[word格式] 不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定

[word格式] 不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定 不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿 主性的鉴定 一 2O一中国饲料添加剂2007年第1O期(总第64期) 不同地衣芽孢杆菌对 关国短毛黑貂肠道宿主,I生的鉴定 郝永任楚杰张大伟宿英德 (1.山东省科学院生物研究所,山东济南250014;2.济南大吉饲料有限公司) 摘要:为了筛选可应用于毛皮动物饲养的芽孢益生茵菌株,本研究以饲喂日粮的 美国短毛黑貂为试验动物,以一次性饲喂不同的地衣芽孢茵剂为试验组,通过定时收集试验 动物的粪便,测定芽孢数量,对T一1,T一2,T一3和T一4等四株地衣芽孢杆菌进行宿主性 的筛选,研究结果表明,饲喂T一3菌剂48小时后,粪便样品中仍可出较多数量的芽孢, 而且排出的芽孢总数与饲喂芽孢总数的比值约为1.6,表明此菌株在宿主肠道内萌发率较 高,芽孢和菌丝体均可吸附在宿主肠道内壁,是用于美国短毛黑貂饲 养的理想的益生茵菌 株. 关键词:地衣芽孢杆菌;美国;短毛黑貂;鉴定;宿主肠道 毛皮动物在我国的养殖管理日渐,提高 毛皮质量和疾病的有效防治工作是其饲养管理 的重点.芽孢杆菌在自然界中广泛存在于土壤, 空气和水中,而且数量丰富.芽孢菌剂作为益生 菌或肠道竞争抑制剂,除了可以改善,调整肠道 的菌群外,还可抑制有害细菌在肠道内膜的吸附 和定殖uJ,饲喂动物日粮中添加一定比例的芽 孢菌剂,还可明显降低料肉比.3J.目前,芽孢 菌剂在人和动物肠道疾病的防治中均取得了较 好疗效,最新的研究结果还在国际上首次提出了 芽孢杆菌也属于动物肠道微生态环境组成的新 理论引. 研究结果表明,宿主性强的菌株,有利于其 在宿主肠道的吸附和萌发,对肠道有害菌的抑制 作用就越明显l5J.但由于试验条件的限制,目 前难以对毛皮动物肠道微生态环境进行直接的 测定试验,对使用的益生菌菌株的作用效果,无 法进行有效的预测和判断,本研究通过在美国短 毛黑貂的日粮中添加不同的微生态菌剂,并对其 粪便中细菌组成的变化进行分析测定,为毛皮动 物专用微生态菌剂的筛选提供依据. 1材料和 1.1试验动物 本试验采用l3周龄美国短毛黑貂,共分5 组,每组3只. 1.2饲喂方法 对照组饲喂标准日粮,试验1—4组,分别在 饲喂标准日粮的基础上添加不同的地衣芽孢杆 菌菌剂,菌株编号分别为T一1,T一2,T一3和T 一 4,芽孢菌剂由济南大吉饲料有限公司提供,菌 剂芽孢含量均为20×10CFU/克,饲喂量为1 克,一次性饲喂. 1.3试验方法 1.3.1检测样品的采集 饲喂芽孢菌剂后,每4小时分别收集各组所 有粪便样品,样品用1000mL生理盐水悬浮,匀 浆后备用.样品共收集至饲喂芽孢菌剂后48小 时. 1.3.2芽孢数量的测定 取匀浆后样品5mL,75%热处理20分钟, 震荡摇匀后,取1mL,用生理盐出稀释一定倍 数,LB培养基平板涂布100uL,37?培养36小 郝永任,等:不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定一 2l一 时后进行菌落计数. 样品芽孢数量(10.CFU)=菌落数×稀释 倍数×10×1000/10 2结果与讨论 2.1美国短毛黑貂粪便样品中芽孢数量的测定 结果(图1) 图1试验组粪便样品的芽孢数量的测定结果 ?:T一1;-:T一2;?:T一3;?:T一4. (注:对照组收集样品的芽孢测定数量均少于10’cru) 2.2芽孢总数的测定结果 将所有试验组样品测定的芽孢数量进行累积, 得到的芽孢总数的结果见表1,以测定的芽孢总数 与饲喂芽孢总数的比值作为判断芽孢在宿主肠道 内萌发生长的指标,计算结果如图2所示. 表1试验组芽孢总数的计算结果 组另UT一1T一2T一3T一4 芽孢总数(10.CFU/组)61.8377.6796.2O76.53 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 O.8 O.6 0.4 0.2 O.O T-1T-2T_3T’4 .’ 图2试验组芽孢测定总数与添加饲喂总数的比值 2.3结果讨论 本研究结果显示:4个试验菌株在美国短毛 黑貂肠道内的生活状态具有较大的差异,T一1 菌剂试验组,在饲喂2O小时后,即将饲喂的芽孢 基本排出体外,而且数量与饲喂数量差异不大, 表明T一1菌株宿主动物肠道内的萌发率较低, 而且在肠道内的滞留时间短;T一2菌剂试验组 虽然也在宿主体内的滞留时间较短,但芽孢在宿 主肠道内的萌发率较高;T一4菌株虽然在体内 的滞留时间较长,但饲喂2O小时内,也将大多数 的芽孢排出体外,表明T一4菌株的菌丝体在肠 道内具有一定的吸附位点,而芽孢则无吸附位 点,没有萌发的芽孢很快被排出体外;T一3菌剂 试验组的测定结果表明,不但其芽孢在宿主肠道 内的萌发率较高,而且芽孢和菌丝体在肠道内均 具有一定的吸附位点,饲喂后48小时,仍未全部 排出. 多种动物饲喂芽孢益生菌的试验结果表明, 芽孢只有在宿主动物肠道内萌发后,才可进行增 殖,肠道内壁吸附和外泌消化酶等多项生理活 动,因此选育宿主性强的芽孢菌株,才能有效的 改善宿主肠道内的微生态环境,抑制有害菌在体 内的滞留和繁殖,促进消化吸收J. 虽然,由于试验条件的限制,本研究直接对 美国短毛黑貂肠道内的微生态环境进行直接的 测定和分析,但通过定时对其排出粪便的样品进 行分析,也可有效地对试验菌株的宿主性进行判 断,经本研究的初步筛选结果表明,地衣芽孢杆 菌T一4制备的益生菌剂,可以在美国短毛黑貂 的日粮中添加饲喂. 参考文献 [1]Fuller,R.Probioticsinmailandanimals.JApplBac— teriol,199l,66:365—378. [2]MstherRAandRichardML.Propagationbysporulation intheguineapigsymbiontMetabacteriumpolyspora. ProcNadAeadSci,1998,95:10218,10223. [3]张大伟,郝永任,楚杰,等.益生茵地衣芽孢制剂的作用 轵理及应用研究[J].山东饲料,2004,(10):27—28. [4]SimonMCeta1.TheintestinallifecycleofBacillus subtilisandcloserelatives.JBacteriol,2006,188(7): 2692—27oo. [5]SimonMCeta1.Bacillusprobioties:sporegermination inthegaltrointestinaltract.AppliedandEnvironmental Microbiology,2002,68(5):2344—2352. [6]李健雄,田兴山.动物微生态制剂的研究及应用进 展[J].广东畜牧兽医科技,2004,29(4):15一l7.