纸片法头孢西丁敏感的青霉素耐药葡萄球菌分析（可编辑）

纸片法头孢西丁敏感的青霉素耐药葡萄球菌分析（可编辑） 圭 捡验医 杂志 年 月第 卷第 期 , , , . 临床实验诊断研究 . 纸片法头孢西丁敏感的青霉素 耐药葡萄球菌分析 田月如 王艳艳 陈晓耘 阮斐怡 蒋晓飞 【摘要】 目的 评估不同检测方法对纸片法头孢西丁敏感,苯唑西林耐药葡萄球菌耐药性状的 检测能力,并对非 基因介导苯唑西林耐药的葡萄球菌进行药敏谱分析。方法 收集 年 月年 月问复旦大学附属华山医院就诊患者呼吸道、尿、分泌物和无菌体液标本中分离得到 的 株金黄色葡萄球菌,采用苯唑西林纸片法、苯唑两林 法、头孢西丁纸片法、头孢西丁 法检测金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性:用苯唑西林 法和头孢西丁纸片法检测 株凝固 酶阴性葡萄球菌对苯唑西林的敏感性:将所有葡萄球菌进行 基因检测,结合试验结果分析葡萄 球菌苯唑西林耐药原因,并对非 基因介导的苯唑西林耐药葡萄球菌用 法进行抗菌药敏谱 分析。结果 株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的金黄色葡萄球菌苯唑西林纸片法检测出 株中介, 株耐药;头孢西丁纸片法、头孢西丁 法、苯唑西林 法全敏感、 基因检测全阴 性。 株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的凝固酶阴性葡萄球菌,苯唑西林 法 株敏感, 株耐药; 基因阴性为 株,阳性为 株。 株非 基因介导苯唑西林耐药的葡萄球菌庆 大霉素敏感为 株,克林霉素 株、环丙沙星 株、红霉素 株、甲氧苄啶/磺胺甲嗯唑 株,头孢 菌素类、替考拉宁、万古霉素、哌拉西林/他唑巴坦、四环素 株。结论 金黄色葡萄球菌用头孢两丁 检测 基因介导的苯唑西林耐药,具有很好的可靠性。凝固酶阴性葡萄球菌最好同时使用头孢 西丁纸片法和苯唑西林 法检测 基因介导的苯唑西林耐药,以提高检出率。非 基因介 导的苯唑西林耐药,临床可依据实际药物敏感实验结果选择性使用 内酰胺酶稳定的青霉素、 内酰 胺酶抑制剂复合药、头孢类和碳青霉烯类药物治疗。 【关键词】 葡萄球菌,金黄色; 青霉素抗药性;头孢西丁;纸片扩散抗菌试验,, 一?, ?, ?,? ,., , , : , : . 玑 【 】 ? , ? ? . ? . . . ,. ., , . .? . 出 僦 . , ?? .. ?.: ./ . .. . . 作者单位: 上海,复旦大学附属华医院检验科 通信作者:蒋晓飞,电子信箱:. . ‘。 。’’ ‘ 。??。 ???’ ’ 。? ”??? 。 。 ’ 。 ‘ 。。。。 “?? ‘ ‘ 。’ 略语: ,临床和实验室协会;,最低抑菌浓度;,聚合酶链反应 ..,??....。 ??? .? ..??.. ..“??. . . ??? .,?.? ??. , ?......? ..? .,??..??? ..医学杂志年 月第 卷第 期 ? ? ? ? . . . , . ? ?,. ? ? ? , , , , ,/ , , ,,/ , . ?. ? ? . ,? ?? ? . ?/, . 【 】 ; ;;葡萄球菌是一种引起人类感染性疾病的重要病 株。标准菌株:金黄色葡萄球菌、金黄 色葡萄球菌、金 黄色葡 萄球菌 原菌,实验室检测及药敏试验对临床有极其重要的 指导意义。 颁布的《抗生素药敏试验执行标 购自美国菌种中心。 .试剂与仪器:头孢西丁、青霉素、苯唑西林药 准》推荐以青霉素作为细菌产 内酰胺酶的指示 药,葡萄球菌一旦对青霉素耐药,则对所有青霉素酶 敏纸片购自英国公司。血平板购自上海科玛 不稳定的 内酰胺类抗生素耐药,需要进一步检测 嘉生物有限公司。 琼脂干粉、 肉汤干粉购自 其对苯唑西林的敏感性,如苯唑西林耐药,为耐甲氧 英国公司。庆大霉素 、头孢唑啉 、 西林的葡萄球菌菌株,提示该菌株对所有 内酰胺 头孢呋辛 、克林霉素 、环丙沙星 、 类抗生素耐药,感染需要用万古霉素等高级药物治 苯唑西林 、替考拉宁 、万古霉素 、 疗;如苯唑西林敏感,提示感染可选用酶稳定青霉 红霉素、头孢西丁 、哌拉西林/他唑巴坦 素、 内酰胺酶抑制剂复合药、头孢菌素和碳青霉烯 、青霉素 、甲氧苄啶/磺胺甲曝唑 、 类抗生素治疗。因此,准确检出非耐甲氧西林的葡 四环素 药物均为标准品,购自中国药品生物制 萄球菌有利于合理使用抗菌药物,对减少万古霉素 品检定所。 孔板,购自上海领潮生物有 等药物的使用和减少万古霉素耐药葡萄球菌,具有 限公司。试剂购自大连宝生物 公司。 积极的意义。一抗生素药敏试验执行 引物合成由上海英骏生物有限公司完成。 标准》?推荐首选头孢西丁纸片法检测葡萄球菌对 阳性菌株测序由上海生工生物技术服务 苯唑西林的敏感性。然而我们在日常工作中常常遇 有限公司完成。全自动细菌鉴定仪购自法国 到头孢西丁敏感,苯唑西林耐药的葡萄球菌,这类细 梅里埃公司、培养箱购自上海精宏实验设备有限公 菌并非对所有 内酰胺类抗生素均耐药,为评估这 司、购自美国 公司、 类细菌的数量并探讨它们的耐药性状,我们以复旦 数码凝胶图像分析系统。 大学附属华山医院 年 月至 年 月检出 二、方法 的纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的葡萄球菌为 .头孢西丁敏感青霉素耐药葡萄球菌的确认: 对象,以检测 基因为标准 进行了研究。 将冻存的临床菌株划线接种于血平板复苏, ?孵 育 ? 后,挑取单个菌落进行革兰染色、触酶 与方法 试验、凝固酶试验,并按梅里埃 全自动细菌鉴 一 、 材料 定仪说明书再次鉴定,以明确细菌鉴定结果。按 .菌株来源:收集 年 月至 年 月 要求用纸片法再次检测菌株对头孢西丁和青 复旦大学附属华山医院就诊患者呼吸道、尿、分泌物 霉素的敏感性,以保证细菌药敏试验结果准确可靠, 采用金黄色葡萄球菌为纸片法质控菌 和无菌体液标本共 株纸片法头孢西丁敏感、青 霉素耐药的葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌株, 株,结果在控。 凝固酶阴性的葡萄球菌 株 无路登葡萄球菌 。 .苯唑西林敏感性的检测:本研究根据所有菌株均为上述时间段内连续分离的非重复菌 推荐,采用 种方法检测金黄色葡萄球菌对苯唑西医学基志年 月第 卷第 期, , , . 林的敏感性:苯唑西林纸片法、苯唑西林 法、头 法头孢西丁敏感、青霉素耐药的金黄色葡萄球菌,其 孢西丁纸片法和头孢西丁 法:采用两种方法检 中头孢西丁 法株敏感;苯唑西林纸片法 测凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林的敏感性;苯唑株敏感, 株中介 . % , 株耐药 . % ; 西林 法和头孢西丁纸片法。实验材料、操作严 苯唑西林法株敏感;基因阳性为 格按照年美国临床和实验室标准协会 株。 株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的凝固 一抗生素药敏试验执行标准》及 一 酶阴性葡萄球菌,其中苯唑西林 法 株敏感, 《需氧菌稀释法抗生素药敏试验标准方法》 执行, 株耐药;基 因阴性为 株,阳性为 株, 采用金黄色葡萄球菌为纸片法质控菌基因阳性者均为上述苯唑西林 法耐药菌 株,金黄色葡萄球菌 为 法质控菌 株。各种方法检测纸片法头孢西丁敏感青霉素耐药 株,结果在控。为确保苯唑西林 结果,我们重 葡萄球菌对苯唑西林敏感性比较见表 。 .不同方法检测凝固酶阴性葡萄球菌苯唑西 复试验 次,结果完全相符者才计人苯唑西林 耐药引。 林敏感性结果比较: 株纸片法头孢西丁敏感青霉 . 基因检测:取血平板上 ~ 个新鲜菌 素耐药的凝固酶阴性葡萄球菌头孢西丁抑菌圈直径 落,混悬于 .无菌蒸馏水中, , 均。其中溶血葡萄球菌、腐生葡萄球菌、沃 氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、木糖葡萄球菌苯唑西林 × 离心后取上清作为。反应体法均存在耐药情况,经过 检测,苯唑西林 系为,上游引物: .法耐药的菌株并非全阳性,说明头孢西丁纸片一 ,下游引物 一 一 。 法存在假阴性,苯唑西林 法检测法存在假阳 反应条件: ?预变性 ,然后 ?变性 性。各菌种类及头孢西丁纸片法、苯唑西林 ,退火 ,延伸,循环 次,最 法、 检测情况见表 。 株头孢西丁纸片法敏 后 ?延伸。经凝胶电泳,凝胶图像系统分 感、苯唑西林 耐药的凝固酶阴性葡萄球菌 析。金黄色葡萄球菌 为 阴性质控 检测情况见表 。 菌株,金黄色葡萄球菌为阳性质 控菌株,结果在控。 表 株凝固酶阴性葡萄球菌不同方法检测情况株 . 基因阳性菌株测序:为进一步确定基因阳性菌株检测准确性, 将该菌株进行基因 测序,结果确认为基因阳性葡萄球菌。 .非基因介导的苯唑西林耐药的葡萄球 菌抗菌谱分析:用 微量肉汤稀释法检测筛选出 的非 基因介导的苯唑西林耐药的葡萄球菌对、 、、 、 、、 、 、、 、耐 药睛况。实验材料、操作及结果判断严格参照 年 临床和实验室标准协会 . 《需氧菌稀释 法抗生素药敏试验标准方法》执行,采用金黄色葡 . 株纸片法头孢西丁敏感、 法苯唑西林 萄球菌 为 法质控菌株,结果在控。 耐药的凝固酶阴性葡萄球菌 基因检测结果:株纸片法头孢西丁敏感青霉素耐药的凝固酶阴 结 果 性葡萄球菌,用苯唑西林 法检测 株苯唑西 .不同方法检测纸片法头孢西丁敏感青霉素 林敏感、 株苯唑西林耐药。将 株纸片法头孢 耐药葡萄球菌的苯唑西林敏感性比较:株纸片 西丁敏感、 法苯唑西林耐药的凝固酶阴性葡萄 表 不同方法检测头孢西丁敏感耐青霉素葡萄球菌对苯唑西林敏感性比较 株 注:为头孢西丁, 为苯唑西林; 为敏感, 为中介, 为耐药;“一”为不适用医学杂志年 月第 卷第 ?期 蔓 :塑 : 球菌进行 基因检测, 株 % 为基因 阳性, 株 % 为 基因阴性。纸片法头孢西丁敏感青霉素耐药、 法苯唑西林耐药的凝固 黜酶阴性葡萄球菌 基因检测结果见图 。 产物测定的序列经比对与基因 . 的 ~序列一致,证实为基因。 表 株凝固酶阴性葡萄球菌 检测情况 株 船 注: 为标准带: 为阳性质控菌株, 为阴性质 控菌株,结果在控。 ~ , ~ 分别对应临床菌株 ~ ,图中约处明亮独立条带表示基因阳性 图 基因检测结果 表 非 基因介导的苯唑西林耐药葡萄球菌 注:根据 规定凝固酶阴性葡萄球菌头孢西丁/ 为敏 抗菌药敏结果 感,苯唑西林 ? . / 为耐药 . 株非基因介导的苯唑西林耐药的凝 固酶阴性葡萄球菌抗菌药敏结果:剔除 株阳性菌株,将 株非基 因介导的苯唑西林耐 药凝固酶阴性葡萄球菌用 微量肉汤稀释法做 抗菌药敏谱分析,发现 敏感为 株, 为 株、 为 株, 为 株, 为 株, 、、 、和头孢菌素类均为 株。 各菌株药敏 结果见表 。 讨 论 注: :敏感; :耐药;:中介; :庆大霉素; :头孢唑啉; :头孢呋 辛;克林霉素; :环丙沙星;:替考拉宁; : 本实验对株纸片法头孢西丁敏感、青霉素 万古霉素; :红霉素;:哌拉西彬他唑巴坦; :四环素;:甲 耐药的金黄色葡萄球菌采用头孢西丁 法、苯唑 氧苄啶/磺胺甲嚼唑 西林纸片法、苯唑西林 法分析,结果头孢西丁 色葡萄球菌 基因介导的苯唑西林耐药,具有 检测结果均为敏感,苯唑西林纸片法检测出 株中 很好的可靠性 ,本实验检测准确率为 %。 介, 株耐药,苯唑西林 法均为敏感,为进一步 另外,针对 株纸片法头孢西丁敏感、青霉素 确认试验结果,我们用方法检测 基因,结 耐药的凝固酶阴性葡萄球菌我们采用苯唑西林 果均为阴性,提示我们苯唑西林纸片法与 法检 法做耐药分析,检测出 株苯唑西林耐药, 值 测结果存有不一致的情况,但应以 法结果为 介于 . ~ 。根据 年 一准,同时也提示我们用头孢西丁检测结果 判定金黄