【word】 红阳猕猴桃和葛根配方的解酒保肝与抗氧化作用研究

【word】 红阳猕猴桃和葛根配方的解酒保肝与抗氧化作用研究 红阳猕猴桃和葛根配方的解酒保肝与抗氧 化作用研究 红阳猕猴桃和葛根配方的解酒保肝与抗氧化作用研究 王岚,杨薇,张磊2,宁华,程祖强 (1.~tJII省自然资源科学研究院,四川成都610015;2.四川省中医药科学院,四川成都610041) 摘要:研究红阳猕猴桃,葛根及其配方组合物的解酒保肝与抗氧化作用.采用乙醇所致小鼠自主活动减少和小鼠共济失调实 验评价解酒作用;采用小鼠酒精性肝损伤模型评价保肝作用,采用ELISA测定大鼠尿液中8一羟基脱氧鸟苷酸(8一hydmxy一2一 deoxyguanosine,8一OHdG)和乙酰一赖氨酸加合物(hexanoyl—lysineadduct,HEL),以了解配方组合物对DNA过氧化和脂质过氧化的影 响.结果明,红阳猕猴桃一葛根配方可减轻酒精所致小鼠行为抑制和共济失调,提示具有解酒作用;对酒精所致小鼠肝脏MDA, ,I水平升高和GSH水平降低有明显改善,提示具有保护化学性肝损伤作用;降低正常和酒精损伤大鼠尿液中过氧化生物标志物水 平,提示具有较好的抗氧化作用.红阳猕猴桃一葛根配方具有快速解 -4h;对酒精性肝损伤有一定的保护作用, 酒作用,且可持续2一 其机制与抗氧化有关. 关键词:猕猴桃;葛根;氧化;保肝;解酒 中图分类号:R918文献标志码:A文章编 号:1005—8141(2o12)04—0297—03 oxidationf StudyofOispemagAlcoholSEffects,ProtectiveLiverandAnti— rom RecipeofHongyangKiwifruitandRad/xPuerar/ae WANGtan,YANGWei2,ZHANGLei2,NINGHuaI,CHENGZu—qian (1.SichuanAcademyofNaturalResourcesSciences,Chengdu610015,China; 2.SichuanAcademyofChineseMedicineSciences,C}lenu610041,China) Abstract:ThispaperstudiedtheeffectsofdispellingalcoholSeffects,protectivehverandanti—oxidationfromHongyangKiwifruit,Rad/xPuer— ar/aeandtherecipe.DispellingalcoholSeffectswereevaluatedbytheexperimentsofautonomicactivitiesreductionandataxiainmiceinducedbyal- cohol,evaluatedtheeffectofprotectivehverthroughmodelsofalcoho~cliverinjurywithmice.TheinfluencesofDNAperoxidationandlipidpemxida. tionfromrecipeofHongyangKiwifruitandRad/xPuerankrew_erestudiedbydetermining8一hydroxy一2一deoxyguanosine(8一OHdG)andhexanoyl — lysineadduet(HEL)inratsurineadoptedthemethodofELISA.nleresultsalsoshowedthattherecipeofHongyangKiwifruitandRad/xPuerar/ae couldalleviatebehavioralinhibitionandataxiainmice,evidentlyimproveasc endingleveLsofMDAandTGanddeducinglevelofGSHinmiceaver, andreducethelevelsof8一OHdGandHELinratsurine.TheresultsshowedthattherecipeofHongyangKi wifi~tandRad/xPuerar/aehadthe oxidation,disp effectsofdispellingalcoholseffects,protectiveliveandanti— ellingalcoholseffectsofwhichcouldcontinue2—4hours,protecting liverseffectsofwhichrelatedtoanti—oxidation. Keywords:Kiwifmit;Rad/xPuerar/ae;oxidation;pmtecfiveliver;dispelling alcoholseffects 无论是急性过量饮酒或长期嗜酒所致酒精中毒均 可导致肝损伤,久而久之可形成脂肪肝,肝硬化乃至肝 癌,是临床常见的致死因素.猕猴桃富含多种维生素 和有机酸,氨基酸等,文献报道有一定的保肝作用.我 们的前期研究也显示,直接给予红阳猕猴桃汁灌喂小 鼠可在一定程度上降低酒精性肝损伤小鼠的谷丙转氨 酶(alaninetra/1salTlinase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AsT)水平,也可改善小鼠的平衡能力, 但作用较弱.鉴于此,我们制备了红阳猕猴桃浓缩汁, 并与葛根提取物组合,以期获得更有效的保肝解酒配 方.本研究将评价该组合物的保肝解酒药效,并以尿 液中8—0hdG,HEL两种过氧化生物标志物为指标评 收稿13期:2012—02—19;修订日期:2012—03—14 基金项目:四川省科技厅支撑项目(编号:20~SZ0129). 第一作者简介:王岚(1972一),女,吉林省四平人,医学博士,从事 疾病动物模型与中药复方药理研究. 价其抗氧化作用. 1实验材料 1.1实验动物 昆明种小鼠,雄性,2o__22g;SD大鼠,雄性,2o0— 240g.均为SPF级,四川省中医药科学院动物室提供, 实验动物生产许可证号分别为SC)(K(川)2005—19号, SCxK(川)20o8—100号. 1.2药物与试剂 红阳猕猴桃浓缩汁(缩写为HYA,1:4浓缩,批号: 20091023);葛根提取物(缩写为LKC,批号:20100105, 临虏应用以0.5%CMC配制为50mg/mi);猕猴桃一葛 根配方(配方液由每lmL红阳猕猴桃浓缩汁加入50mg 葛根提取物组成).以上样品均由四川省中医药科学 院提供.试剂为乙醇(批号:20090727,成都长联化工 试剂有限公司),甘油三酯(Triglyceride,TG)测定试剂 ? 297? 盒(批号20100410,中生北控生物科技股份有限公司), 总蛋白测定试剂盒(批号201004203),还原型谷胱甘肽 (reducedglutathione,GSH)测定试剂盒(批号: 20100426),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)测定试剂盒 (批号20100403,南京建成生物工程研究所),8一OHdG 和HELELISA试剂盒(日本). 1.3实验仪器 仪器为Uv一730分光光度计(岛津,13本),酶标 仪(DiareaderELX800G,Dialab,奥地利),ZZ一6小鼠自 主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司). 2实验 2.1对乙醇所致小鼠自主活动减少的影响 取小鼠84只,预先以小动物自主活动测定仪测定 其5min内自主活动次数,按活动次数分层随机均分为 7组,分别为空白对照组,模型对照组,HYA组,LKC 组,HYA—LKC组(含3个剂量组),见表1.次日进行 试验,灌胃相应受试物或蒸馏水,30min后除空白对照 组外均按20mL/kg灌胃30%乙醇,20rain后再次给药; 灌胃乙醇后0.5h,lh,1.5h,2h,4h,6h分别测定5min内 自主活动次数. 2.2对乙醇所致小鼠共济失调的影响 预先以转棒式疲劳仪进行筛选小鼠,获得3min内 不跌落的合格动物有280只;然后按体重分层随机分 组,组别和灌胃受试物,乙醇的剂量和时间均同2.1; 仪测定其平衡能力,转速15rpm,指标为3min内跌落或 不跌落. 2.3对小鼠酒精性肝损伤的影响 驯,鼠84只,按体重分层随机均分为7组,同 2.1.每天灌胃相应受试物或蒸馏水,连续30d;第 31d,除空白对照组外均按12mL/kg灌胃50%乙醇以形 成酒精性肝损伤,同时禁食;16h后处死动物,取同部 位肝组织,称重后按1:20(/,,)加入生理盐水,冰浴 中匀浆,4~C/3000rpm冷冻离心10min,取上清液一60~C 冻存备用.按照对化学性肝损伤有辅助保护功能的保 健食品功能评价的相关要求,测定样品中总蛋白和 MDA(荧光法),GSH(分光光度法),TG(甘油磷酸氧化 酶法)含量. 2.4肝损伤大鼠尿液中过氧化生物标志物的影响 取大鼠40只,按体重分层随机均分为5组,分别 为空白对照组,模型对照组,HYA组,LKC组,HYA— LKC组,见表2.每天灌胃相应的受试物或蒸馏水,连 续40d;第32天时,除空白对照组外均按12mL/kg灌胃 50%乙醇以形成酒精性肝损伤.在此过程中以代i身}笼 收集4个时间点的尿液,包括药前和首次给药后第31 天,39天.每次收集2h尿液,3000rpm离心20min后取 上清液一60cI=冻存,ELISA测定8一OHdG和HEL含 量. 2.5统计方法 将上述结果中的计量资料进行单因素方差, 灌胃乙醇后0.5h,lh,1.5h,2h,4h分别以转棒式疲劳计数资料进行检验. 表1猕猴桃和葛根提取物对小鼠自主活动的影响(.4-s.n=12} 注:与同时间模型对照组比较,*P<0.05,**P<O.O1. 表2猕猴桃和葛根提取物对小鼠自主活动的影响(4-S.n=40) 注:与同时间模型对照组比较,*P<O.05,*P<O.01. 3实验结果 3.1对乙醇所致小鼠自主活动减少的影响 ? 298? 结果见表I.灌胃乙醇后,小鼠可出现明显的自 主活动受到抑制,并一直持续6h.红阳猕猴桃浓缩汁 可在0.5h时增加自主活动,葛根提取物的作用则在 1—1.5h显示,此后时间未见明显影响;猕猴桃一葛根 配方各剂量在0.5h即可明显促进小鼠的自主活动,作 用时间持续2—4h. 3.2对乙醇所致小鼠共济失调的影响 „ 结果见表2.灌胃乙醇后,小鼠可出现明显的共 济失调,表现为易于从转动棒上跌落,该作用可一直持 续4h.红阳猕猴桃浓缩汁可在0.5h时降低跌落率, 葛根提取物有作用趋势,但无统计学差异;猕猴桃一葛 根配方各剂量在O.5h即可明显降低跌落率,作用时间 持续2一-4h. 表3猕猴桃和葛根提取物对小鼠酒精性肝损伤的影响(?s.n=12) 删(MDA(mol/mg)GSn(mCs)~moVL) 注:与模型对照组比较,P<O.05,*P<0.01. 3.3对小鼠酒精性肝损伤的影响 结果见表3.灌胃乙醇后,肝组织中GSH含量降 低,MDA,TG含量增高.单独给予葛根提取物或红阳 猕猴桃浓缩汁对上述指标均有一定程度改善,但无统 计学差异;较大剂量的红阳猕猴桃一葛根配方则可使 MDA含量显着降低,GSH含量显着增加. 3.4肝损伤大鼠尿液中过氧化生物标志物的影响 结果见表4.3种样品对正常和酒精性肝损伤大 鼠尿液中8一OHdG水平均有不同程度的降低,但葛根 提取物对正常大鼠的影响无统计学差异;对肝损伤大 鼠HEL也有一定影响,但作用较弱,仅猕猴桃一葛根 配方显示统计学差异. 表4猕猴桃和葛根提取物对酒精性肝损伤大鼠尿液中过氧化生物标志物的影响(?S,n=8) 注:与同时间模型对照组比较.P<O.?,**P<O.O1. 4讨论 由于文化,历史或个人嗜好等原因,完全消除不良 饮酒习惯尚需要整个社会的长期努力.在此情况下, 从医药保健角度降低饮酒带来的健康损害有其实际应 用价值.目前的植物药解酒制剂大致包括两种类型, 一 类是以五加科植物为代表的乙醇吸收抑制剂,另一 类则是以葛根,葛花为代表的肝脏代谢促进剂,后者因 其兼具保肝作用而更受重视.葛根用于解酒有长期的 临床积累,金?张从正《儒门事亲》中即收载有解酒名方 “葛根散”.现代药理研究表明,它对酒精的吸收和代 谢均有影响,可经由抗氧化,保肝,保护中枢神经系统 等途径发挥解酒作用[,.红阳猕猴桃属于猕猴桃科 中华猕猴桃(ActinidiachinensisPlanch)品种,中华猕猴 桃果汁具有保肝,抗氧化等作用L3J,含有大量维生素, 如B族维生素和维生素c等均可提高肝脏对酒精的 代谢速率.我们的前期研究显示,猕猴桃汁具有一定 的解酒作用,但其作用时间较短,且强度有限;葛根提 取物的药效则可持续较长时间,但起效速率不如猕猴 桃汁. 本研究表明,采用红阳猕猴桃浓缩汁和葛根提取 物组成配方,其即时效果可改善酒精中毒所致的活动 抑制和共济失调,起效较快,且呈一定的剂量依赖;远 期效果则可表现为对肝脏的保护,降低肝脏组织中 MDA和TG水平,提高GSH水平. 由于酒精中毒将对机体组织造成明显的过氧化损 伤,而已有报道猕猴桃可明显改善过氧化损伤[4,5】. 我们进一步跟踪了酒精中毒大鼠尿液中两种过氧化生 物标志物的变化,其中8一OHdG是DNA氧化损伤的 特异产物,而HEL则常可表征脂质过氧化水平.结果 显示,持续30d灌胃猕猴桃一葛根配方不但可降低酒 精中毒大鼠的过氧化损伤,而且对正常动物的DNA损 伤也有一定的保护作用. 综上所述,猕猴桃一葛根配方具有快速解酒作用, 且可持续时间长达2__4h,对酒精所致肝脏损伤也有 明显的保护作用,其机制与其较强的抗氧化作用有关, 有望开发为一种减轻化学性肝损伤的保健食品. 参考文献: [1]张蓉蓉,吴大正.野葛解酒机制的研究进展[J].上海中医药大学学 报,2OO7,21(2):80—83. [2]王煜,周吉银,周世文.含葛根解酒方剂的机制研究进展[J].中国药 房,20O7,18(18):1824—1826. [3]吴玉.猕猴桃研究概况[J].上海医药,2010,31(4):122—124. 14j1wasawaH.MoritaE,YuiS.eta1.Anti—o~ddantEffects0fKiwiFruitinV it— mandinVivo[J].Biological&PharmaceuticalBulletin,2011,34(1):128— 134. 15]1wasawaH.MmitaE,UedaH,d.InfluenceofKiwiFruitOnImmunityand ItsAnti—o:ddantEffectsinMice[JJ.FoodScienceandTechnologyRe— search,2010,16(2):135—142. ? 299?