镇咳止喘咀嚼片镇咳祛痰平喘作用的实验研究

镇咳止喘咀嚼片镇咳祛痰平喘作用的实验研究 【摘要】 目的观察镇咳止喘咀嚼片的主要药理作用。 方法采用小鼠因氨水所致咳嗽法、豚鼠因枸橼酸所致咳嗽法观察其镇 咳作用,小鼠呼吸道酚红排痰量法、大鼠毛细管排痰量法观察其祛痰 作用,组胺所致豚鼠“哮喘”法观察其平喘作用。结果镇咳止喘咀嚼 片可以延长小鼠因氨水所致的咳嗽潜伏期及因枸橼酸所致豚鼠的咳 嗽潜伏期～同时减少咳嗽次数,可以增加小鼠呼吸道的酚红排痰量及 增加大鼠毛细管的排痰量,可以对抗动物因组胺引起的“哮喘”症状。 结论镇咳止喘咀嚼片具有镇咳、祛痰、平喘作用。 【关键词】 镇咳止喘咀嚼片,镇咳, 祛痰, 平喘 Abstract:ObjectiveTo observe pharmacological effects of Zhenke Zhichuan Tablets.MethodsThe cough-relieving effect of Zhenke Zhichuan Tablets was observed by mouse cough model induced by NH4OH and guine-pig cough model induced by citric acid with capillary method; observation on the phlegm expelling effect was completed by using phenol red and by observing the phlegm expelling from the respiratory tract of adult mouse; the effect of anti-asthma was observed through the asthma caused by histamine. ResultsZhenke Zhichuan Tablets could apparently prolong the coughing incubation period and reduce coughing frequency ; increase excretion of phenol red and phlegm from the respiratory tract;resist asthma caused by histamine.ConclusionZhenke Zhichuan Tablets has a therapeutic effect of relieving cough and expelling phlegm and anti-asthma. Key words: Zhenke Zhichuan Tablets, Relieving cough, Expelling phlegm; Anti-asthma 镇咳止喘咀嚼片是由中药颗粒剂经剂型改造而成的新药～具有吸 收速度快、服用方便、易于运输保存等特点～功能为清热宣肺、化痰 止咳～临床上可以用于上呼吸道感染、气管炎、肺炎等。我们对其镇 咳、祛痰、平喘的药理作用进行了研究～为临床合理用药提供理论依 据。 1 材料与仪器 1.1 动物 昆明种小鼠～远交封闭系～皖医动准第01号,英国种豚鼠, Wister大鼠～远交封闭系～皖医动准第02号。安徽医科大学实验动 物中心提供。 1.2 药品与试剂 镇咳止喘咀嚼片～安徽医科大学第一附属医院提供～批号040618,镇咳止喘颗粒～安徽医科大学第一附属医院提供～批号20031223,氨水～上海试剂一厂综合经营公司产品～浓度28%～AR级～批号20020327,枸橼酸～中国医药集团上海化学试剂公司～AR级～批号20020116,苯酚红～北京市朝阳区旭东化工厂产品～批号990609,乌拉坦～中国医药,集团,上海化学试剂公司产品产品～批号20011105,磷酸组织胺～中国药品生物制品检定所出品～25 mg/支～批号5109411。 1.3 仪器 东芝空气压缩机～日本产。721分光光度计～上海第三仪器厂出品。80-2沉淀离心机～上海手术器械厂产品。毛细管～内径0.8mm～长度5，6cm。手术器械若干。 2 方法 2.1 镇咳作用 2.1.1 对小鼠因氨水所致咳嗽的影响 参照文献,1,～取体重18，22 g的小鼠50只～??各半～随机分成5组～分别灌胃给予0.2 ml/10 g相应供试液～第1天上、下午各1次～第2天给完药后30 min时将小鼠置于5 000 ml玻璃钟罩内～以400，500 mmHg 恒压将氨水,28%,喷入钟罩～喷雾5 s～然后观察记录小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数,3 min,。动物在第1次给药前24 h进行筛选～后再分组～咳嗽为:腹肌收缩～同时张大嘴～有时可有咳声。若潜伏期小于1 min且在1min内出现3次以上典型咳嗽者为“有咳嗽”敏感动物～否则作无咳嗽而淘汰。 2.1.2 对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响 参照文献,2,～取体重100，200 g的纯白色豚鼠,对咳嗽及哮喘较敏感,～??兼用～筛选40只后随机分为5组～每组8只。给药容积为1.0 ml/100 g～第1天上、下午各给药1次～第2 天上午给药后30 min进行实验。将动物置于5 000 ml的密闭钟罩内～以400，500 mmHg 恒压通过喷头将17.5%枸橼酸喷入钟罩～喷雾1 min～然后观察记录6 min内豚鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数～加以组间比较并作统计分析。首先在给药前1天对豚鼠进行筛选～6 min内豚鼠的咳嗽次数少于10次或大于30次均作淘汰。 2.2 祛痰作用 2.2.1 对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响 测定酚红最大吸收峰:参照文献,2,方法～酚红含量测定略作改变。在100 ml容量瓶内精确配制浓度为1 mg/ml的酚红母液～再配每毫升含酚红0.01～0.1～0.5～0.7～1～3～5～10 μg溶液～分装于8个10 ml容量瓶内。任取两管溶液～以未知酚红的0管作对照～用721分光光度计在波长420，570 nm范围内～测光密度值。最后得酚红最大吸收峰的波长在560 nm处。 绘制酚红标准曲线 :将上述配制的酚红溶液～分别在560nm波长处测光密度值～结果各管酚红含量与光密度之间的直线相关有极显著意义,相关系数r=0.999 5～P<0.001,～各数据及线性方程如1。表1 酚红标准曲线及方程,略, 实验操作:参照文献,2,～取体重18，22 g的小鼠50只～??各半～随机分成5组～分别灌胃给予0.2 ml/10 g相应供试液～第1天上、下午各1次。第2天给完药后0.5 h时做实验。实验前小鼠禁食8，12 h～每只小鼠给药30 min后～腹腔注射酚红溶液0.5 ml/只。30 min后～脱椎处死～仰位固定。颈部拉直～解剖分离出气管在气管下穿一丝线～以备固定气管插管用。气管插管,用头部磨平的9号针头,从甲状软骨处插入气管内约0.3 cm～用备好的丝线结扎、 固定～用1ml注射器吸取5 d/dl的NaHCO3溶液0.5 ml推注入气管内～反复连续推抽3次～灌胃呼吸道。最后用注射器将灌洗液抽出注入试管中～按上述方法操作3次～冲洗9次～共吸取NaHCO3溶液1.5 ml～合并洗出液约1.2，1.5 ml～离心后取上清液用分光光度计比色～OD值代入方程～得出酚红浓度～将结果进行统计学分析。 2.2.2 对大鼠毛细管排痰量的影响 参照文献,2,～取体重180，220 g大鼠30只～??各半～每组6只～随机分成5组～分别灌胃给予1.0 ml/100 g相应供试液。实验前禁食不禁水8，12 h后～乌拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉后～仰位固定,注意保暖,。剪开颈正中部皮肤～分离出气管。在甲状软骨下缘正中的软骨环之间用尖锐的注射针头扎一小孔～然后插入玻璃毛细管1根～使毛细管刚好接触气管底部表面～借以吸取气管后部之痰液。当毛细管内痰液充满时～立即另换1根。以毛细管吸取痰液长度作为评价药物的祛痰效果。记录给药前2 h的正常分泌量后～灌胃给药后,在给药1 h后～再按同等剂量重复给药1次,继续再观察4h 痰液分泌量。比较给药前后平均每小时分泌及与生理盐水组相比的痰液分泌量～并作统计学分析。 2.3 对组胺所致豚鼠哮喘的影响 参照文献,2,～取预选后体重150，200 g豚鼠40只～??兼用～随机分为5组～每组8只～给药容积为1.0 ml/100 g～第1天上、下午各给药1次～第2天上午给药后0.5 h进行实验。将动物置于5 000 ml的密闭钟罩内～以 400，500 mmHg压力喷入2 mg/ml磷酸组胺1 ml～动物在吸入以上药液后经过一定的潜伏期～即产生“哮喘”反应～“哮喘”反应按程序分为4级:?级呼吸加速～?级呼吸困难～?级抽搐～?级跌倒。动物一旦出现抽搐～即拉开盖子～必要时辅以人工呼吸以免动物因窒息而死亡。多数动物在90 s以内即可以出现?或?级反应～一般不超过150 s～超过150 s者可认为不敏感～不予选用,给药前1天进行筛选～潜伏期超过360 s按360 s计。 3 结果 3.1 镇咳作用 3.1.1 对小鼠因氨水所致咳嗽的影响 镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量2.062 5～4.125 0～8.250 0 g〃kg-1,分别相当于临床用的5～10～20倍,灌胃给予小鼠3次后～与颗粒,4.125 0 g〃kg-1,剂型一样～可以延长因氨水所致小鼠的咳嗽潜伏期～同时减少咳嗽次数～与生理盐水组相比较具有显著意义～潜伏期与对照组相比分别为P<0.05～P<0.05和P<0.01～ 咳嗽次数与对照组相比分别为P<0.01～P<0.01和P<0.01～但无明显量效关系。提示镇咳止喘咀嚼片有一定的镇咳作用。结果见表2。 表2 镇咳止喘咀嚼片对小鼠因氨水所致咳嗽的影响(略) 3.1.2 对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响 镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量0.773 4～1.546 9～3.093 8 g〃kg-1,相当于临床用量的1.875～3.75～7.5倍,～灌胃给予豚鼠3次后～与颗粒剂型,1.546 9 g〃kg-1,一样～可以延长因枸橼酸所致豚鼠的咳嗽潜伏期～同时减少咳嗽次数～与生理盐水组相比较具有显著意义～潜伏期与对照组相比分别为P<0.05～P<0.05和P<0.01～咳嗽次数与生理盐水组相比较分别为P<0.05～P>0.05和P<0.05～提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的镇咳作用。结果见表3。表3 镇咳止喘咀嚼片对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响(略) 3.2.1 对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响 镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量,2.062 5～4.125 0～8.250 0 g〃kg-1～分别相当于临床用量的5～10～20倍,灌胃给予小鼠3次后～可以增加小鼠呼吸道的酚红排痰量～与生理盐水组相比具有显著意义～分别为P<0.05～P<0.01和P<0.05～同颗粒剂型相 比～具有相同的药理效应。提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的镇咳作用。结果见表4。表4 镇咳止喘咀嚼片对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响(略) 3.2.2 对大鼠毛细管排痰量的影响 镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量,1.031 3～2.062 5～4.125 0 g〃kg-1～分别相当于临床用量的2.5～5～10倍,灌胃给予大鼠2次后～可以增加大鼠毛细管的排痰量～与生理盐水组相比具有显著意义～分别为P<0.01～P<0.05和 P<0.01,与给药前相比具有非常显著意义～分别为P<0.01～P<0.001和 P<0.01～同颗粒剂型相比～具有同等的药理作用。镇咳止喘咀嚼片实验动物经口服后～可以增加其呼吸道排痰量～提示本品具有一定的镇痰作用。结果见表5。表5 镇咳止喘咀嚼片对大鼠毛细管排痰量的影响(略) 3.3 对组胺所致豚鼠哮喘的影响 豚鼠经呼吸道吸入一定量的磷酸组胺后～可以造成类似人类的“哮喘”模型。镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量,0.773 4～1.546 9～3.093 8 g〃kg-1～分别相当于临床用量的1.875～3.75～7.5倍,灌胃给予豚鼠3次后～可以对抗动物因组胺引起的“哮喘”症状～表现为动物跌倒潜伏期延长～与生理盐水组相比较具有非常显著意义～经 统计学处理分别为P<0.05～P<0.01和P<0.01。同颗粒剂型相比～具有同等的药理作用。提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的平喘作用。结果见表6。表6 镇咳止喘咀嚼片对组胺所致豚鼠哮喘的影响(略) 4 讨论 通过实验发现镇咳止喘咀嚼片具有镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗菌的药理作用～咀嚼片剂型和原颗粒剂型相比具有同等的药理作用～均有镇咳祛痰之功效～临床上可以用于上呼吸道感染、气管炎、肺炎等～同时咀嚼片相比原颗粒剂型具有服用方便～作用迅速～易于运输保存等特点。 【参考文献】 ,1,李仪奎.中药药理实验方法学,M,.上海:上海科学技术出版社 1991:423～300. ,2,陈奇.中药药理实验方法,M,.北京:人民卫生出版社～1994:140～141～143～148～80.