枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究

枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究 枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究 ? 18? 湖北中医药大学 JournalofHubeiUniversityofChineseMedicine 2011年6月第13卷第3期 June,201l,Vo1.13,No.3 【药学研究】 枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究 李元元,定天明,刘艺婷,但汉雄 (1.湖北中医药大学药学院2008级硕士研究生,湖北武汉430065; 2.湖北省食品药品监督检验研究院,湖北武汉430064;3.湖北中医药大学药学院,湖北武汉430065) 摘要:目的研究了枸杞子最佳提取工艺.方法采用正交设计法进行了提取工艺的研究,并采用紫外一可见分 光光度法分别测定其中总黄酮和枸杞多糖的含量.结果正交试验明较优的总黄酮提取条件为8倍量80%乙醇提 取2次,每次1h,合并水提物得到的枸杞子提取物总黄酮含量高达5%,枸杞多糖含量高达3%.结论本实验研究的 枸杞子提取物制备工艺简便,环保经济. 关键词:枸杞多糖;总黄酮;正交试验;含量测量 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-987X(2011)03-0018-03 StudiesontheExtractionTechnologyofTotalFlavonoidsand LyciumBarbarumP0lysaccharidefromLyciumbarbarumL 基金项目:国家保健食品原料药枸杞子提取物研究专项工作项目(食药监许函[2009]276号). 作者简介:李元元(1985一),女,湖北中医药大学2008级硕士研究生. 通讯作者:但汉雄(1963一),男,湖北中医药大学药理学研究生导师,电子信 箱:DHX200709@126.corn. 松生拟层孔菌属多孔菌目中的一种,别名红缘层孔菌.子实体 无柄.菌盖扁平,半球形或马蹄形,长径7—35cm,短径5— 24cm,厚3—8cm.表面灰色或黑色,有的具红色胶质皮壳,有较 宽的同心环棱,边缘赤栗色,黄色或类白色.管口面浅黄色或锈 褐色,管口圆形,每lmm间3—5个.纵剖面可见菌管多层,每 层厚3—7mm.木质或木栓质.气微,味淡,具有祛风除湿之功 效,我国大部分省区有分布J.据报道松针层孔菌主要用于改 善肿瘤放化疗患者的症状,如增加食欲和体重,减轻疼痛,有时 可见肿瘤缩小,胸腹水减少,提高患者的细胞免疫功能延长肿 瘤患者的生存期,明显改善生存质量,辅助放化疗使用,可有效 抑制各种癌症,其子实体热水提取物对小白鼠内瘤细胞S180 的抑制率为51.2%….本研究通过结合细胞形态学显微镜观 察,AlamarBlue法及MTI"法对松生拟层孔菌子实体乙醇提取物 进行体外抗肿瘤的研究,可以直接确定待检样品是否具有对肿 瘤细胞直接杀伤的抗肿瘤活性,另外采用多种不同的检测方 法可以获得其体外抗肿瘤作用较为客观全面的信息.本实验 研究表明,松生拟层孔菌子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外对 $180,H22,NCI—H460细胞株均有明显的增殖抑制作用,并且 呈现出现初步的量效关系,随剂量增大,抑制作用增强,其中在 lO0~g/mL时,其子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外对人肺癌 细胞株NCI—H460表现出较高的抑制活性,抑制率高达98. 73%,表明松生拟层孔菌子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外具 有稳定的抗肿瘤活性,可能与其在体外直接诱导肿瘤细胞凋亡 有关.本实验研究为下一步深入研究其体内外抗肿瘤的作用及 机制奠定了一定的实验基础. 参考文献: [1]RenG,LiuXY,ZhuHK,eta1.Evaluationofcyt0t0xjcactivitiesof somemedicinalpolyporefungifromChina[J].Fitoterapia,2006,77 (5):408—410. 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MethodsThetechniquewasselected withtheorthogonaldesign.Andtheestablishmentofultraviolet— visiblespectrophotometrywasdeterminedinwhichthetotalcontentoffla— vonoidsandLyeiumBarbarumPolysaccharide(LBP).ResultTheoptimumtechniqueoftota lflavonoidsparameterswerefollows:8O%eth— anolassolution,materialtosolution1:8,extractingtime1h,andextractionfor2times.Combin edaqueousextractofLyciumbaxbammLex- tractobtainedbythetotalflavonoidcontentofupto5%.containsupto3%ofLBP.ConclusionT heextractingmethodstudiedinthispa- periSsimple.andenvironmentallyfriendly. Keys:LyciumBarbarumPolysaccharide(LBP);Totalflavonoids;Oahogonatdesign 枸杞子是茄科植物宁夏枸杞LyciumbaxbammL的干燥成 熟果实,2002年枸杞子被列为国家保健食品名单,营养学家用 枸杞子为主料配制生产的营养保健品能提高免疫功能,抗衰 老,被视为保健佳品.近年来,枸杞子提取物远销欧美市场成为 医药,保健产业的"红宝"_l-3],然而通过对市场上现有枸杞子 提取物调查表明,其工艺仅采用水提法制备的提取物只保证了 枸杞多糖[4],轻视了总黄酮这个标志性功效成分.本实验以 宁夏中宁县枸杞子为样品,研究枸杞子提取物的制备工艺及其功 效成分总黄酮含量测定,为枸杞子功能食品的研制奠定基础. 1材料 1.1仪器 通用Tu一1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪 器有限责任公司);LC一250超声清洗机(济宁市中区鲁超仪器 厂);RE一2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);DZF一6o20 型减压真空干燥器(上海精宏实验设备有限公司). 1.2药材及试剂 枸杞子药材(经湖北省食品药品监督检查研究院中药室冯 老师鉴定,产地为宁夏中宁县),芦丁对照品(纯度90.5%,批 号:100080—200707,购于中国药品生物制品检定所);葡萄糖对 照品(中国药品生物制品检定所,批号:110833—200503);无水 乙醇,苯酚,硫酸,亚硝酸钠,硝酸铝为分析纯,纯化水;枸杞子提 取物(自制,批号:20100901—20100903). 2方法与结果 2.1正交试验 制备稠膏I时按表1的因素水平设计正交试验,以枸杞子 提取物的提取率及稠膏I中总黄酮含量为主要指标,考察乙醇 浓度,提取时间,溶剂用量,提取次数对回流提取效果的影响,测 定结果见表2. 表1因素水平表 表2正交试验与分析表 2.2枸杞子提取物的制备 根据相关文献及正交试验结果确定最佳工艺为 ABCD.,按以下分别制备浓缩稠膏I(含总黄酮)及 浓缩稠膏?(含枸杞多糖);合并I和?,40?减压真空干燥24h 后研细,成粉,即得枸杞子提取物?. 2.2.1稠膏I的制备:枸杞子适量,加入少量水匀浆,以固液比 为8g/mL,含醇量达80%溶剂回流提取2次,每次1h,纱布过 滤,合并2次滤液,80~C水浴浓缩成相对密度为1.10—1.20(室 温)稠膏I. 2.2.2稠膏?的制备:取枸杞子醇提后的残渣,加入1O倍量蒸 馏水,回流提取2次,每次1h,过滤,合并2次滤液,在40?水浴 减压浓缩成相对密度为1.10—1.20(室温)稠膏?. 2.3优化提取工艺后的枸杞子提取物?的含量验证 2.3.1总黄酮的测定方法:参考相关文献-lo],精密称取枸杞 子提取物各0.2g,置25mL量瓶中,加水5mL溶解,然后加65% ? 20?湖北中医药大学2011年第13卷第3期 乙醇定容,超声30min,滤过,精密量取2mL至25mL量瓶中,以 芦丁的30%乙醇溶液(0.2mg/mL)为对照溶液,精密量取1,2, 3,4,5mL置25mL量瓶中配制标准曲线,在样品溶液和对照溶 液的25mL量瓶中依次加2mL水,6mL30%乙醇,1mL5%亚硝酸 钠溶液,静置6min后,再加lmLlO%硝酸铝溶液,再静置6rain, 加lOmL氢氧化钠试液,30%乙醇定容,静置15rain.以相应的 试剂为空白,在500nm波长下测定其吸光度值,测定结果见 表3. 表3枸杞子提取物?总黄酮的含量测定结果 2.3.2枸杞多糖的测定方法:精密称取本品80mg,加80%乙醇 50mL置锥形瓶中,超声处理30min,过滤,滤渣80%乙醇洗涤3 次,后将滤渣连同滤纸放入原锥形瓶中加水60mL,超声30min, 过滤,滤液移置lOOmL量瓶中,水洗涤锥形瓶2—3次转移置量 瓶中定容,取2mL置25mL比色管中为样品溶液.以减压干燥 至恒重的无水葡萄糖的水溶液(1mg/mL)为对照溶液,精密量 取0.2,0.4,0.6,0.8,1.OmL置25mL比色管中为对照溶液配制 标准曲线.在25mL比色管中加入5%苯酚溶液1mL,摇匀,迅 速加入硫酸5mL,摇匀,放置lOmin,置40?水浴中保温15min, 取出后冷却至室温,以相应的试剂为空白,在490nm的波长处 测定吸光度,测定结果见表4. 表4枸杞子提取物枸杞多糖的含量 3讨论 本实验通过对枸杞子总黄酮提取方法及正交试验验证,表 明采用乙醇回流提取最好,且乙醇浓度最为关键,优选工艺为 80%的乙醇8倍量为溶剂,提取2次,每次lh,将总黄酮提取的 残渣再以水为溶剂提取枸杞多糖,可保证两种功效成分的有效 提出,且总黄酮的平均含量高达5%,是市场上调研的枸杞子提 取物中总黄酮平均含量的5倍. 本实验在测定枸杞多糖时先用80%乙醇沉淀多糖…, 避免受单糖影响而致结果偏高,为进一步有效控制枸杞子提取 物的质量,并在此基础上研发枸杞子保健食品,为实现枸杞子种 植的产业多元化发展奠定基础. 参考文献: [1]周晶,李光华.枸杞的化学成份与药理作用研究综述[J].辽宁中 医药大学,2009,11(6):93—94. 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