化妆品中维生素D2 维生素D3的高效液相色谱测

化妆品中维生素D2 维生素D3的高效液相色谱测 化妆品中维生素D2 维生素D3的高 效液相色谱测 朱英 杨艳伟 王歆1 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京 100021 维生素D1和维生素 结构相似、功能相同，皆为脂溶性维生素，主要区别在于两者的来源不同。其中，维生素 来源于植物，维生素D 来源于动物。无论是维生素 还是维生素D 都是为了强化营养的目的添加到化妆品里的，如维生素D，可单独或与维生素A并用于软膏及乳液状化妆品中，对湿疹、溃疡、冻伤及皮肤创伤愈合等有疗效 ;维生素D 可防止受害的黑色素细胞癌变，特别适用于老年人化妆品;维生素D 、维生素D 与维生素A结合，维生素D 与维生素E结合，能增强皮肤的吸收能力等” 。但长期使用含有维生素D1、维生素D 的化妆品，特别是乳婴容易引起维生素过剩症。 我国《化妆品卫生规范》(2002年版)规定，化妆品中不得含有维生素D，、维生素D 。由于各国的化妆品法规和管理模式存在差异，这些禁用物质在某些国家却是允许使用的。因此，建立化妆品中维生素 、维生素D 的检测方法对于杜绝含有上述禁用物质的化妆品进入我国市场，加强化妆品的卫生监督力度，保护消费者健康有重要意义。 l 材料与方法 1(1 仪器 Agilent公司Agilentl100高效液相色谱仪，配色谱工作站。超声波清洗器。 1(2 试剂 维生素D2、维生素D3和维生素E标准品均购于Sigma公司;乙腈、甲醇和四氢呋喃为色谱纯，购于Fisher公司;乙醇为分析纯，购于北京化学试剂公司。 1(3 方法 1(3(1 色谱条件 色谱柱:Alhima C18柱(250mm X 4(6mm I(D(，5um);流动相:甲醇:乙腈=90:10;检测器:二极管阵列检测器，检测波长265nm;流速:1(0ml,min;柱温:25 oC。 1(3(2 标准曲线的绘制 标准溶液配制:分别准确称取维生素D2和D3标准品各0.1000g，移人100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备溶液。分别准确吸取1(00ml维生素D2和D3的标准储备溶液，用甲醇稀释到10(0ml，此混合标准溶液约含维生素D2、维生素D3各100mg,L。用流动相将混合标准溶液稀释至50(0、20(0、10(0、2(00和0(50mg,L系列质量浓度溶液。 标准曲线绘制在设定色谱条件下，分别取5 l标准系列进行HPLC分析。图1为维生素D2、维生素D3的液相色谱图。常加入化妆品中的维生素A，维生素c，维生素E，只有维生素E在维生素D2、维生素D3附近出峰，并能与维生素D 、维生素D1达到基线分离(见附图)。以标准系列质量浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线。 1.3.3 样品测定 准确称取样品约0(5g于10ml具塞刻度管中，用流动相定容至刻度，摇匀，超声提取20min。经0(45tLm滤膜过滤，滤液作为待测样液。在设定色谱条件下，取5 进行HPLC分析。根据待测样液的峰面积，由标准曲线得出待测样液中各组分的质量浓度。样品中各组分的含量应在此浓度上乘稀释倍数。 2 结果与结论 2(1 标准品纯度校正 由于维生素 D2和D3对光不稳定，因此在配制标准溶液之前需用紫外分光光度法进行纯度校正。具体方法如下:维生素D2、维生素D3在263nm波长处有最大紫外吸收，而乙醇在该波长无吸收。在95, 乙醇溶液中，质量分数为1, 的维生素D 2溶液的吸光系数为460，质量分数为1,的维生素D3溶液的吸光系数为485。吸光系数相当于吸光度,浓度，因此通过测定吸光度可得出所配制溶液的准确浓度，进而校正纯度。 2(2 色谱条件的优化实验考察了5种不同型号、不同厂家的色谱柱。结果表明，在2orbax C 8(250mm X 4、6mm)上，维生素D2和D3不能分离;在LUNA Cl8(150mm X 4(6mm)、NUCLEOSIL Cl8(250 am x4(6mm)、ALLTIMA C18(150mm X 4.6mm)、ALLTIMA Cl8(250mmX 4(6mm)色谱柱上维生素D 2和D3 的分离度分别为0(722、1(356、1(255和1(666。实验最终选择ALLTIMA C18(250mm X4(6mm)色谱柱作为分离柱。 考察了乙腈、甲醇、四氢呋喃等多种溶剂的单相、两相或三相体系作为流动相时，维生素D 2、维生素D3 的分离效果。结果表明，乙腈单相中维生素D2 、维生素D3 的分离度大于2，但保留时间长达30rain，不利于快速检测。甲醇作为流动相时，维生素D2，、维生素D3的保留时间只有10min左右，但两组分得不到完全分离。通过优化甲醇和乙腈的体积比，最后选择甲醇:乙腈=90:10作为流动相。此时，两组分能达到基线分离，保留时间11,12min。四氢呋喃:乙腈=18:82作为流动相时，两组分也能达到基线分离，考虑到四氢呋喃的价格和毒性均高于甲醇，所以方法特性研究中不再考虑该体系。 2(3 线性范围及检出限 在设定色谱条件下，对不同浓度维生素D2、维生素D3的混合标准溶液进行6批次测定，计算平均标准曲线和相关系数。同时以3倍空白噪声计算检出限。结果表明，维生素D2、维生素D3在0(5,100mg,L质量浓度范围内均有良好的线性关系。其中，维生素D2的平均回归方程萱，Y=0(136X+0.323，相关系数r=0(9997，检出限为0(12mg,L;维生素D 的平均回归方程Y=0.072X一0.078，相关系数r=0.9999，检出限为0.06mg,L。 2(4 精密度 对不同浓度的维生素D2维生素D3混合标准溶液重复测定6次，在0.50,100mg,L范围内，维生素D2的变异系数为1.1, ,3.8, ，维生素D3的变异系数为1.6, ,3.5,。 2(5 准确度和干扰试验 在14种标识含有维生素A、维生素c或维生素E的乳液、膏体、嗜喱、粉末、液体等不同性状样品中添加20ug,g的维生素D 和D，混合标准溶液，测定加标回收率。结果维生素D加标回收率为94、3, ,101(4, ，维生素D2 的加标回收率为91(7, ,97(2, 。共存的其它维生素不干扰测定。 总之，高效液相色谱法同时测定化妆品中的维生素 和D1，样品前处理操作简便、回收率高、色谱峰重现性好、分离速度快，适合化妆品中禁用物质维生素D2和维生素D3的监督监测。 参考文献 1.刘纯洁(危险化妆品(北京:科学普及出版社，1992，87(90 2.李光东(实用化妆品生产技术手册(北京:化学工业出版社，2001，64 3.黄桂宽(实用美容化学(北京:科学出版社，2002，91