铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能影响

铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能影响 铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能影 响 关键词 铁皮石斛多糖 S180肉瘤 抑瘤率 免疫功能 小鼠 铁皮石斛(Dendrobium Candidum Wall.ex Lindl.)为常用贵重药材,它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效[1]。其主要有效成分为石斛类多糖及生物碱,另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。现代药理研究报导石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、降低血糖等作用,但对荷瘤动物免疫功能的作用报导甚少。本文以S180肉瘤小鼠为动物模型,探讨了铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠的免疫调节作用,现将结果如下。 1 实验材料 1.1 动物及瘤株, ICR小鼠,雌雄兼备,体重18~22g,70只,由浙江省中医药研究院动物房提供,许可证,SYXK(浙2004-0034),S180肉瘤、YAC-1细胞株均由中国科学院上海药物研究所肿瘤室提供。 1.2 药物, 1 铁皮石斛多糖,根据文献报道提取[2],实验提取的粗多糖得率为12.8%,别直参,由杭州临安市医药药材有限公司提供,实验时切片水煎三次,煎液浓缩成1g生药/ml浓度,注射用环磷酰胺(CTX),200mg/瓶,江苏恒瑞医药股份有限公司生产,批号07070421。 1.3 试剂, 刀豆蛋白素(ConA),250mg/瓶,由美国Sigma公司产,分装成1mg/ml,-20?存放,RPMI-1640完全培养液,日本产,氚-胸腺嘧啶核苷(,3H-TdR),中国科学院上海原子核研究所生产,浓度1mCi/ml,比度42Ci/mM。 1.4 主要仪器, CO,2培养箱,美国Forna Scientific公司产,DYQ-OII型多头细胞样品收集器,绍兴坡塘机械厂生产,YJ-875SA医用净化工作台,江苏吴江净化设备总厂生产,液体闪烁计数仪,Packard Tricard 300,美国产。 2 方法 2.1 铁皮石斛多糖对S180肉瘤生长抑制作用的影响[3], 在无菌条件下,取生长良好的S180肉瘤匀浆制作1?3稀释的细胞悬液,每鼠腋窝皮下注入0.2ml,次日随机分组,每组10只,称重,编号。分组如下,铁皮石斛多糖低剂量组(400mg/kg,以下简称低剂组)、铁皮石斛多糖中剂量组(800mg/kg,以下简称中剂组)、铁皮石斛多糖高剂量组 2 (1600mg/kg,以下简称高剂组)、别直参对照组(2.2g/kg,以下简称对照1组)、环磷酰胺对照组(30mg/kg×3d,以下简称对照2组)与模型对照组(以下简称模型组)。除CTX组在第3、5、7天腹腔注射,各组动物每日灌胃相应药液1次,连续10日。于停药次日称体重,处死小鼠,取瘤块,称瘤重,计算肿瘤抑制率。 2.2 铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响, 分述如下。 2.2.1 对T淋巴细胞转化功能及NK细胞活性的影响,动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前,实验同时设正常组(ICR小鼠10只)。停药次日,脱颈椎法处死小鼠,无菌取脾脏。T淋巴细胞转化功能采用刀豆蛋白(ConA)诱导的,3H-TdR掺入法测定,NK细胞活性采用小鼠淋巴瘤细胞(YAC-1)为靶细胞的,3H-TdR前标法测定。 2.2.2 对巨噬细胞吞噬功能的影响,动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前。终止给药前3天每鼠腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液0.5ml,4天后,每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5 ml,待12小时后,颈椎脱臼处死小鼠,再腹腔注射Hank’s液2ml,轻揉小鼠腹部1min。然后打开腹部吸出腹腔洗液lml,滴于载玻片上,放在垫有湿纱布的塘瓷盆内,37?孵育30min,以生理盐水漂洗,除去未贴片细胞,晾干,1?1丙酮-甲醇溶液固定,Giemsa-PBS染色。分别计算吞噬 3 百分率和吞噬指数[4]。 2.2.3 对溶血素值的影响[5],动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前,给药第8天腹腔注射2%绵羊红细胞,实验第12天小鼠眼眶取血,分离血清,测定溶血素值。结果用半数溶血值(HC50)示。 2.3 统计学处理, 采用SPSS12.0 for windows方差分析法,所有数据以均数(x)?标准差(SD)表示,各组间采用样本均数t检验。 3 结果 3.1 铁皮石斛多糖对S180肉瘤生长的影响, 结果见表1。铁皮石斛多糖各剂量组对S180实体瘤均有一定的抑制作用,其抑瘤率为9.7%~26.8%。 3.2 铁皮石斛多糖对S180小鼠免疫功能的影响, 结果见表2、表3。由表2、表3可见,铁皮石斛多糖具有明显提高荷瘤小鼠的T淋巴细胞转化功能,其中铁皮石斛多糖中、高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01),铁皮石斛多糖对荷瘤小鼠NK细胞活性有一定的提高作用,其中高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05),铁皮石斛多糖对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数均有明显提高作用,与模型组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.001),铁皮石斛多糖对荷瘤小鼠溶血素值有明显的提高作用,其中中、高剂量组与模型组比较有显著性差异 4 (P<0.01,P<0.001)。 4 讨论 石斛属植物的药理作用广泛,其中多糖类成分是石斛具有免疫增强作用和抗肿瘤作用的活性成分[6-7]。本试验结果显示铁皮石斛多糖对S180实体瘤均有一定的抑制作用,其抑瘤率为9.7%,26.8%。铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠T淋巴细胞转化功能、NK活性、巨噬细胞吞噬功能及溶血素值均有明显提高作用。表明铁皮石斛多糖具有增强免疫功能的作用。 5 参考文献 [1]江苏新中医学院.中药大药典[M].上海,上海科学技术出版社,1985,586. [2]陈云龙,何国庆,华允芬,等.细茎石斛多糖的提取分离纯化和性能分析[J].中国药学杂志,2003,38(7),494-497. [3]徐叔云主编.药理实验方法学[M].人民卫生出版社,1982,P945-946. [4]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京,人民卫生出版社,1996,779. [5]杨锋,戴关海,沈翔,等.康得方免疫调节作用的实验研究[J].中国中医药科技杂志,1999,6(5),323-324. [6]罗慧玲,蔡体育,陈巧伦,等.石斛多糖增强脐带血和肿瘤患者外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究[J].癌症, 5 2000,19(12),1124-1126. [7]黄民权.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响[J].天然产物研究与开发,1996,8(3),39-41. 收稿日期 2009-01-19 6