薄层-紫外分光光度法测定骨碎补中柚皮甙的含量

薄层-紫外分光光度法测定骨碎补中柚皮甙的含量 薄层-紫外分光光度法测定骨碎补中柚皮甙 的含量 ? 76?(总236)中医正骨2007年3月第19卷第3期 ? 药物研究? 薄层一紫外分光光度法测定骨碎补中柚皮甙的含量 河南省洛阳正骨医院河南省正骨研究I~(471002)陈洁 骨碎补是水龙骨科植物槲蕨(Drynariafortunel(Kunze)J. Sm.)的根茎.中医多用于外伤的治疗.最新研究发现,骨碎 补能促进培养中鸡胚骨原基的生长和小鸡骨的发育;并明显 地抑制醋酸可的松引起的骨丢失~1,21对骨性关节炎的实验研 究结果表明,用药组的骨关节发病率下降,发病时间推迟,发 病程度减轻,证明了骨碎补是一良好药物,骨碎补的化学成分 及其他药理作用,亦有研究报道,但其中的成分之一柚皮甙 (Narlagin)的测定方法尚未见报告.我们选用薄层.紫外分光 光度法测定了骨碎补中柚皮甙的含量.其方法简便,结果满 意.现报告如下. 1仪器与试剂 美国hp-B452A分光光度计,上海751G分光光度计. 柚皮甙:购自中国药品生物制品鉴定所.骨碎补药材:购 自本院药剂科,经鉴定为(Drynariafortunel(Kunze)J.sm.).硅 胶针H:青岛海洋化工厂,其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1供试液的制备将骨碎补粉碎过8o目筛,准确称取3g 粉末置索氏提取器中,加50ml丙酮于75~C水浴回流提取3小 时,检查柚皮甙呈阴性反应,回收丙酮并蒸干.残渣用无水乙 醇定溶于10ml容量瓶中,作供试液. 2.2薄层条件的选择自制厚250tan硅胶H?CMC-Na0.5% 薄板,110~C活化1小时.以微量进样器取供试液及对照品液 上样.通过多种展开剂比较,乙酸乙酯:甲酸:无水乙醇(9:2: 1)展开效果最佳.Rf=0.5左右,薄层结果见附图左. 附图骨碎补质量鉴别薄层色谱(左)及柚皮甙吸光谱曲线(右) 2.3测定波长的选择精密称取柚皮甙标准品7.690mg,于 2rnl容量瓶中以无水乙醇定容,10上样,展开后于紫外灯下 刮取柚皮甙斑点和同一位置空白点,分别加入5ml无水乙醇. 充分振摇混匀.离心,吸取上清液在hp-8452A分光光度计上 于400190nm波长范围内测定.吸收光谱见图2.结果显 示,柚皮甙214:225:284nm处有三个吸收峰.遂选用284nm 作测定波长. 2.4标准曲线的绘制微量进样器分别精取5,10,15,20,25 柚皮甙标准液点于同板上.乙酸乙酯:甲酸:无水乙醇(9:2 :1),展开.荧光灯下刮取柚皮甙斑点和同一位置一空白点作 对照.分别以5ml无水乙醇振摇混匀.离心,取上清液于284 nm波长测定吸收值.结果见表1. 2.5样品测定骨碎补样品供试液20,柚皮甙标准液20 ,同板上样展开.径于284nm波长测定并代入回归方程. 结果见表2. 2.6回收率试验精密称取一定量的柚皮甙,加入3g骨碎 补粉中,按标准曲线项测定.结果见表3. 表1柚皮甙不同浓度吸收值 以上数据得柚皮甙的回归方程和相关数:C=47.24A+ 0.796C=0.9985.表明柚皮甙在20—100,ug范围内,浓度与 吸收值呈线性关系.符合比尔定律. 表2骨碎补供试液测定结果(折合柚皮甙含量%) 2.7稳定性考察供试液在不同时间内测量其吸收值,发现 在离心后1O分钟内吸收值有波动,半小时至4小时内测定, 其吸收值其本无变化. 3讨论 本文采用比色法测定骨碎补中柚皮甙的含量,具有操作 简便.稳定性好.薄层展开后,应即时刮取斑点,转溶于无水 乙醇中离心.以减少甲酸对样品的影响.本法可为评价骨碎 补及含量碎补的成药提供一个控制方法. 4参考文献 [1]马克昌.高子范,刘鲜茹.骨碎补注射液促进钙磷沉积的初步研 究[J].中医正骨,1989,1(1):13. [2]马克昌,高子范,冯坤.骨碎补注射液对小鸡骨发育的促进作用 [J].中医正骨,1990,2(4):7. (2006-09.13收稿2006.12.25修回) 148n一,,,一, OO00