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大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及脊髓

2017-11-13 13页 doc 36KB 30阅读

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大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及脊髓大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及脊髓 浙江大学 博士学位论文大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及 脊髓圆锥神经元凋亡、HSP70、BDNFmRNA表达的改变 姓名:杨明 申请学位级别:博士 专业:外科学(骨外科) 指导教师:陈正形 20040201 浙江大学博士毕业生论文 大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥 神经元的形态结构变化及脊髓圆锥神 经元凋亡、,,,,,、,,,,,,,,表达的变化 ,,,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,...
大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及脊髓
大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及脊髓 浙江大学 博士学位论文大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥神经元的形态结构变化及 脊髓圆锥神经元凋亡、HSP70、BDNFmRNA表达的改变 姓名:杨明 申请学位级别:博士 专业:外科学(骨外科) 指导教师:陈正形 20040201 浙江大学博士毕业生论文 大鼠马尾神经受压后马尾与脊髓圆锥 神经元的形态结构变化及脊髓圆锥神 经元凋亡、,,,,,、,,,,,,,,表达的变化 ,,,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ;,,, ,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ;,,,, ,?,,,, ,, ,,,, 专业 骨外科学 ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,;, ,,,,级博士研究生 杨明 ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,, 导师 陈正形 教授 矾,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,, 中文摘要第一部分:马尾神经受压大鼠马尾与脊髓圆锥神经细胞的形态结构变化 目的:通过对大鼠马尾受压后其形态结构的变化及脊髓圆锥神经元的形态结构变化的观察,证实马尾受压可导致脊髓圆锥神经元的损害,寻找马尾综合征的可能病因机制。 方法:,,太鼠,,只,雄性,,,,,,,,,克,分术后,,,,,、,,,拍、,,、,,、,,、,,、,,、,,取材,及假手术组与正常对照组共,,组。 动物模型的制作:参照,,,,,,,,等的方法,用质量浓度为,。,,的硫贲妥钠(,,,,,,)腹腔注射麻醉,剪去术区被毛,,,,酒精消毒,无菌手术暴露,,节段棘突与椎板,蚊式血管钳咬除,,棘突与椎板,暴露硬膜,于硬膜椎板间隙向椎管头端塞入一条,,,,,,脚,的硅酮片。待动物苏醒后,均为出现截瘫,按改良,,,,,,法(,,,,,,,评分标准)测定神经功能。 , 浙江大学博士毕业生论文 取材动物在各时相点先行改良,,,,,,法神经功能评分后麻醉,经左心室置主动脉插管,剪破右心耳,以,(,,生理盐水灌注,待右心耳流出透明液体后,改用,,的多聚甲醛灌流,,—,,分钟,待大鼠尸体僵硬后,完整取下,,以下的脊髓与马尾。切取,。一,,节段脊髓与受压节段马尾(乙)。 ,,染色切片标本制作:取出的脊髓于马尾组织做石蜡切片,片厚,,,,,每块组识随机取连续切片多张,取一套行,,染色。 电镜标本制作:选造模术后,天、,周、,用、,周及假手术组大鼠各一只,按上述取材法取出脊髓与马尾,将取出的脊髓在解剖显微镜下矢状切成两半,取马尾的其中一束神经纤维切成,,,长度。,(,,戊二醛,,,,进行预固定,,小时后用缓冲液充分漂洗,再用,,锇酸溶液作后固定。固定过程温度保持在,?。用乙醇系列脱水。用环氧树脂,,,包埋液逐步取代脱水剂。超薄切片,,,,。用醋酸铀和枸橼酸铅进行染色。 结果:压迫组术后即出现双后肢全瘫或不全瘫,,改良,,,,,,评分均为,一,级,,,后除个别恢复为,级外,后肢运动功能无恢复。,,染色结果:造模术后,,,,,—,,,马尾后方神经柬膜与神经柬间小血管关闭或狭窄变形,前方正常。造横术后,,,小血管重新开放,神经纤维髓鞘退变,神经纤维间水肿(可见炎性细胞浸润。术后,,马尾后方直接受压处神经纤维变性,结构不清,纤维组织内有肉芽组织形成,马尾腹侧神经纤维变性,髓鞘变粗,神经内小血管扩张、毛细血管增生,受压脊膜增生。,,一,,时,上述变化更为严重。马尾受压后,,时,个别骶髓神经细胞过染,细胞核结构仍正常;,,后,骶髓前角细胞中的较多细胞出现结构变异,着色异常,细胞核浓聚,细胞皱缩。电镜观察结果:造模术后 ,,:髓鞘染色不均匀,边缘粗糙,髓鞘内裂隙增多。雪旺氏细胞胞核可见异染色质边聚,胞质内小泡与溶酶体增多。造模术后,,,,,上述变化进一步加重。压迫组脊髓前角神经元表现:造模术后,,起,神经细胞胞核仍为圆形或椭圆形,但明显深染,核周出现异染色质。线粒体肿胀,少数线粒体见外膜溶解破裂。胞内出现较多的胞质小泡。术后,,:胞核明显深染,异染色质增多边聚,出现胞核扭曲固缩,线粒体肿胀明显,嵴稀少,有的断裂。粗面内质网断裂、 , 浙江大学博士毕业生论文脱颗粒,胞质内见大量小泡。周围髓鞘松散解体。术后,,、,,(?,,表现与术后,,组相似。 结论:,(马尾受压后可导致脊髓圆锥神经元的形态与结构的改变。,(神经元的损伤可能是造成临床上马尾神经综合症减压术后,神经功能恢复差的原因之一。 第二部分马尾神经受压对脊髓圆锥神经元凋亡的影响 目的:采用原位末端脱氧核糖酶转移酶介导,,,,标记(,,,,,)技术,对马尾神经受压的大鼠脊髓圆锥进彳于检测,以明确神经细胞在马尾神经受压后凋亡速度是否变化以及凋亡细胞数量与时相的关系。 方法:,,,,,染色操作步骤按说明书进行,结果判定:细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞,即凋亡的细胞。测脊髓横截面面积。统计学处理:每张切片的阳性细胞数除以脊髓横切面的面积即为单位面积的阳性细胞数,所得数据经,,,,, ,(,软件处理,以,?,表示,统计学方法采用单因素方差分析。 结果:,,,,,染色阳性细胞计数结果为:阴性对照:,(,,?,(,,,假手术组:,(,,?,(,,,术后,,,,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,,,(,,。与对照组相比,术后,,起阳性细胞增加,术后,,为高峰,至术后,,,仍显著高于对照组。 结论:马尾神经受压可导致脊髓圆锥神经元调亡数量的明显增加。受压后,,增加,,,达高峰,,,时仍『每于正常。晚期凋亡不能逆转,这可能是,,,逾期手术效果不理想的重要原因之一。本实验的结果提示马尾受压后,,前减压应有良好疗效,,,后解压的疗效需由后续的实验证实。 浙江大学博士毕业生论文 第三部分大鼠马尾神经受压后脊髓圆锥神经元热休克蛋白,,表达 的变化 目的:了解,,,是否导致,,,一,,表达的变化以及表达数量随时间的变化。为手术时机的选择提供依据,以及为手术与药物的疗效提供评价标准。 方法:热休克蛋白,,染色操作步骤按说明书进行,结果判定:细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。测脊髓横截面面积。统计学处理:每张切片的阳性细胞数除以脊髓横切面的面积即为单位面积的阳性细胞数,所得数据经,,,,, ,(,软件处理,以,?,表示,统计学方法采用单因素方差分析。 结果:,,,染色阳性细胞计数结果为:阴性对照:,(,,?,(,,,假手术组:,(,,?,(,,,术后,,,,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,士,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,。与对照组相比,术后,,起阳性细胞增加,术后,,为高峰,至术后,,,仍显著高于对照组。 结论:,(马尾受压,,后即出现阳性细胞明显增加。较阴性对照组有显著性差异(图,,)。受压后,,阳性细胞达到高峰。受压后, ,仍维持在较高水平。,(,,,,,可作为马尾压迫造成脊髓损伤的一个敏感且易测的指标,为后续的关于减压时机选择的研究提供依据,„或为手术或药物的疗效提供评价指标。,(通过无毒性的药物或基因转染等手段诱导,,,,,局部合理表达可使机体细胞耐受潜在损伤刺激的能力增加,可作为治疗马尾综合征的新方法。 第四部分大鼠马尾神经受压后脊髓豳锥神经元脑源性神经营养因子 ,,,,,,表达的变化 , 浙江大学博士毕业生论文 目的:了解,,,是否导致脑源性神经营养因子(,,,,),,,,表达的变化,测定表达数量随时间的变化,探讨,,,,表达的来源,了解马尾受压后脊髓神经元是否具有自我修复功能。为手术时机的选择提供依据。为手术与药物的疗效提供评价标准。 方法:脑源性神经营养因子),,,,原位杂交染色操作步骤按说明书进行。结果判定:细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。测脊髓横截面面积。统计学处理:每张切片的阳性细胞数除以脊髓横切面的面积即为单位面积的阳性细胞数。所得数据经,,,,,,(,软件处理,以,,,表示,统计学方法采用单因素方差分析。 结果:,,,,,,,,染色阳性细胞计数结果为:阴性对照,,,?,,,:,假手术组:,(,,?,(,,,术后,,,,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,(,,,术后,,:,,(,,?,。,,,术后,,:,,(,,?,(,,。与对照组相比,术后,,起阳性细胞增加,术后,,为高峰,至术后,,,仍显著高于对照组。 结论:在马尾严重受压后,靶源性,,,,阻断情况下,神经元及胶质细胞可能通过旁分泌或自分泌方式产生的,,,,修复受损的神经元。在马尾受压患者行减压术后。给予外源性的神经营养因子或通过基因转染技术或药物等增加内源性神经营养因子的合成,可能会有更佳疗效。 浙江大学博士毕业生论文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碡,,,,, ,?,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,, ,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,?, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,; 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