尿pH值对尿β2-微球蛋白检测的影响及其对策

尿pH值对尿β2-微球蛋白检测的影响及其对策 尿pH值对尿β2-微球蛋白检测的影响及其 对策 验医学2010年3月第25卷爿laboratoryMedicine,March2010,Vol25.No3 文章编号:1673-8640(2010)03-0231-02中图分类号:R446.1文献标识码:A 尿pH值对尿I;2-微球蛋白检测的影响及其对策 郭永铁 (天津中医药大学第一附属医院检验科,天津300193) 摘要:目的探讨pH值对尿32-微球蛋白(p一MG)检测的干扰及应对措施.方法收集32例肾病患者的 尿样本,记录pH值,将同一份尿样本分作5份:未处理的新鲜尿,以磷酸盐缓冲液(PBS,pH值7.0)1:1稀释的 新鲜尿(上述2份样本立即冰冻保存),以PBS1:1稀释室温再放置2h的尿液,室温放置2h再用PBS1:1稀释 的尿液,室温放置2h未作处理的尿液.全部尿样本冰冻保存1周后采用放射免疫法测定32-MG的含量.结果 室温放置2h后用PBS稀释和未处理的pH值<6的尿样本p:一MG含量均显着低于新鲜尿,其余组与新鲜尿 无差异.结论使用PBS能够准确校正尿的pH值,且不影响p一MG的检测. 关键词:32-微球蛋白;pH值;磷酸盐缓冲液 我们完全按照实际工作的,观察尿液样 本送检过程中pH值变化对尿132-微球蛋白(p一 microglobulin,32-MG)检测的影响,并与用磷酸盐 缓冲液(PBS,pH值7.0)校正pH值后尿I32-MG 的检测结果进行比较. 和方法 一 ,研究对象 本院住院或门诊已确诊的32例肾病患者. 将患者晨起留取的新鲜尿分别用5种方法处理: (1)未作处理;(2)用PBSi:1稀释;(3)用PBSI :1稀释后室温静置2h;(4)室温静置2h后再用 PBS1:1稀释;(5)室温静置2h后不作处理.5 份尿样本处理完后立即冰冻保存.全部尿液在处 理前,使用广范围pH值试纸测定pH值(pH值> 6的2例,pH值<6的3O例),并对号记录.所有 用PBS稀释后的尿液,经pH值试纸检测,pH值 均达到7.以第1份样本留取的时间作为开始,1 周后样本取出复溶检测. 二,方法与仪器 测定采用放射免疫分析法.试剂盒由天津协 和医药公司提供,严格按照说明操作.仪器采 用北京261厂BH-6020型放射免疫计数器. 三,统计学方法 稀释的尿B一MG的测定结果乘以2后汇人 计量资料,计量数据采用4-S表示.应用SPSS 13.0统计软件,应用单样本的K-S检验进行数据 的正态性检验,组间样本均数之间的显着性分析 采用F检验与Q检验进行统计,P<0.01表示差 异有统计学意义. 结果 经K-S检验全部数据均可认定为近似正态分 布. 经不同方法处理的尿B一MG检测结果见表 1.原始pH值<6的用PBS1:1稀释的和用PBS 1:1稀释后室温静置2h的尿样本B一MG检测结 果与未作处理的新鲜尿的检测结果差异均无统计 学意义(P>0.05).室温静置2h后再用PBS1:1 稀释的和室温静置2h后不作处理的尿样本的 6?MG检测结果均低于未作处理的新鲜尿(P= 0.000,P=0.000)检测结果.室温静置2h的尿 样本的13:一MG比新鲜尿降低56.5%左右,而室温 静置2h后再用PBS1:1稀释的尿样本B.MG结 果与室温静置2h后不作处理的尿样本的检测结 果差异无统计学意义(P>0.05).原始pH值>6 的尿样本只有2例,不宜作统计学分析. 作者简介:郭永铁,男,1971年生,学士,主管技师,主要从事临床免疫学研究. 检验医学2010年3月第25卷第3期LaboratoryMedicine,March2010.v0125.No3 表1不同处理方法尿[32-MG的检测结果(mg/L) 注:与未作处理组比较,}P=O.000 讨论 国内学者指出在pH值5.5时尿p:.MG即 开始迅速降解,因而提出尿132-MG可由检测意义 相近的尿仅l一微球蛋白(】一microglobulin,仪1.MG), 尿视黄醇结合蛋白(retinolbindingprotein,RBP), 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatinC,CysC)取 代l2J.但基于13:一MG主要由淋巴细胞合成的,几 乎存在于所有有核细胞的表面,可客观地反映细胞 增生破坏的状况,是肿瘤最实用的辅助诊断与疗效 观察指标之一,而且尿t3一MG对血B-MG临床 价值的补充作用是无可替代的.同时尿B一MG还 是反映肾小管近曲小管功能的首选指标.因此,尿 132-MG仍具有相当的临床应用价值. 如何消除酸性尿中B-MG的不稳定性呢,石 泉等采用1mol/LNaOH校正尿液的pH值至7 , 9.结果显示,pH值<6而未校正pH值的尿 . MG含量显着低于校正组.王蕾等亦采用1 mol/LNaOH校正pH值后检测尿B一MG,结论与 石泉相似,同时观察了样本保存时间,温度对B:一 MG检测的影响.本研究显示不校正pH值的冰 冻保存的新鲜随机尿132-MG也不发生降解,而加 PBS的尿样本处于中性环境,B一MG能够稳定保 存.pH值<6的尿样本室温放置2h后的B一MG 含量明显低于新鲜尿,此时加缓冲液校正pH值 已经于事无补,提示B:.MG在酸性环境中的降解 是具有时间依赖性的.本研究显示32-MG在pH 值<6的环境中室温静置2h后降低56.5%,与王 蕾等[2观察到的p.MG在pH值<6的环境中室 温48h后下降49%的结果近似.本研究32例患 者中全部是慢性肾病患者,而肾小管近曲小管功能 障碍常常造成Hco;排泄增加,导致尿液的pH值 降低.因此,校正pH值对肾病患者的尿B.MG测 定非常必要.本研究应用pH值为7.0的PBS缓 冲液纠正pH值,避免了强碱加入后可能造成瞬间 局部的碱性过强,使部分蛋白沉淀变性.PBS校正 后的尿pH值一致,保持了实验的均一性,也不会 因为纠正过度造成pH值过高,抑制抗原抗体反 应.其缺点是稀释可能会造成正常或轻度增高的 尿8一MG结果计算上的误差. 本研究从实际工作的角度设计实验:考虑 到临床实验室中常备的是广范围pH值试纸,目测 精度较低,因此将是否需要校正pH值的定为 6.本研究的尿样本从离体到送达实验室大约需用 2h,此过程可以认为是在室温的条件下进行的,所 以只将尿pH值,室温,放置2h作为实验影响因素 进行比较.同时因为本实验室的尿p-MG检测每 周进行1次,故1周内收集的样本量不足以对pH 值>6的尿.MG进行统计分析. 参考文献 [1】王蕾,庄亦晖,高锋.血清视黄醇结合蛋白在 肾脏疾病中的应用[J].检验医学,2004,19(2): 89-92. [2]王蕾,刘华,符玉瑛,等.尿液贮存温度,时间 及pH值对尿半胱氨酸蛋白酶抑制剂C稳定性的影 响[J].检验医学,2005,20(3):224-226. [3]黄然欣,李晓林,黄晓春,等.非霍奇金淋巴瘤血 清乳酸脱氢酶和B2微球蛋白水平及其临床意义 [J].中国现代医学杂志,2008,l8(1O):1357— 1359. [4]石泉,徐兆芳,宁芬,等.尿液pH值对0【.-微球 蛋白,B.微球蛋白测定的影响[J].淮海医药, 2007,25(5):434435. (收稿日期:2009-06—15) (本文编辑:龚晓霖)