链球菌感染猴肠道菌群分子解析及呼吸等系统免疫功能影响.doc

链球菌感染猴肠道菌群分子解析及呼吸等系统免疫功能影响.doc 链球菌感染猴肠道菌群分子解析及呼吸等系统免疫功能影响 -->1肺炎链球菌研究进展 1.1肺炎链球菌致病机理 肺炎链球菌是一种条件致病菌,常定植于健康携带者的鼻咽部,40%~50%健康人群及动物可携带,当机体存在全身或局部的病毒感染、局部點膜免疫降低、先天或后天获得性免疫缺陷时就会引起人和动物的侵袭性肺炎链球菌病?。肺炎链球菌在机体抵抗力减弱时将透过點膜防御体系,从點附部位下行至肺或者进入血液引起细菌性肺炎,以及中耳炎、败血症、脑膜炎等相关疾病[2],该菌是引起社会或得性肺炎(CAP)的主要病菌。老年人和儿童是该菌的易染者,具有免疫缺陷尤其是B细胞缺陷或者补体途径受阻以及无脾等患者的易感率更高[3]。据细胞(Microfoldcells).肠上皮细胞和巨睡细胞,这些细胞呈弥散性分布,主要负责摄.取和转运抗原,它们的功能决定了點膜免疫的效率;效应部位的免疫细胞主要包括固有层淋巴细胞和上皮内淋巴细胞,传递来的抗原在此被激活而产生抗体和各种免疫因子PP结是肠道相关淋巴组织(GALT)内产生特异性免疫应答的初发区之一PP淋巴集结含有B细胞淋巴滤泡和T细胞依赖区,在滤泡面覆盖有一层滤泡上皮,主要包括微皱裙细胞、肠上皮细胞和淋巴细胞等组成。肠上皮细胞除了已知的屏障功能、调节點膜免疫细胞的发生、分化以及增值功能外,近来研究还发现它也参与了免疫耐受[69]。 .......... 第三章SYBR GREEN 实时荧光定量PCR对肺炎链球菌感染猕猴.........66 前言.........66 1材料与方法.........67 2曲线的制备.........75 3实时荧光定量PCR (FQ-PCR)对猕猴消化道内菌群的定量检测.........79 第四章感染肺炎链球菌猕猴呼吸系统内slgA、IL-2、IL-6蛋白的表达.........90 1实验试剂与伩器设备.........91 2实验动物.........91 3取材.........91 4小结.........100 第五章感染肺炎链球菌猕猴IL-6、IL-2、slgA、IFNt以及CD3在消化系统的表达.........101 1材购方法.........102 2结果.........103 3讨论v118 6感染肺炎链球菌挪猴免疫系统内IgA、IFN-y> C -->D3、IL-2、IL-6 表达 动物感染肺炎链球菌后不单单是靴器官会发生病变,其相关的免疫器官也会出现一系列的变化,通过免疫组织化学技术观察肺炎链球菌感染称猴免疫系统脾脏及淋巴结内细胞因子IgA、IFN-y、CD3、IL-2、IL-6蛋白的表达情况来探讨称猴患该病后所启动的免疫机制及所处的免疫阶段,为临床上用药提供更加准确的定位和依据,使人们对肺炎链球菌肺炎有更进一步的了解。脾脏、淋巴结属于外周免疫器官,它们是T细胞、B细胞定居和对抗原刺激进行免疫应答的场所,富含捕获抗原,并为处理后的抗原与免疫活性细胞的接触创造最大的机会,这些器官和中枢免疫器官不同,它们起源于胚胎晚期的中胚层。人体全身有500-600个淋巴结(lymphnode),遍布于淋巴循环径路的各个部位,以便捕获从身体外部进入血液一淋巴液的抗原。它是T细胞和B细胞主要定居的场所,其中T细胞约占淋巴结内部淋巴细胞总数的75%,B细胞约占25%。M(p或DC等抗原处理及提呈细胞在周围组织中摄取抗原后可迁移至淋巴结,并将加工、处理的抗原肽提呈给T细胞,使其活化、增殖、分化为效应T细胞。淋巴结中的B细胞可识别和结合游离的或被滤泡树突状细胞(FDC)捕获的抗原,通过T-B细胞的协同作用,B细胞增殖、分化为衆细胞,并分泌抗体。效应T细胞除在淋巴结内发挥免疫效应外,更主要的是与抗体一样,随输出淋巴管。经胸导管进入血流,再分布至全身,发挥免疫应答效应。故淋巴结是发生免疫应答的主要场所之一。脾脏是体内最大的免疫器官,具有造血和免疫双重。 ......... 结论 1、从心、肝、脾、肺组织及血液中分离到草绿色溶血菌株,经过胆汁溶菌实验、optochin实验、小鼠毒力实验,结果表明本分离株为肺炎链球菌强毒株;16S rRNA序列分析表明与肺炎链球菌同源性高达99%以上。病理组织学观察到淋巴结、脾脏、肺脏、气管、肝脏、胃肠道均出现了与肺炎链球菌相关的典型组织病理学变化。2、建立 了称猴肠道菌群的PCR-DGGE分析技术,表明DGGE技术能较好的反应肠道菌群变化情况,健康称猴肠道菌群结构稳定,肺炎链球菌感染称猴肠道菌群多样性、丰富度和均匀度均显著降低(P<0.05)。3、釆用SYBRGreen I实时定量PCR检测了称猴消化道中6个菌属,包括双歧杆菌、乳轩菌、拟杆菌、大肠杆菌、肠球菌和芽孢杆菌属的含量情况,均为秘猴肠道中优势菌群,且其中双歧杆菌和乳杆菌含量最高,各个菌属在盲肠、结肠和直肠中含量高于肠道前段。肺炎链球菌感染后称猴肠道优势菌群发生了较大变化,除大肠杆菌数量有所增加外,其它几个菌属拷贝数均下降,表现为差异显著或不显著,称猴感染肺炎链球菌和肠道菌群变化之间关系密切。 .........