咳平胶囊质量标准的研究

咳平胶囊质量的研究 时珍国医国药2006年第17卷第12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL?17NO.12 咳平胶囊质量标准的研究 张晓玲,段金廒,钱大玮,沈红 (1.江苏大学药学院,江苏镇江212013;2.南京中医药大学,江苏南京210029; 3.江苏省中医药研究院,江苏南京210028) 摘要:目的建立咳平胶囊的质量控制标准.方法采用薄层色谱法(TLC)对制剂中黄 芩和柴胡进行定性鉴别;用高效 液相色谱法测定柴胡皂苷a,柴胡皂苷d的含量.结果黄芩,柴胡供试品与对照品色 谱相应位置上均有相同颜色的斑 点.阴性对照品无干扰.柴胡皂苷a在0.420,8.4Og范围内呈良好的线性关 系,r=0.9996,平均回收率为99.74%, RSD为2.95%;柴胡皂苷d在0.99219.84txg范围内呈起好的线性关系,r=0.9994,平 均回收率为99.83%,RSD为 2.81%.结论该方法简便,快速,准确,可作为该制荆质量控制方法. 关键词:薄层色谱法;高效液相色谱法;黄芩苷;柴胡皂苷a;柴胡皂苷d 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2006)12—2440-02 StudyonQualityStandardsofKepingCapsules ZHANGXiao-ling,DUANJin—ao,QIANDa—wei,SHENHong (1.SchoolofPharmacy,JiangsuUniversity,Zhenjiang212013,China;2.NanjingUniversity ofTCM,ng 210029,China;3.JiangsuAcademyofTCM,Nang210028,China) Abstract:ObjectiveToestablishthequalitycontrolmethodforKepingcapsules.MethodsSc utellariarootandBuplearumroot wereidentifiedbyTLC,andthecontentofssaandssdinBupleurumrootweredeterminedbyH PLC.ResultsThedeterminationof ssashowedagoodlinearrelationshipatarangeof0.420,8.4Og,r=0.9996,theaveragerecoveriesofssawas99.74%,RSD waS2.95%.Thedeterminationofssdshowedagoodlinearrelationshipatarangeof0.992,19.84g,r=0.9994,theaver— agerecoveriesofssdwas99.83%.RSDwas2.81%.ConclusionThemethodissimple,fastand accurate.Itcanbeusedto controlthequalityofKepingcapsules. Keywords:TLC;HPLC:Baicalin;ssa;ssd 咳平胶囊为新研发的中药制刺产品,主要由黄芩,柴胡等药 材组成.全方具有止咳化痰,清热解毒之功效,主治呼吸系统感 染性疾病.根据祖国传统中医药理论及方解,在本方中黄芩为君 药,柴胡为臣药.为r控制陵制剂的内在质量,对制剂中柴胡皂 苷a,柴胡皂苷d进行了含量测定,建立了其含最测定方法,并对 制剂中黄芩苷,柴胡皂苷d进行了薄层色培鉴别. 1仪器与试药 Waters一2695型液相色谱仪(四元泵系统,自动进样,在线脱 气系统),Alheeh.2000型蒸发光散射检测器,Empower色谱工作 站,空气压缩机(北京,中兴汇利);CAMAG自动点样仪;CAMAG 薄层板加热仪;Millipore.Q纯水器;梅特勒卜万分之一电子 天平. 黄芩苷(批号0751-9909),柴胡皂苷a(批号110777-2004), 柴胡皂苷d(批号110778—200301)对照品由中国药品生物制品检 定所提供. 甲醇:色谱纯,冰醋酸:分析纯,超纯水:自制. 2方法与结果 2.1鉴别 2.1.1黄芩的薄层鉴别…取本品内容物约1,0g,加人醋酸乙 酯一甲醇(3:1)混合溶液3Oml,加热回流30min,放冷,滤过,滤 液蒸于,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液.另取黄芩苷对照品 制成0.5me,/ml的溶液,作为对照品溶液.Ff按处方比例取方中 收稿日期:2006-0515;修订日期:2006-08-28 基金项目:江苏省科学技术厅自然基金资助项目(No.BK2004003) 作者简介:张晓玲(1977一),士(汉族).宁夏人,现为江苏大学药学院在读 研究生,硕士学位,主要从事中药新药开发工作. ? 2440? 除黄芩以外的药材,按制备缺黄苓的阴性样品,同样品处理 方法制得阴性对照品溶液.照薄层色谱法实验,吸取上述3种溶 液各10l,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯一醋酸乙酯一甲醇一 甲酸(7:3:2:2)为展开剂,预饱和30min,展开,取出,晾干,置 365nm紫外灯下俭测.供试品色游中,在与对照品色谱相应的 位置[:,显相刚的暗色斑点,且阴性对照品J兀干扰.结果见图l. 2.1.2柴胡的薄层鉴别取本品内容物约2g,加入甲醇100 mJ,超卢提取30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣用水饱和正丁醇 2()ml溶解,加等体积氨试液,振摇,静置分层,分取正丁醇层,水 浴蒸下,残渣以甲醇溶解,作为供试品溶液.另取柴胡皂苷d对 照品制成0.5mg/ml的溶液,作为对照品溶液.再按处方比例取 方中除柴胡以外的药材,按工艺制备缺柴胡的阴性样品,同样品 处理方法制得阴性对照品溶液.照薄层色谱法实验,吸取上述3 种溶液各lOl,分别点于一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯一乙 醇一水(1O:2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨 基苯甲醛的40%硫酸溶液,在6O?加热至斑点显色清晰,置365 nm紫外灯下检测.供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置 卜,相同的亮黄色荧光斑点,且阴性对照品无干扰.结果见 图2.. 2.2含量测定 2.2.1色谱条件及系统适应性色谱柱:菲罗门Phenomenex, Cl8性(4.6mm×250mm,5m),柱温:35?,流动相:0.4%冰醋 酸溶液一乙腈一甲醇(45:15:40),流速:1,0ml/min,ELSD检 测器漂移管温度:105~C,气体流速:2,8L/min.理论塔板数按 ssa,ssd峰计算应不低于2000.在此条件下ssa,ssd与相邻峰达 到基线分离.结果见图3. 2.2.2对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的ssa, LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL. 17NO.12时珍国医国药2006年第17卷第l2期 ssd对照品适量,制成浓度为0.210,0.496mg/ml的对照品溶液. 临用前取等量的两溶液混合,混合溶液中ssa,ssd的浓度分别为 0.105,0.248mg/ml. 2.2.3线性关系取2.2.2项下的ssa(0.210mg/m1),ssd (0.496mm1)X~照品溶液,分别进样2,5,lO,2O,30,401a,1,按上 述HPLC色谱条件测定.以进样量常用对数为横坐标,峰面积常 用对数为纵坐标,绘制标准曲线.得ssa的回归方程为:y= 5.212997X+1.282311,r=0.9996,ssa进样量在0.420—8.40 g问呈良好的线性关系;得ssd的回归方程为:Y=5.185335X +1.280344,r=0.9994,ssd进样量在0.992—19.84g问呈良 好的线性关系. l,2,5-咳平脞囊供品3.战岑计照4一阴性对照品 图】黄芩的薄层层析鉴别 l,2,4一咳脞赴供试I1fI1-,,(H.I^5-阴性对照品 图2柴胡的薄层层析鉴别 t/mIn/rainr/rain 图3柴胡皂苷a,柴胡皂苷dHP[C色谱图 2.2.4精密度实验取ssa(0.105mg/m1),ssd(0.248mg/m1) 的混合对照品溶液以上述HPLC色谱条件测定,连续进样6次. 进样量2Ol,测定各峰面积,计算ssa的RSD为2.16%,ssd的 RSD为1.73%. 2.2.5供试品溶液的制备取本品内容物1.0g,加5%氨水一 甲醇溶液25ml,称重,回流提取30min,溶媒补足重量,3600r/ min离心,取上清液lOml,水浴蒸干,加甲醇溶解定容至1Oml, 以0.45Ixm微孔滤膜滤过,即得. 2.2.6稳定性实验按2.2.5项下制得的供试液,在室温放置 0,2,4,6,8h后分别进样,以上述色谱条件测定,计算峰面积值. SSa的RSD为2.80%,ssd的RSD为2.80%.结果显示,供试液 在8h内稳定. 2.2.7重复性实验取同一批样品,按2.2.5项下制备供试液 6份,依法测定.制剂中柴胡皂苷a含量为0.47%,RSD为 2.19%;柴胡皂苷d含景为1.36%,RSD为2.71%.结果屁示, 本方法重现性良好. 2.2.8加样回收率实验取0.5g胶囊内容物,精密称定,加入 一 定量$sa,ssd?昆合对照品溶液,按2.2.5项下制备供试品溶液 5份,依法测定.ssa平均回收率为99.74%,RSD为2.95%;ssd 平均回收率为99.83%,RSD为2.8l%.结果见l. 表1加样回收率实验结果 序取样量拯准昌打』?量g型堡量g.旦蝗壅(墅2 号m/gssassdssassdSSassd l 4 平均(%) 兄Df%1 0.4956 0.5124 O.5l28 04989 05099 9735 lO2.35 10l88 9626 lO1.33 99.83 28l 2.2.9样品含量测定结果取3批样品,按2.2.5项下方法制 备供试品溶液,依法测定,计算样品含量.结果见表2. 表2样品中柴胡皂苷a,柴胡皂苷d含量测定结果 3讨论 3.1HPLC法测定柴胡中三萜皂苷类成分的含量,结果准确可 靠,快速灵敏,重现性好.柴胡皂苷a,柴胡皂苷d均属三萜皂苷 类,结构相似,在植物中多同时存在,用薄层及比包法分离测定, 容易产生干扰,建立HPLC法测定其含量,应用蒸发光散射检测 器,可消除末端吸收的影响. 3.2在最佳溶媒的优化实验中,我们选择了甲醇,80%甲醇, 5%氨水一甲醇作为提取溶媒,在选定的色谱条件下,测定ssa, ssd含量分别为0.471%,1.316%,0.406%,0.887%,0.587%, 1.782%.发现以5%氨水一甲醇为溶媒测得的柴胡皂苷a,柴胡 皂苷d含最均最高,故选择其为最佳提取溶剂. 3.3比较考察了超卢和回流不同的提取方法,在选定的色谱 条件下,测定ssa,ssd含量分别为0.397%,1.193%,0.415%, 1,317%,发现回流提取效果较好,故选择同流为提取方法. 参考文献: [1]国家药典委员会中国药典.I部[S].北京:化学工业出版社. 2005:198. [2]葛新.感冒清热颗粒薄层鉴别研究[J]实用中西医结合临床, 2005.5(1):67 - 244】- 舵?卯昕 %m卯叭 O0O00咖铷伽 33323 OO00O 卯?? 47757 55555 O0OO0 O0OO0 22222 44444 66666 88888 0O00O 77777 22222 33333