of repeatability in methanol(n6) C?g/mL C ?SD RSD(%) 100.7 100.6?0.53 0.43重复性实验结果显示 RSD值为 0.43%。 2.1.5回收率试验 精密称取 PAXHH及模拟肠溶缓释微丸处方比例的适量辅料,加甲醇配制成 含 PAX 80,100,120?g/ml三个浓度的溶液。用高效液相法测定其峰面积,根 据 标准曲线计算含量,以测得量与加入量比较,计算回收率,结果见表 1-2。 Tab.1-2 Results of recovery experiments in methanol Amount Average Average Amount easured Recovery RSD(%) added recovery recovery ?g/mL (%) (%) (%) ?g/mL 80.5 80.4099.88 80.3 80.1199.7699.98 0.2879.8 80.05100.3 100.1 100.2100.1 99.90 100.3 99.7299.4099.80 0.3699.9 99.8199.90 120.2 120.199.92 120.1 119.899.7599.92 0.18 119.6 119.7100.1 试验测定结果见表 1-2,由表中数据可以看出,高中低三个浓度的平均回收 率为 99.90%,平均 RSD均小于 2%,说明该方法准确度良好。 2.1.6 溶液稳定性 取 PAXHH及模拟肠溶缓释微丸处方比例适量辅料,用甲醇配成适宜浓度的 溶液,37?放置,定时测定溶液的峰面积,考察 PAXHH的稳定性,试验测定结 果见表 1-3。 10 广东药学院硕士研究生学位论文 Tab.1-3 Stability of the paroxetine solution(含 PAX 100?g/mL) Time(h) C?g/mL RSD(%) 2 100.16 100.212 100.0 0.3218 100.824 100.1 结果表明,盐酸帕罗西汀在甲醇中的峰面积 24小时内几乎不变,即本品溶 液稳定,可用于盐酸帕罗西汀肠溶缓释微丸的含量测定。2.2 体外释放测定方法的确定 2.2.1 测定方法人体正常的生理条件,胃液的 pH为 1~1.5,小肠的 pH为 5 ~7;同时胃排空 的时间一般为 1~3小时,制剂在小肠转运时间为 3?1小时。采用中国药典 2010 年版二部附录 X D释放度测定法第二法(用于肠溶制剂)中的方法 2的仪器测 定释放度,根据中国药典对肠溶型制剂释放度测定的指导原则,拟定溶出介质为 前两小时为酸性介质,两小时后为碱性介质,水浴温度为(37?0.5)?,转速为 每分钟 100转。在预定时间分别取样 5ml,经 0.45?m的微孔滤膜过滤(及时 补 加同温新鲜介质 5ml),弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液,计算药物累计 释放百分率。 2.2.2 释放介质的选择 按照 2010版《中国药典》关于肠溶型药物制剂的释放度要求,肠溶制剂的 释放介质应为:前两小时为 0.1mol/L的盐酸溶液,两小时后为 pH6.8或 pH7.4 的磷酸盐溶液。 预实验发现:取处方量的 PAXHH置于 pH6.8的磷酸盐缓冲液中,PAXHH 不能完全溶解,且不溶的药物聚集成团,外层成胶状,数小时后,变为橙色的透 明的胶团黏附在瓶壁上。 为选择一适合的释放介质,需考察药物在不同 pH值及离子溶液的颜色及性 状变化。11 广东药学院硕士研究生学位论文 2.2.2.1不同 pH值溶液 称取约 60mg的 PAXHH分别置于具塞锥形瓶中,加入 25ml 0.1mol/L的盐 酸溶液、 pH5.0、 pH6.8磷酸盐缓冲液及美国 FDA建议该肠溶片使用的 pH7.5Tris- NaCl溶液中,观察其颜色及性状变化。结果见图 1-7及图 1-8。 Fig.1-7 Paroxetine Hydrochloride in different pH mediums将盐酸帕 罗西汀加入上述四种不同 pH值的溶液后,0.1mol/L的盐酸溶液及 pH7.5Tris- NaCl溶液中未溶的药物呈粉末状或絮状分布,pH5.0、pH6.8磷酸盐 缓冲液中未溶的药物呈颗粒状分布。四者上清液皆澄清。 Fig.1-8 Paroxetine Hydrochloride in different pH mediums after 2 hours室温放置两小时后,pH6.8磷酸盐缓冲液中未溶的药物开始变成粉红色胶状 物,其它的溶液皆无变化。24 h后,pH5.0、pH6.8磷酸盐缓冲液中未溶的药物 都成橙红色胶状物,而 0.1mol/L的盐酸溶液及 pH7.5Tris- NaCl溶液中未溶的药 物皆无变化,说明药物在这两种溶液中稳定。12 广东药学院硕士研究生学位论文 2.2.2.2不同离子对药物的影响 称取约 60mg的 PAXHH分别置于具塞锥形瓶中,加入 25ml 0.1mol/L NaOH, KOH,NaCl及 KCl溶液中,观察其颜色及性状变化。 结果,PAXHH的 NaOH溶液变浑浊,黏附在壁上的药物颗粒成胶状,未溶 药物呈橙红色;KOH虽然澄清,但未溶药物也呈橙红色;NaCl、KCl溶液则澄 清。2 h后变化不明显,24 h后 KCl溶液开始变粉红色。 + + - 说明 PAXHH在强碱溶液和含有 K的溶液中不稳定,在含 Na、Cl的溶液 中稳定。 2.2.2.3 释放介质的确定 - + 由以上结果可知,药物在酸性环境下稳定,在含有 OH、K的溶液中会变成 粉红色至橙红色的胶状物。参考美国 FDA的建议采用以下溶液作为释放介质: 0~2小时:酸性释放介质 以 0.1 mol/L HCl溶液 900ml为溶出介质,在 2小时时取样,滤过,取续滤 液进高效液相测定在 293nm波长处的峰面积,按标准曲线计算药物释放百分率。 2小时后:碱性释放介质 弃去 0.1 mol/L HCl溶液,立即加入温度为 37??0.5?的 pH7.5Tris-NaCl(含 60 mmol/L Tris及 90 mmol/L NaCl,加盐酸调 pH至 7.5)缓冲液 900ml,分别在 1,2,4,6,8,10小时取样,高效液相测定在 293nm波长处的峰面积,按标准 曲线计算药物释放百分率。 2.2.3 释放曲线体外溶出参数(参照肠溶缓释片指标) 肠溶缓释片评价指标是前两小时在酸中累积释放度必须小于 10%;第 6小时 累积释放度为 50%;第 12小时累积释放度大于 75%。 2.2.4 相似因子法固体制剂的体外释放度数据是评价一种药物制剂不同品种、不同厂 家产品、不同批次间质量的重要数据。美国推荐使用相似因子法评价试 验药品与对照药品的体外溶出度差异。相似因子法被广泛应用于比较溶出曲 线、 筛选处方、评价药物稳定性、优化剂型等。 本文采用相似因子f 法对制剂的处方优化、药物稳定性以及批间重现性等 2 进行评价。 13 广东药学院硕士研究生学位论文 基本如下: 2 1 n -0.5f 50×log{[1+ R ?T ] ×100} 2 ? t t t 1 n R为参比样品 t时的释放度;T为试验样品 t时的释放度。完全相同的两条 t t 释放曲线,其 f 100;释放差异增大,f值减小;f ?50,均认为有相同的释放 行 2 2 2 为。 2.2.5 释放度测定方法的确定 2.2.5.1专属性试验 色谱条件: 流动相: 缓冲液(水:磷酸: 三乙胺 100:0.6:0.3):乙腈70:30 色谱 柱:Kromasil C 5?m 250mm×4.6mm18流速:1ml/min进样量:20?l对照品溶液 制备:精密称取 PAXHH对照品 22.89mg(含 PAX 20mg),置于 100ml容量瓶中,加 1ml甲醇稍稍振摇,加入适量释放介质,超声 10min,溶 解; 冷却后稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液 5ml至 10 ml 容 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,备用。 供试品溶液制备:取样品(相当于含 PAX 100 mg),研细,精密称取适量(含 PAX10mg)各 3份, 按上述方法制备供试品溶液。 空白溶液制备:取适量辅料,按上述方法制备空白辅料溶液。将上述样品分 别进样,结果见图 l-9至图 l-14。 Fig.l-9 HPLC of paroxetine in 0.1mol/L HCl solution14 广东药学院硕士研究生学位论文 Fig.l-10 HPLC of excipients in 0.1mol/L HCl solution Fig.l-11 HPLC of paroxetine and excipients 0.1mol/L HCl solutionFig.l-12 HPLC of paroxetine in pH7.5Tris- NaCl solutionFig.l-13 HPLC of excipients in pH7.5Tris- NaCl solution 15 广东药学院硕士研究生学位论文 Fig.l-14 HPLC of paroxetine and excipients in pH7.5Tris- NaCl solution 结果可知,在此色谱条件下,辅料对释放度测定无干扰。 2.2.5.2 标准曲线的制备 标准储备液配置:精密称取 PAXHH对照品 11.45mg(含 PAX 10mg),置于 50ml容量瓶中,加 1ml甲醇,振摇,加入适量释放介质,超声 10min,溶解; 冷却后稀释至刻度,摇匀,即得浓度为 200?g/ml的储备液,备用。 标准曲线的建立:精密量取储备液 0.25,1.0, 2.0,4.0,6.0,8.0ml分别置 于 50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配置成浓度为:1,4,8,16,24, 32?g/ml系列溶液。在 293nm波长处测定上述溶液峰面积 A,以峰面积 A为 纵坐 标,浓度 C为横坐标,绘制标准曲线。 以峰面积(A)对浓度(C,?g/mL)在不同溶出介质中进行线性回归分析, 得标准曲线方程分别为:y 4.2207x - 0.0891 2 0.1 mol/L HCl:A 4.221C - 0.089 R 0.9997 2 pH7.5 TRIS-NaCl:A 4.199C - 0.089 R 0.9999 结果表明 PAX的两种释放介质溶液在 1~32?g/ml范围内线性关系良好。 2.2.5.3 回收率试验 精密称取 PAXHH及模拟肠溶缓释微丸处方比例适量辅料,用 0.1 mol/L HCl 和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液分别配制成含 PAX 16, 20, 24?g/ml三个浓度 的溶液。 用高效液相法测定其峰面积,根据标准曲线计算含量,以测得量与加入量比 较, 计算回收率。 试验测定结果见表 1-4与表 1-5。16 广东药学院硕士研究生学位论文 Tab.1-4 Results of recovery experiments in HCL solution9 ?1000 Amount Amount Average Average Recovery RSD(%) added easured recovery recovery (%) (%) (%) ?g/mL ?g/mL 15.97 15.89 99.5016.02 15.93 99.44 99.73 0.45 15.99 16.03 100.25 20.01 19.88 99.35 99.27 0.1319.95 19.79 99.20 99.22 19.99 19.81 99.10 24.01 23.76 98.96 23.92 23.59 98.62 98.87 0.22 23.89 23.66 99.04 Tab.1-5 Results of recovery experiments in pH7.5 buffer solution Amount Amount Average Average Recovery RSD(%) added easured recovery recovery (%) ?g/mL ?g/mL (%) (%) 16.04 15.99 99.69 15.93 15.86 99.56 99.83 0.37 15.97 16.01 100.25 20.03 19.81 98.90 99.40 19.98 19.66 98.40 99.20 0.99 19.95 20.01 100.30 23.97 23.77 99.17 23.95 23.68 98.87 99.17 0.29 24.02 23.89 99.46结果可知,在 0.1 mol/L HCl溶液中高中低三种浓度的 平均回收率为 99.27%, 在 pH7.5 TRIS-NaCl溶液中高中低三种浓度的平均回收率 99.40%,平均 RSD均 小于 2%,说明该方法准确度良好。 2.2.5.4 溶液稳定性 取 PAXHH及模拟肠溶缓释微丸处方比例的适量辅料,分别用 0.1 mol/L HCl 和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液配成浓度为 20?g/ml盐酸帕罗西汀的溶液, 37?放置, 17 广东药学院硕士研究生学位论文 按上述色谱条件定时检测溶液的浓度,考察该浓度下不同的介质中盐酸帕罗西汀 的稳定性,试验测定结果见表 1-6。 Tab.1-6 Stability of the paroxetine solution( 含 PAX 20?g/mL) Time(h) RSD(%) Solvent 2 6 12 18 24 0.1mol/L HCl 20.01 19.98 20.02 20.01 19.97 0.11 PH7.5 19.98 19.99 19.97 19.95 19.96 0.08结果表明,浓度为 20?g/ml盐酸帕罗西汀在 37?的 0.1mol/L HCL和 pH7.5 TRIS-NaCl缓冲液溶液中放置 24小时浓度几乎不变,即 PAX在此两种溶液中 24 小时内稳定,可用于 PAX肠溶缓释制剂释放度的测定。 2.3 理化性质的研究 2.3.1溶解度的测定 称取适量的 PAXHH对照品三份,分别置于 25ml锥形瓶中,并分别加入水, 0.l mol/L HCl,pH7.5 TRIS(三羟甲基氨基甲烷)-NaCl缓冲液使成过饱和溶 液, 将锥形瓶置于水浴恒温振荡器中振荡,温度为 37?0.5?,120rpm振荡 24 小时后 取样。经适当稀释后,用 0.45?m的微孔滤膜过滤,弃去初滤液,按高效液相 色 谱法测定浓度,以便观察其在不同 pH介质中的溶解度。结果见表 1-8。 Tab.1-7Solubility of paroxetine in Different Solventsmedium Water 0.1mol/L HCl pH7.5 Tris