吸烟对肺功能和外周血T淋巴细胞IL-2mRNA的影响

吸烟对肺功能和外周血T淋巴细胞IL-2mRNA的影响 吸烟对肺功能和外周血T淋巴细胞 IL-2mRNA的影响 ? 304?I缶床内科杂志2007年5月第24卷第5期JClinInternMed.May2007,Vo1.24.No.5 吸烟对肺功能和外周血T淋巴细胞IL一2mRNA 的影响 陈宏斌徐永健谢俊刚 [中图分类号】R542.22[文献标识码]A[文章编号]1001-9057(2007)05-0304-03 [摘要]目的探讨吸烟对健康人肺功能和外周血T细胞IL-2mRNA表达的影响.随 机选择健康吸烟者和非吸烟者各24名,检测肺功能指标和外周血T淋巴细胞中IL-2mRNA表达. 结果吸烟组中FEV,FEV1/FVC%MMEF7较对照组有明显下降(P<0.05);吸烟组中 IL-2mRNA较对照组有显着性增高(P<0.05).肺功能中FEV1/FVC%随IL-2mRNA的表达水平增 加呈降低趋势(r=一0.758,P<0.05).结论吸烟者在尚无临床症状时,肺功能已经受损.吸烟 可能通过增加T淋巴细胞IL-2mRNA的表达促进炎症反应导致肺功能损害. [关键词]吸烟;肺功能;T淋巴细胞;IL-2mRNA EffectofsmoldngOnpnlmollaryfunctionandtheexpressionofIL-2mRNAinhumanperiphe ral bloodTlymphocytesCHENHongbin,XUYon~ian,XIEJungang.DepartmentofRespirator yMedi? cine,Tonsffihospitalron~iMedicalcollege,HuazhongScienceandTechnologyUnivers,W uhan 430030,China [Abstract]ObjectiveToexploretheeffectofsmokingonpulmonaryfunctionandIL-2mRNAin humanperipheralbloodTlymphocytes.MethodsWerandomlyselected24healthysmokersassmoking groupand24healthynonsmokers鹊 controlgroup.Todetectedtheirpulmonaryfunctionbyportablespi? romctcrsandtheexpressionoftheIL-2mRNAinTlymphocytesweredeterminedbyreversetranscription polymerasechainreaction(RT-PCR).ResultsTheFI? l,FEV1/FVC%andMMEF75/insmoking grouphadsign/ficantlydecreasedcomparedwithcontrolgroup(n=24,P<O.05);theexpressionoftheIL? 2mRNAinTlymphocytesfromsmokinggrouphadsignificantlyincreasedcomparedwithcontrolgroup(n =24,P<0.05).ThepulmonaryfunctionhadstronglynegativecorrelationwiththeexpressionlevelofIL- 2mRNA(r=一 0.785,n=24,P<0.05).ConclusionAlthoughsmokersdidnotshowclinicalsyrup- tortm,theirpuLmonaryfunctionhadbeenreduced;Itissuggestedthatsmokingmayincreasedlunginilam- matoryresponsebyinducingtheexpressionlevelofIL-2mRNA. [Keywords]Smoking;Pulmonaryfunction;Tlymphoeyte;IL-2mRNA 吸烟是慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生的危险因 素….大量的研究表明,在COPD患者的气道,肺实质 和肺血管中均存在着慢性炎症,T淋巴细胞及其分泌 的细胞因子等参与炎症过程,但其确切机制尚不清楚. 白细胞介素一2(IL-2)是一种有效的T淋巴因子,IL-2 在淋巴细胞发育,激活和维持免疫反应中都发挥着重 要的作用.IL-2在体内既可促进淋巴细胞反应,也可 限制T淋巴细胞反应J.我们通过检测吸烟者外周 血T淋巴细胞IL-2mRNA表达的变化,以及吸烟对肺 功能的影响,探讨吸烟对肺组织等损害的可能机制,为 戒烟工作提供理论依据. 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30400194和30570794) 作者单位:430030武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院呼 吸内科 通讯作者:徐永健,Email:yjxu@tjh.tjmu.edu.ca 对象与方法 ? 论着? 1.对象:随机在正常健康人群中选取吸烟者和非吸 烟者,分为两组进行观察.(1)吸烟组:24名,男16名,女 8名,年龄45—58岁,平均年龄49.6岁?8.8岁,吸烟者 吸烟指数为256—896支年,平均365支年.(2)不吸烟 组:24名,男女各12名,年龄39-52岁,平均年龄45.5岁 ?10.5岁.所有受试者最近4周无感染和服药史. 2.方法 (1)肺功能的测定:测定仪器为ScopeRotary便携式 肺功能仪.所有测试均在2005年1O月一12月完成,参 考全国肺功能正常值汇编的技术和方法J.受试者坐 直,头保持自然水平,夹鼻夹,舌头不能堵咬口器,不能漏 气,并避免着装过紧.肺功能测定必须在呼吸波稳定(10 个以上均匀波形),呼吸频率(20?5)次/分钟,仪器提示 可以的情况下方可开始.测试前先让受试者观察并 l缶床内科杂志2007年5月第24卷第5期JClinInternMed,May2007,Vol,24,No.5 模拟测试过程,正式测定中要求至少测定3次,取最佳值 作为参数记录.测定指标:肺活量(vc),用力呼气肺活量 (FVC),用力呼气一秒量(FEV),一秒率(FEV/FVC%), 中段呼气流速(MMEF75/笛). (2)RT—PCR检测IL-2mRNA的表达:淋巴细胞的 分离方法:取受试者外周血4ml,用密度梯度离心法分 离获得单个核细胞,PBS液洗涤2次,用含10%小牛 血清和双抗的RPMI1640(Gibco)完全培养基,调节细 胞浓度为5×10/ml,37oC,5%CO:孵箱培养1小时 后,收集悬浮细胞,尼龙柱法获得T淋巴细胞. (3)IL-2mRNA的RT—PCR检测:将收获的细胞立 即在液氮下研磨,按试剂盒操作提取RNA, RNA纯度,含量以及完整性检测和RT—PCR的操作步 骤均依照文献进行.引物序列,IL.2上游引物-5一 GAATGGAArITI'AATAArITI'ACAAGAATCCC-3,下游引物 5_TC1TrCAGATCCC11_rAGrITI'CCAG一3,扩增片段为 222bp;B—actin上游引物:5一CCrITI?CTGGGTAT GAATCCT一3,下游引物:5一GGAGCAATGATCrIT- GATCIT-3,扩增片段为460bp.扩增条件为94oC1 分钟,60oC1分钟,72oC1分钟,共35个循环.扩增产 物在20g/L琼脂糖凝胶中电泳后紫外灯下拍照,底片经 激光密度扫描.分别测定每一个目的基因和B—actin的 ? 305? 吸光度(A)值,取IL-2mRNA与13-actin吸光度值比值为 IL-2mRNA的相对含量.实验重复三次取其均值. 3统计学处理:数据采用均数?标准差(?s)表 示,组间差异采用完全随机单因素方差分析;两两的比 较采用g检验. 结果 1.不吸烟组与吸烟组肺功能测定比较:见表1. 表1显示,吸烟组的肺功能中FEV,FEV/FVC%, MMEF75/25较对照组有明显下降(n=24,P<0.05),而 VC,FVC无明显差异(n=24,P>0.05). 2.不吸烟组与吸烟组IL-2mRNA的表达:见图1. 将IL-2mRNA的A值与13-actinA值比较后发现,吸烟 组和对照组外周血淋巴细胞IL-2mRNA的表达分别为 0.872?0.078和0.658?0.056,吸烟组较对照组有显 着性增高(n=24,P<0.05). 3.IL-2mRNA表达水平与肺功能中FEV/FVC (%)的相关分析:吸烟组外周血T细胞IL-2mRNA表 达的A值与相应B—actin的A值比较后所得的数据与 吸烟组肺功能中FEV,进行相关分析,发现肺功能中 FEV,随IL-2mRNA的表达水平增加呈降低趋势(r: 一 0.758,P<0.05). 表1对照组与吸烟组肺功能比较(孟?s) 注:与不吸烟组比较,'P<0.05 Marker吸煳组不吸烟组 600bp 500bp 400bp 300bp 200bp 图1IL一2mRNA的RT—PCR的表达情况比较 讨论 吸烟是引起COPD发生的主要环境因素之一,但 多数吸烟者在无临床症状时无法认识吸烟的危险.本 组资料结果显示,吸烟人群与非吸烟者相比,肺容量 VC,FVC变化不明显,但FEV,FEV】/FVC%和MI— NEF明显下降,提示吸烟主要引起肺通气功能和小气 道功能损害.因小气道分枝多,截面积大,气流阻力 小,烟雾易在此处滞留,增加黏膜与有害物质接触的机 会,其黏膜内富有血管吸收力强,对理化刺激较敏感. 烟草烟雾中主要有害物质为焦油,尼古丁等,当吸人呼 吸道后,可引起支气管黏膜充血,水肿,痉挛和分泌物 增多等炎症改变,发生管腔狭窄和阻塞H.同时烟雾 也刺激产生白介素(IL)和肿瘤坏死因子等炎症介质, 破坏肺结构和促进中性粒细胞炎症反应,引起气道,肺 实质和肺血管的慢性炎症J. 白细胞介素是一类由各种白细胞产生的,介导细 胞间相互作用的细胞因子,在免疫细胞的活化,增殖和 分化中起重要调节作用.IL-2是主要由T淋巴细胞分 泌的一种淋巴因子,其主要作用是诱导T淋巴细胞的 增殖和分化,对自然杀伤细胞,单核巨噬细胞的增殖分 化也有促进作用,还能刺激已活化的B细胞的增殖, 分化和抗体分泌,因此IL-2的分泌水平高低可以反映 机体的免疫机能.我们在研究中发现,吸烟组外周血 淋巴细胞中IL-2mRNA的表达增多.研究已经证实, IL-2基因的表达主要受转录水平调控.在静息状态 下,T细胞既不能合成也不能分泌IL-2,但在适当的抗 原和共刺激因子联合刺激或暴露于多克隆配基情况 ? 306?临床内科杂志2007年5月第24卷第5期JClinInternMedMay2007,Vol,24,No.5 下,T细胞中IL.2mRNA水平开始升高,IL-2的分泌也 增多.而IL.2具有很强的生物学功能,在淋巴细胞发 育,激活和免疫维持作用中发挥重要作用.IL一2可激 活多种关键免疫细胞,如Th,CTL,B,NK,TIL和单核 巨噬细胞.已有研究表明吸烟可引起外周血CD4*T 细胞增加J,而且研究发现在健康吸烟者中血清 slL.2R的浓度较非吸烟者的明显增高.因此,我们推 测由于烟雾中有害成分的刺激,外周血CD4*T淋巴细 胞IL.2mRNA的表达增多,从而使IL一2的分泌也增多. IL.2与IL.2R结合后激活c—myc和NF—KB等转录因子 促进外周血T淋巴细胞增殖"J.同时,吸烟引起支 气管炎症反应,产生炎症因子引起增多的T细胞和巨 噬细胞在气道壁等组织的侵润. 参考文献 [1]RachetB,SiemiatyckiJ,AbrahamowiczM,cta1.Aflexiblemodeling approachtoestimatingthecomponenteffectsofsmokingbehavioron lungcancer.JClinEpidemiol,2004.57:1076-1085. [2]LeungDT,MorefleldS,WillerfordDMcta1.Regulationoflymphoidho- meostasisbyIL-2receptorsignalsinvivo.Jlmmunol,2000.164:3527- 3534. [3]陈莉,赵明,韩少梅,等.河北省正常人群肺功能检测分析.中国医 学科学院,2004,4:463-466. [4]丁东杰.吸烟对肺功能的影响及与慢阻肺和肺源性心脏病的关系. 实用肺科杂志,1998,5:1-3. [5]蔡柏蔷.COPD发病机制的新进展,中华内科杂志,2000,3:204-205. [6]KimWD,KimWS,KohY,eta1.AbnormalperipheralbloodT-lympho- cytesubsetsinasubgroupofpatientswithCOPD.Chest,2002,122: 437—444. [7]GladerP,vonWachenfeldtK,Lofdah1.SystemicCD4+T_ceuactivationis correlatedwithFEVlinsmokers.RespirMed,2OO6,100:1088-1093. f81NelsonBH,WilleffordDM,cta1.Biologyoftheinterleukin-2receptor. Advlmmun01.1998.70:1-81. (收稿日期:2007-01-01) (本文编辑:李庆宪) 以顽固性腹水为主要表现的POEMS综合征一例 李慧敏蒋卫民潘孝彰 [中图分类号]R442.5[文献标识码]A[文章编号]10o1_9o57(2007)05-0306-01 [关键词]POEMS综合征;腹水 患者,男性,60岁.因腹胀进行性加重1个月入院.一年 前出现双下肢无力,麻木及水肿.曾确诊为周围神经炎,此次 发病时肌无力加重,并累及双上肢.近1年性欲减退.体格检 查:慢性消耗面容,皮肤巩膜无黄染.右下肺叩诊浊音,呼吸音 低.心脏听诊无异常.腹部膨隆,肝脾触诊不满意,腹水征阳 性.双下肢皮肤粗糙,僵硬,色素沉着,轻度凹陷性水肿,四肢 肌肉萎缩,肌力?级,双膝腱反射减弱,双下肢痛觉减退.辅助 检查:Hb98g/L,ESR25mm/L末,ALB24g/L,BUN16.3 mmol/L,Cr228ttmol/L,4次腹水检查均是渗出液,以淋巴细胞 为主,血清蛋白电泳T32.1%,免疫电泳M蛋白成份IgA.型, IgA6.46g/L,IgM0.64g/L,轻链3.12g/L.骨髓象浆细胞占 9%,胸腹部CT检查提示两肺少许斑片影,双胸腔积液伴右肺 下叶膨胀不全,大量腹水,肝硬化轻度,脾不大.确诊为POEMS 综合征.应用地塞米松,长春地新,环磷酰胺治疗临床症状好 转,现口服强的松维持. 讨论 POEMS综合征是多发性周围神经炎和单克隆浆细胞增生 为主要表现的综合征,POEMS是周围神经病(Polyneuropathy), 器官肥大(Organomegaly),内分泌病(Endoorixopathy),M蛋白 (M.proteins),皮肤改变(Skinchang)几个主要症状英文单词字 作者单位:2663oo山东省胶州市人民医院(李慧敏);上海华山医院 传染科(蒋卫民,潘孝彰) ? 病例报告? 首的缩写,其发病原因和机制目前尚不清楚,一般认为其发病 基础是浆细胞瘤,可伴多发性骨髓瘤,孤立性浆细胞病,巨球蛋 白血症及良性丙种球蛋白血病.故本病可能与M蛋白和浆细 胞分泌的淋巴活素对周围神经系统,内分泌系统,骨骼,网状内 皮组织及免疫造血系统有毒性作用有关.细胞因子可能是本 病的病理生理基础,其中前炎性细胞因子和血管内皮生长因子 的过度生长在致病中可能起重要作用.另Belec等发现本病患 者可以检测到人类疱疹病毒.8(HHV.8)DNA序列和循环抗 HHV.8抗体,提示本病与HHV.8感染可能有关.Nakanishis提 出诊断标准主要依据有以下7个方面:(1)多发性周围神经病; (2)肝,脾淋巴结肿大;(3)内分泌改变;(4)M蛋白血症;(5)全 身性水肿;(6)皮肤改变;(7)视乳头水肿.符合(1),(4)在内 的3项或以上既可确诊.本综合征临床表现多样,以周围神经 炎为最常见(99%),其次为皮肤改变(93.8%),腹水占62%, 以顽固性腹水为突出表现少见.本例患者表现为顽固渗出性 腹水及肝硬化的影像学表现,易与肝源性腹水,结核性腹膜炎, 癌性腹水,淀粉样变性相混淆.本病无特效的治疗方法,应用 免疫抑制剂如糖皮质激素,环磷酰胺,马法兰等可缓解症状,对 伴有孤立性浆细胞瘤进行放疗,手术切除疗效肯定. (收稿日期:2006-12-25) (本文编辑:杨泽平)