农学专业 毕业论文 毕业论文

农学专业 毕业 毕业论文 2012年度本科生毕业论文,设计, 球孢白僵菌粗提物与高效氯氰菊酯混合 对南瓜实蝇的增效研究 院 , 系:生命科学与技术学院 专 业:农学 年 级:2008 学生姓名: 学 号:200813050712 导师及职称: , 2012年6月 2012 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate The Synergism Study on Beauveria bassiana Toxic Secretion Mixed with Bet-cypermethrin for Bactrocera tau Department: College of Life Science and Technology Major: Agronomy Grade: 2008 Student’s Name: LiuKai-rong Student No.: 200813050712 Tutor: Associate Professor YuanSheng-yong June, 2012 毕业论文(设计)原创性声明 本人所呈交的毕业论文,设计,是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知～除文中已经注明引用的内容外～本论文,设计,不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本论文,设计,的研究做出重要贡献的个人和集体～均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名: 刘开荣 日期: 2012年6月1日 毕业论文(设计)授权使用说明 本论文,设计,作者完全了解红河学院有关保留、使用毕业论文,设计,的规定～学校有权保留论文,设计,并向相关部门送交论文,设计,的电子版和纸质版。有权将论文,设计,用于非赢利目的的少量复制并允许论文,设计,进入学校图馆被查阅。学校可以公布论文,设计,的全部或部分内容。保密的论文,设计,在解密后适用本规定。 作者签名:刘开荣 指导教师签名:袁盛勇 日期: 2012年6月1日 日期: 2012年6月1日 毕业论文(设计)答辩委员会(答辩小组)成员名单 姓名 职称 单位 备注 田学军 教授 生命科学与技术学院 主席(组长) 沈登荣 讲师 生命科学与技术学院 孙士卿 助教 生命科学与技术学院 助理研究员 罗思 生命科学与技术学院 红河学院本科毕业论文 (设计) 摘 要 应用球孢白僵菌代谢粗提物与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇进行毒力及增效倍数的测定，了解混合剂对南瓜实蝇的防治效果及增效情况。利用球孢白僵 ，通过发酵培养后提取其代谢粗提物，并将其粗提物制备成菌MZ041016菌株 两种简单的水剂和油剂，分别再与稀释1000倍液的2.5%的高效氯氰菊酯以10:1的比例混合，制成生物与化学农药两种混合型药剂，稀释成10倍、50倍和100倍3个浓度梯度后对南瓜实蝇成虫、幼虫、蛹进行毒力测定，计算出增效倍数。结果表明:随浓度梯度增大和时间的推延，累计校正死亡率均逐渐增大;LC50值逐渐减小;增效倍数逐渐增大。药后第6d，高浓度油剂混合剂和水剂混合剂 为(74.44?2.22)%和(72.22?1.92)%;其次对南对南瓜实蝇幼虫矫正死亡率最大， 瓜实蝇成虫，为(65.56?2.22)%和(62.22?1.92)%;最小是南瓜实蝇蛹，为(47.78?2.22)%和(46.67?1.11)%，高浓度油剂混合剂和水剂混合剂对南瓜实蝇致死中浓度从大到小依次是蛹,成虫,幼虫，分别为:12.01ml/L和14.09ml/L;1.56ml/L和1.85ml/L;1.54ml/L和2.53ml/L, 油剂混合剂对南瓜实蝇成虫增效倍数最大的，为2.76倍，最小是水剂混合剂对南瓜实蝇幼虫，为2.15倍。 关键词:球孢白僵菌;南瓜实蝇;混合剂;增效倍数; I 红河学院本科毕业论文 (设计) ABSTRACT Toxicities of Beauveria bassiana toxic secretion mixed Beta-cypermethrin on Bactrocera tau were tested to study synergism of two kinds of mixed reagent. Beauveria bassiana strain MZ041016 were selected to get its toxic secretion by the process of fermentation to form two new agents: water agent and unoil agent, and these two substances are respectively diluted approx. 10:1 with 2.5% bata-cypermethrin after 1000 times dilution to form a compound, then, toxicity determination of toxic extraction from adult, larvae and pupa of Bactrocera tau with different concentration gradient and calculate the times of synergism. The results indicated :With the concentration gradient of increasing and time delay, After administration of 6d, cumulative mortality rate gradually increased; LC is 50 gradually decreased; synergism gradually increased, high concentration of mixed oil and mixed type water retaining agent on mortality of Bactrocera tau larvae maximum correction, For the (74.44 + 2.22)% and (72.22 + 1.92)%; secondly the Bactrocera tau adult, as (65.56 + 2.22)% and (62.22 + 1.92)%; the minimum is Bactrocera tau pupa , for (47.78 + 2.22)% and (46.67 + 1.11)%. high concentration of mixed oil and mixed type water retaining agent on Bactrocera tau lethal concentration of the order from high to low is pupa > adult > larva, respectively: 12.01ml / L and 14.09ml / L; 1.56ml / L and 1.85ml / L; 1.54ml / L and 2.53ml / L, mixed oil on Bactrocera tau synergism ratio is the largest adult 2.76 times, the smallest larva 2.15 times Key words: Beauveria bassiana; Bactrocera tau; mixed reagent; synergist. II 红河学院本科毕业论文 (设计) 目 录 1前言 ........................................................................................................................1 1.1 南瓜实蝇的研究概况 ...................................................................................... 1 1.2 球包白僵菌的研究状况 ................................................................................... 1 1.3 混合药剂防治病害的研究现状 ....................................................................... 1 1.4 研究目的及意义 .............................................................................................. 2 2.材料与方法 .............................................................................................................3 2.1 材料 ................................................................................................................. 3 2.2 方法 ................................................................................................................. 3 3.结果与分析 .............................................................................................................5 3.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇不同虫态的毒力 及增效倍数的测定 ................................................................................................... 53.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇不同虫态的毒力 及增效倍数的测定 ................................................................................................... 8 4.讨论 ...................................................................................................................... 13 4.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒 力及增效倍数的测定 ............................................................................................. 13 4.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒 力及增效倍数的测定 ............................................................................................. 13 5.结论 ...................................................................................................................... 15 5.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒 力及增效倍数测定 ................................................................................................. 15 5.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒 力及增效倍数测定 ................................................................................................. 15 参考文献 ................................................................................................................. 16 致 谢 ..................................................................................................................... 18 III 红河学院本科毕业论文 (设计) 1前言 1.1 南瓜实蝇的研究概况 南瓜实蝇Bactrocera tau(Walker)属双翅目，实蝇科，寡鬃实蝇属，是一种不仅对瓜类危害严重，同时还危害一些水果类，如:芒果、人心果、罗汉果等[1]的一种昆虫。南瓜实蝇对寄主的选择不同造成的危害也不同，对不同寄主危 [2]—1992年时南瓜被害率达到40%-70%，近来几年寄主害程度也不同，在1991 范围呈逐渐扩大，危害程度呈加深的趋势。南瓜实蝇分布范围广，国内外均有分布，在国外主要分布于韩国、越南、缅甸、老挝、泰国等地方。在我国主要分布于海南、广州、浙江、江西、湖南、湖北、四川、云南、贵州等地，其中 [1]华南地区发生量最大。根据南瓜实蝇的危害特征，有文献报道对南瓜实蝇的 [3]主要防治是采用农业防治、生物防治、物理防治和药剂防治。其中生物防治主要是应用天敌，如蜘蛛可以食成虫。药剂防治主要是用单一的化学农药进行防治，如用敌百虫或溴氰菊酯喷洒，也可以诱杀成虫。应用混合药剂对南瓜实蝇进行防治尚未见报道。 1.2 球包白僵菌的研究状况 球孢白僵菌(Beauveria bassiana)属半知菌亚门丝纲、丛梗孢目、丛梗孢科、球孢白僵菌属，它可以寄生于鳞翅目、同翅目、膜翅目等15个目149个科的 [4][5]700多种昆虫与螨类，白僵菌是使用最广的真菌杀虫剂。白僵菌在寄生虫体内进行营养生长的同时还分泌一些毒素类代谢物，具有一定的毒性，可以直接 [6]杀死寄主或加快寄主的死亡，有文献报道病原真菌所分泌的毒素物质在致死 [7]寄主过程中起到关键作用。近几年，许多病原真菌如绿僵菌、蜡蚧轮枝菌、布氏白僵菌等，用于发酵培养后提取代谢分泌物对粉虱、金龟子、东亚飞蝗、 [8]小菜蛾等害虫进行药效研究。白僵菌代谢物提取用于防治病虫害的相关报道不断增多，大部分是直接将提取物饲喂或血腔注射到虫体内部，李龙，李建庆[6]用白僵菌的代谢粗提物对美国白蛾毒性生测方法的研究，结果采用血腔注射效果更佳。将提取物制备成药剂剂型后在进行杀虫效果的研究还未见报道。 1.3 混合药剂防治病害的研究现状 混合药剂是用两种或两种以上的生物农药或化学农药剂根据药剂的特征及作用以不同比例混配而成，混合药剂相对于单剂的药效表现主要在于互补和相加，即表现出增效作用。混合药剂能降低了农药使用对环境及人类的危害，延 1 前言 [9][10]缓病菌抗药性的发生。在1999年时张应阔等就应用两种增效剂对7种杀虫剂杀灭家蝇增效的研究，结果增效显著。近年来应用混合药剂对病害防治的报 [11]道增多，李娜等用400亿孢子/克防治美国白蛾药效试验，结果400亿孢子/克可湿性粉剂相对于灭幼脲25%的悬浮剂表现出很好的防治效果。还有用白僵菌与其他药剂(灭幼脲)混合防治马尾松毛虫，防治效果可达98%以上，并具 [1]有持续效果。 1.4 研究目的及意义 本实验主要对球孢白僵菌MZ-041016菌株进行液体发酵培养，提取代谢产物后，分别制成简单的剂型，在剂型中加入化学农药高效氯氰菊酯。旨在了解化学杀虫剂在生物杀虫剂中对南瓜实蝇的防治效果和增效情况。混合药剂使用可以降低化学农药的使用，降低生产成本，在药效方面呈相加互补作用，提高社会效益和经济效益，同时通过试验能有效地为实际生产中病虫害防治提供了理论参考依据。 2 红河学院本科毕业论文 (设计) 2.材料与方法 2.1 材料 2.1.1 供试昆虫 供试南瓜实蝇在室内用饲料人工饲养，建立南瓜实蝇种群待用。 2.1.2 供试菌种 供试的球孢白僵菌MZ-041016菌株接种于菜青虫上复壮，挑取菌丝于PDA培养基上进行多次分离纯化。 2.1.3 实验仪器 养虫笼、人工气候箱、振荡培养箱、离心机、分液漏斗、旋转蒸发仪和无菌操作台。 2.2 方法 2.2.1 球孢白僵菌的扩繁 将分离纯化的球孢白僵菌MZ-041016接种于萨氏培养基上扩繁，置于培养条件为:光照与黑暗比为12:12，温度在25?1?，湿度85%-90%的人工气候箱 [11]中培养7d供试用。 2.2.2球孢白僵菌的发酵培养 将扩繁的球孢白僵菌刮在无菌水和0.05%吐温-80中，制成孢子悬浮液，置于振荡培养箱中振荡后用纱布过滤，用血球计数板计数孢子浓度为3.5,8.5×710个/mL，接种于液体改良察氏培养基中。500ml的培养瓶中装300ml培养基， [12]按5%的接种量接种。置于180r/min，26?的振荡培养箱中培养10,15d。 2.2.3 球孢白僵菌代谢粗提物提取 将发酵培养的菌丝与培养基用滤纸过滤分开，发酵液经2000r/min离心机离心20min，取上清液多次萃取、减压浓缩至原体积的1/20，从而得代谢产物 [13]粗提物。 2.2.4 药剂剂型配制 2.2.4.1 代谢粗提物水剂剂型制备及混合药剂配制 提取代谢产物用旋转蒸发仪浓缩至快干，加蒸馏水至浓缩前体积的1/20润 [14]洗提取物，配制0.1%的洗衣粉溶液加入提取液中，配制成含有10%的提取液制剂，制成水剂。取稀释过1000倍的高效氯氰菊菊酯和水剂以1:10比例混配，制成混配杀虫剂供试。 3 材料与方法 2.2.4.1 代谢粗提物油剂剂型制备及混合药剂配制 将用旋转蒸发仪浓缩的提取物体积到原体积1/20时取出，与食用油以1:9比例形成含有10%的提取液制剂，制成油剂。取稀释过1000倍的高效氯氰菊酯和油剂以1:10比例混配，再加入十二烷基苯磺酸钠制成混配杀虫剂供试。 2.2.5 不同制剂对南瓜实蝇的毒力测定 死亡率(%)=死亡个数/供试总虫数×100% 校正死亡率=处理死亡率-对照死亡率/100-对照死亡率 [15] 增效比值( SR ) =单剂的LC值 /(单剂+增效剂)的 LC值5050 2.2.5.1 供试制剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定 将供试制剂分别稀释成10倍、50倍和100倍三个浓度梯度，用清水作对照。用长宽高分别为10、12、15cm的两侧面与上面可通气长方体塑料盒子，先在盒子底部铺一层报纸，取30头成虫置于瓶内，将各浓度的制剂均匀喷洒在盒壁和虫体上，正常饲养，每个浓度三个重复，连续观察6d，每天记录虫累计死亡数量。 2.2.5.2 供试制剂对南瓜实蝇幼虫的毒力测定 将供试制剂分别稀释成10倍、50倍和100倍三个浓度梯度，用清水作对照。选取大小均匀的南瓜实蝇幼虫置于溶液中1min后取出，用毛笔挑起置于有幼虫饲料的培养皿中，保鲜膜封口，防止幼虫爬出，用针刺小洞，置于25?1?、 RH为85%的人工气候箱中，连续观察6d,每天记录幼虫的累积死亡数量。2.2.5.3 供试制剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定 将供试制剂分别稀释成10倍、50倍和100倍三个浓度梯度，用清水作对照。选择同一天化成的蛹30粒，浸泡1min后取出晾干，置于放有少量沙子并保持湿度在60%左右的广口瓶内，用保鲜膜封口，并用针刺小洞，设三个重复。置于25?1?、RH为85%的人工气候箱，连续观察6d，每天记录虫累计死亡及羽化数量。 2.2.6 数据统计与分析 [16]数据采用ExceL进行数据分析,根据校正死亡率进行概率值转换，浓度转换成其对数，计算出回归式y=a+bx，分别估计计量效应LC和相关系数r，在50 根据公式计算出增效比值。 4 红河学院本科毕业论文 (设计) 3.结果与分析 3.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇不同 虫态的毒力及增效倍数的测定 3.1.1 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇幼虫的 毒力及增效倍数测定 球孢白僵菌粗提物单剂与高效氯氰菊酯和水剂混合剂对南瓜实蝇幼虫的毒 力测定如表1和2:在3个浓度下第1d开始就出现幼虫死亡，并且单剂在10ml/L 浓度下其校正死亡率都达到(28.89?1.11)%以上，药后第6d对幼虫毒力最强的单 剂其校正死亡率达(64.44?1.11)%，混合剂对其校正死亡率达(72.22?1.92)%;防 治效果最差的单剂1ml/L浓度6d后为(37.78?1.11)%。随浓度增大和时间增长， 单剂和混剂对南瓜实蝇幼虫的累计校正死亡率都呈上升趋势，在第4d后死亡率 呈缓慢上升趋势(表1，表2);致死中浓度逐渐减少，呈下降趋势，单剂致死中 浓度从第1d到第6d由38.60ml/l减少到3.34ml/L，混合剂则由34.18ml/L减少到 2.53ml/L，同时二者混合剂对南瓜实蝇幼虫的致死中浓度小于单剂的致死中浓 度;增效倍数逐渐增大，呈上升趋势，都大于1，最大为1.32倍(表3)。 在5%水平上，10ml/L与2ml/L和1ml/L处理之间累积校正死亡率有显著差 异，2ml/L和1ml/L之间无差异(表1、2)。 表1 粗提物单剂对南瓜实蝇幼虫的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 4d 5d 2d 3d 6d 10 (28.89?1.11)a (42.22?1.11)a (55.56?1.11)a (58.89?1.11)a (62.22?1.11)a (64.44?1.11)a 2 (12.22?1.11)b (18.89?1.11)b (28.89?1.11)b (32.22?1.11)b (37.78?1.92)b (40.00?1.92)b 1 (6.67?0.00)c (15.56?1.11)b (23.33?1.93)b (28.89?1.11)c (35.56?2.22)b (37.78?1.11)b 表2 水剂混合剂对南瓜实蝇幼虫的毒力测定 累计校正死亡率/, 混合浓度/ 1d 2d 3d 4d 5d 6d (ml/L) 10 (34.22?1.11)a (44.44?1.92)a (58.89?2.22)a (63.33?1.92)a (66.67?1.92)a (72.22?1.92)a 2 (14.44?1.11)b (21.11?1.11)b (31.11?1.93)b (38.89?1.11)b (41.11?4.01)b (41.11?1.92)b 1 (12.22?1.11)b (18.89?1.11)b (27.78?1.92)b (37.78?1.92)b (38.89?2.94)b (40.00?1.11)b 5 结果与分析 表3 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇幼虫的致死中浓度 混合 致死中浓度增效倍数 时间/天 回归方程 相关系数 比例 (ml/L) 0.9981 38.60 1d 1:0 Y=4.4534+0.9310X 10:1 Y=4.5754+0.7955X 0.9851 34.18 1.13 3d 1:0 Y=5.1227+0.8905X 0.9939 7.28 10:1 Y=5.1964+0.8515X 0.9822 5.90 1.23 6d 1:0 Y=5.3422+0.7186X 0.9757 3.34 10:1 Y=5.5465+0.8994X 0.9643 2.53 1.32 3.1.2 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇成虫的毒力及增效倍数测定 球孢白僵菌代谢粗提物单剂与其混合剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定结果如表4、5所示，同一制剂同一时间高浓度下对南瓜实蝇的致病力强，1,4d两种制剂对南瓜实蝇成虫累计矫正死亡率上升较快，从5d后上升变缓;第6d混合制剂对南瓜实蝇成虫的死亡率最高为(62.22?1.92)%，最低为(45.56?1.11)%;而单剂球孢白僵菌代谢粗提物死亡率最高为(54.44?1.12)%，最低为(41.11?1.11)%，混合制剂对南瓜实蝇成虫每天的死亡率大于单剂的死亡率。从表6看，随浓度增大和时间增长，致死中浓度逐渐减小，到第6d时，混合剂的最小致死中浓度为1.85ml/L，单剂的最小致死中浓度为4.31ml/L;1ml/L与2ml/L的浓度下其矫正死亡率在5%水平上差异不显著，1ml/L与10ml/L和2ml/L与10ml/L在5%水平下差异显著(表4、5)。从表6可以看出第1,6d增效倍数逐渐增大，并且都大于1，到第6d最大倍数达到2.33。 表4 粗提物单剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 4d 5d 2d 3d 6d 10 (25.56?1.11)a (27.78?1.11)a (40.00?1.11)a (48.89?1.11)a (53.33?1.11)a (54.44?1.12)a 2 (8.89?1.92)b (17.78?1.11)b (28.89?1.93)b (38.89?1.11)b (46.67?2.94)b (46.67?2.22)b 1 (7.78?1.11)b (14.44?1.11)b (26.67?1.11)b (34.44?1.93)b (38.89?1.11)c (41.11?1.11)b 6 红河学院本科毕业论文 (设计) 表5 水剂混合剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定 混合浓累计校正死亡率/, 度/1d 2d 3d 4d 5d 6d (ml/L) 10 (32.22?1.11)a (34.44?1.92)a (44.44?2.22)a (58.89?1.92)a (62.22?1.92)a (62.22?1.92)a 2 (15.56?1.11)b (23.33?1.11)b (28.89?1.93)b (42.22?1.11)b (48.89?4.01)b (50.00?1.92)b 1 (13.33?1.11)b (18.89?1.11)b (27.78?1.92)b (37.78?1.92)b (42.22?2.94)b (45.56?1.11)b 表6 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇成虫的致死中浓度 混合 致死中浓度增效倍数 时间/天 回归方程 相关系数 比例 (ml/L) 0.9978 71.74 1d 1:0 Y=4.3131+0.8027X 10:1 Y=4.5199+0.6739X 0.9987 51.57 1.39 3d 1:0 Y=4.7381+0.3808X 0.9917 48.73 10:1 Y=4.8406+0.4754X 0.9731 21.64 2.25 6d 1:0 Y=5.1191+0.3262X 0.9911 4.31 10:1 Y=5.3359+0.4583X 0.9983 1.85 2.33 3.1.3 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇蛹的毒 力及增效倍数测定 单剂和混合剂对南瓜实蛹的毒力及增效倍数测定结果如下:两种制剂的在第 1d时开始出现死亡，混合水剂制剂对南瓜实蝇蛹的校正死亡率在10ml/L的浓度 下第1d就达到(25.56?1.93)%，到第6d时为(46.67?1.11)%;而单剂粗提物在第 1d时对南瓜实蝇蛹校正死亡率为(16.67?1.11)%，第6d时达到(41.11?1.11)% (表7、8)。南瓜实蝇蛹的致死中浓度随时间推移逐渐减小，其中混合水剂在 10ml/L浓度下1d、3d和6d对其致死中浓度分别为50.53ml/L、24.49ml/L和 14.09ml/L(表9)，累计校正死亡率随浓度增大和时间延长逐渐增加，浓度2ml/L 和1ml/L在5%水平下无差异。增效倍数随时间的推移呈增长趋势,混合水剂制剂 对南瓜实蛹增效作用显著，第1d时的增长倍数为1.75，到第6d时达到2.15倍。 表7 粗提物单剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 4d 5d 2d 3d 6d 10 (16.67?1.11)a (22.22?1.11)a (30.00?2.22)a (34.44?1.11)a (36.67?1.93)a (41.11?1.11)a 2 (5.56?1.11)b (8.89?0.00)b (12.22?1.11)b (18.89?1.11)b (25.56?1.11)b (28.89?1.11)b 1 (2.22?1.11)b (4.44?0.00)c (8.89?1.11)b (12.22?2.22)c (20.00?1.92)b (24.45?2.22)b 7 结果与分析 表8 水剂混合剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定 累计校正死亡率/, 混合浓度 /(ml/L) 1d 2d 3d 4d 5d 6d 10 (25.56?1.93)a (27.78?1.93)a (38.89?1.11)a (42.22?1.11)a (45.56?1.11)a (46.67?1.11)a 2 (7.78?1.11)b (16.67?1.11)a (21.11?0.93)b (31.11?1.11)b (33.33?1.93)b (35.56?0.93)b 1 (5.56?1.93)b (12.22?1.93)a (17.78?1.11)b (25.55?2.22)b (28.89?2.22)b (32.22?1.11)b 表9 球孢白僵菌代谢粗提物水剂与高效氯氰菊酯制剂混合对南瓜实蝇蛹的致死中浓度 混合 时间/天 比例 回归方程 相关系数 致死中浓度(ml/L) 增效倍数 1d 1:0 Y=4.0524+1.0169X 0.9938 88.55 10:1 Y=4.0436+0.6112X 0.9948 50.53 1.75 3d 1:0 Y=4.4633+0.8394X 0.9965 43.59 10:1 0.9925 Y=4.5907+0.4138X 24.49 1.78 6d 1:0 Y=4.773+0.4688X 0.9999 30.30 10:1 Y=4.9384+0.4137X 0.9967 14.09 2.15 3.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇不同 虫态的毒力及增效倍数的测定 3.2.1 球孢白僵菌代谢粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇幼虫的 毒力及增效倍数测定 从表10、11中可以看出，油剂混合剂对南瓜实蝇幼虫杀虫活性随浓度的增 加而增加，且在高浓度下杀虫效果明显，单剂粗提物在1ml/L浓度下对南瓜实蝇 幼虫致死性最差，而在混合油剂的10ml/L浓度下致病性最好，第1d对其校正死 亡率达到(38.89?1.11)%，幼虫在第6d的时候死亡率都较高，高达(74.44?1.11)%。 由1,6d，致死中浓度逐渐减小，而增效倍数逐渐增大，增效倍数1d、3d、6d 分别为:1.46、1.49和2.17倍，可以看出在第6d时增效倍数大于2，增效达到 最佳时期。单剂与混合油剂的最小致死中浓度为3.34ml/L和1.54ml/L;最大为 38.6ml/L和26.4ml/L(表11)。 单剂处理第2d、3d、5d和6d在10ml/L与2ml/L和1ml/L处理之间在0.05 水平上有显著差异，而2ml/L和1ml/L处理之间差异不显著。 8 红河学院本科毕业论文 (设计) 表10 粗提物单剂对南瓜实蝇幼虫的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 2d 3d 4d 5d 6d 10 (28.89?1.11)a (42.22?1.11)a (55.56?1.11)a (58.89?1.11)a (62.22?1.11)a (64.44?1.11)a 2 (12.22?1.11)b (18.89?1.11)b (28.89?1.11)b (32.22?1.11)b (37.78?1.92)b (40.00?1.92)b 1 (6.67?0.00)c (15.56?1.11)b (23.33?1.93)b (28.89?1.11)c (35.56?2.22)b (37.78?1.11)b 表11 油剂混合剂对南瓜实蝇幼虫的毒力测定 混合浓累计校正死亡率/, 度1d 2d 3d 4d 5d 6d /(ml/L) 10 (38.89?1.11)a (47.78?2.22)a (61.11?1.93)a (67.78?2.22)a (72.22?1.92)a (74.44?2.22)a 2 (20.00?1.11)a (24.44?1.11)b (35.56?2.94)b (43.33?1.93)b (47.78?1.11)b (50.00?2.22)b 1 (16.67?1.93)b (22.22?1.11)c (32.22?1.11)c (38.89?1.11)c (44.44?1.11)b (46.67?1.11)b 表12 球孢白僵代谢粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇幼虫的致死中浓度 混合 致死中浓度增效倍数 时间/天 回归方程 相关系数 比例 (ml/L) 0.9981 38.60 1d 1:0 Y=4.4534+0.9310X 10:1 Y=4.7025+0.7672X 0.9922 26.40 1.46 3d 1:0 Y=5.1227+0.8905X 0.9939 7.28 10:1 Y=5.2324+0.7492X 0.9838 4.90 1.49 1:0 6d Y=5.3422+0.7186X 0.9757 3.34 10:1 Y=5.6304+0.7757X 0.9811 1.54 2.17 3.2.2 球孢白僵菌代谢粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇成虫的 毒力及增效倍数 油剂混合剂对南瓜实蝇成虫的累计校正死亡率，不同的浓度梯度下从第1, 6d中，随时间推移，呈上升趋势，其中2,4d死亡速率最快，之后增长缓慢， 油剂混合剂对南瓜实蝇成虫的校正累计死亡率大于单剂的校正累计死亡率。3个 浓度梯度在5%水平上除了第5d有差异外，其他时间段均无显著差异。单剂最高 浓度和最低浓度下到第6d时，其校正死亡率分别为(54.44?1.12)%和 (41.11?1.11)%，由表14知，油剂混合剂最高浓度和最低浓度下到第6d时， 9 结果与分析 其校正死亡率分别为(65.56?2.22)%和(44.44?1.93)%。随时间的推移，单和油剂混合剂对南瓜实蝇成虫的致死中浓度呈递减趋势，单剂在第1d、3d和6d后的致死中浓度分别为:71.74ml/L、48.73ml/L和4.31ml/L，混合剂致死中浓度分别为:37.19ml/L、18.06ml/L和1.56ml/L。增效倍数1d、3d、6d的分别为:1.93、2.70和2.76倍。 表13 粗提物单剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 2d 3d 4d 5d 6d 10 (25.56?1.11)a (27.78?1.11)a (40.00?1.11)a (48.89?1.11)a (53.33?1.11)a (54.44?1.12)a 2 (8.89?1.92)b (17.78?1.11)b (28.89?1.93)b (38.89?1.11)b (46.67?2.94)b (46.67?2.22)b 1 (7.78?1.11)b (14.44?1.11)b (26.67?1.11)b (34.44?1.93)b (38.89?1.11)c (41.11?1.11)b 表14 油剂混合剂对南瓜实蝇成虫的毒力测定 混合浓累计校正死亡率/, 度/1d 2d 3d 4d 5d 6d (ml/L) 10 (37.78?1.92)a (38.89?1.11)a (46.67?1.11)a (61.11?1.11)a (64.44?1.11)a (65.56?2.22)a 2 (23.33?1.11)b (25.56?1.93)b (35.56?1.93)b (46.67?1.11)b (52.22?1.93)b (54.44?2.22)b 1 (15.56?1.11)b (21.11?1.11)c (33.33?1.93)b (38.89?1.11)c (42.22?1.11)b (44.44?1.93)b 表15 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇成虫的致死中浓度 混合 致死中浓度增效倍数 时间/天 回归方程 相关系数 比例 (ml/L) 1d 1:0 Y=4.3131+0.8027X 0.9978 71.74 10:1 Y=4.6472+0.6195X 0.9872 37.19 1.93 3d 1:0 Y=4.7381+0.3808X 0.9917 48.73 10:1 Y=4.9081+0.0482X 0.9911 18.06 2.70 6d 1:0 0.9911 Y=5.1191+0.3262X 4.31 10:1 2.76 Y=5.4174+0.5180X 0.9828 1.56 10 红河学院本科毕业论文 (设计) 3.2.3 球孢白僵菌代谢粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇蛹的毒 力及增效倍数测定 单剂和油剂混合剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定如下表16、17所示:在1,6d 内，高浓度下死亡率高于低浓度下的死亡率，在浓度1ml/L、2ml/L下的毒力效 果不明显，在5%水平上差异不显著。到第6d时，浓度从高到低，单剂对南瓜实 蝇的校正累计死亡率为:(41.11?1.11)%、(28.89?1.11)%和(24.45?2.22)%，混合剂 由高到底的浓度对南瓜实蝇蛹的死亡率为:(47.78?2.22)%、(35.56?1.11)%和 (32.22?1.11)%，相比之下，油剂混合剂的防治效果显著优于单剂的防治效果。油 剂混合剂对南瓜实蝇蛹的毒力及增效倍数测定结果见表18，随时间的增长，致 死中浓度逐渐减小，增效倍数逐渐增大，混合剂在1d、3d和6d时的致死中浓度 分别50.65ml/L、22.72ml/L和12.01ml/L。混合剂的增效作用显著,增效倍数第1d、 ，增效倍数为1.75、1.92和2.52。(表18)。 3d和6d后 表16粗提物单剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定 累计校正死亡率/, 浓度/ (ml/L) 1d 4d 5d 2d 3d 6d 10 (16.67?1.11)a (22.22?1.11)a (30.00?2.22)a (34.44?1.11)a (36.67?1.93)a (41.11?1.11)a 2 (5.56?1.11)b (8.89?0.00)b (12.22?1.11)b (18.89?1.11)b (25.56?1.11)b (28.89?1.11)b 1 (2.22?1.11)b (4.44?0.00)c (8.89?1.11)b (12.22?2.22)c (20.00?1.92)b (24.45?2.22)b 表17 油剂混合剂对南瓜实蝇蛹的毒力测定 累计校正死亡率/, 混合浓度 /(ml/L) 1d 4d 5d 2d 3d 6d 10 (28.89?1.11)a (35.56?1.11)a (41.11?1.11)a (44.44?1.11)a (46.67?1.93)a (47.78?2.22)a 2 (12.22?2.22)b (18.89?1.11)b (25.56?1.11)b (32.22?2.22)b (34.44?1.11)b (35.56?1.11)b 1 (8.89?1.11)b (17.78?1.11)b (22.22?1.11)b (27.78?1.11b (31.11?1.11)b (32.22?1.11)b 11 结果与分析 表18 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合对南瓜实蝇蛹的致死中浓度 混合 致死中浓度增效倍数 时间/天 回归方程 相关系数 比例 (ml/L) 1:0 0.9938 88.55 1d Y=4.0524+1.0169X 10:10 Y=4.433+0.8047X 0.9972 50.65 1.75 1:0 3d Y=4.4633+0.8394X 0.9965 43.59 10:1 0.9972 Y=4.7917+0.8047X 22.72 1.92 1:0 6d 0.9999 Y=4.773+0.4688X 30.30 10:1 2.52 Y=4.9647+0.4436X 0.9953 12.01 12 红河学院本科毕业论文 (设计) 4.讨论 4.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒力及增效倍数的测定 在本试验中，利用一种球孢白僵菌通过发酵培养之后，提取其代谢粗提物中的有效成分，将有效成分制备成水剂剂型，再把稀释过的化学农药以1:10的比例混合，在稀释成不同浓度梯度对南瓜实蝇三种虫态进行毒力测定及增效倍数的测定。其结果从整体看:累计校正死亡率均随药后时间的推移和用药浓度的增大而逐渐增大;防治效果最佳时间都表现在2,4d,5,6d后还呈现较好的防治效果，但速率略缓慢一些;混合水剂对南瓜实蝇的不同虫态的累计校正死亡率均为幼虫,成虫,蛹，原因可能有两点:第一，本实验是将球孢白僵菌代谢物进行提取后用于杀虫，而以上文献报道的是用球孢白僵菌的孢子进行杀虫; [17]第二，两种药剂混合后进行处理，可能会改变药剂的稳定性。从而增效作用表现最为显著的是水剂混合剂对南瓜实蝇成虫，增效倍数最高达2.33倍。出现这结果的原因可能是将提取物制备成剂型后可以稳定其中的有效成分，提高药效作用。 4.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒力及增效倍数的测定 油剂混合剂对南瓜实蝇防治效果优于单剂，同时也优于水剂混合剂对南瓜实蝇的防治效果。单剂粗提物药后6d高浓度下对南瓜实蝇累计死亡率不高，这 [18]与李建庆等研究的白僵菌蛋白类代谢物对舞毒蛾毒性生测方法的研究中的结论可能存在相同原因，即白僵菌代谢物所含毒素种类多，含量不高，分离提取困难，在提取白僵菌代谢物过程中浓缩度不高，导致样品浓度较小，有效成分少而致。油剂混合制剂对南瓜实蝇不同虫态表现出来的最佳的防治效果是幼虫，主要原因可能是幼虫虫体体壁上没有蜡层等阻碍物，药剂很容易进入幼虫体内发生作用，从而达到更好的防治效果。而防治效果较差的是蛹，主要原因可能是蛹是围蛹，药剂进入体内受蛹外壁上的几丁质、蜡层等天然屏障阻挡，不容易进入体内发生作用。油剂混合制剂对南瓜实蝇不同虫态的防治效果比水剂混合制剂好，原因可能有:第一，真菌分泌代谢物中大部分有效成分是有机物质, [11]如毒素和酶，所以能更好地融入提取剂中，同时充分融入到食用油中，有效成分更具稳定性;第二，在处理过程中油剂中的药剂能形成均匀的油膜附在虫 13 讨论 体身上，能长时间保持药效不易散失。从油剂混合剂对南瓜实蝇三种虫态的增效作用看，呈现出成虫,蛹,幼虫的趋势，这与累积校正死亡率结果有一点差异。这两者并不矛盾，增效作用是在两种或两种以上的混合剂使用相对一种药剂使用的情况下的防治效果，单剂对蛹的防治效果差于混合制剂的防治效果， [19]这一结果与类似文献报道一致。混合药剂的防治效果总是优于单剂的，相对 [16]倍数的增加与混合比例有关系，不同比例混合结果不同，增效作用也不同。在实际生产中综合考虑增效倍数大小、生产成本高低及药剂剂型等情况，合理配制药剂比例很重要。 14 红河学院本科毕业论文 (设计) 5.结论 5.1 球孢白僵菌粗提物水剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒力及增效倍数测定 球孢白僵菌单剂在3种浓度梯度下对南瓜实蝇3种虫态都体现高浓度下防治效果最佳，并在相同处理时间和相同浓度下对南瓜实蝇不同虫态的累计死亡率不同，但随浓度的增大和药后时间的推延，对南瓜实蝇的成虫、幼虫和蛹的累计校正死亡率呈上升趋势。在第6d的10ml/L浓度下对南瓜实蝇矫正死亡率最大的是幼虫为(64.44?1.11)%，最小的是蛹为(41.11?1.11)%，相比之下，球孢白僵菌单剂对南瓜实蝇成虫和幼虫防治效果较好。高效氯氰菊酯和白僵菌代谢粗提物水剂混合对南瓜实蝇幼虫和蛹在第6d的10ml/L浓度下都高于单剂的，分别为(72.22?1.92)%和(46.67?1.11)%，并且在3,4d的时候死亡速率加快，缩短了药效时间。而随药用时间的推移，致死中浓度是减小的，混合剂浓度在药后6d时对南瓜实蝇成虫的致死中浓度最小，其次是幼虫，最大的是蛹。增效倍数随时间延长而增大，到第6d时为增效作用最显著的是成虫，增效倍数为2.33，对幼虫和蛹也具有一定增效作用，但体现出对成虫的增效作用最明显。 5.2 球孢白僵菌粗提物油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的毒力及增效倍数测定 球孢白僵菌油剂和高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇不同虫态的校正累计死亡率都普遍高于球孢白僵菌水剂和高效氯氰菊酯混合剂，油剂混合剂对幼虫、成虫和蛹的最高累计校正死亡率为(74.44?2.22)%、(65.56?2.22)%和(47.78?2.22)%，由此可知，球孢白僵菌油剂与高效氯氰菊酯混合剂对南瓜实蝇幼虫的防治效果最好，其次是成虫，最差的是蛹。混合油剂对南瓜实蝇不同虫态的致死中浓度和混合水剂对南瓜实蝇的致死中浓度都随时间的推移而减小，但在第6d时，球孢白僵菌粗提物单剂对南瓜实蝇蛹的致死中浓度最大，为30.03ml/L，其次是成虫的为4.31ml/L，而对幼虫的致死中浓度最小为3.34ml/L;油剂混合剂对单剂具有增效作用，增效倍数从药后1d、3d和6d都逐渐增大，对成虫的增效倍数最大，为2.76倍;对幼虫增效倍数最小，为2.17倍。 15 红河学院本科毕业论文 (设计) 参考文献 [1] 安坤鹏,吴宝锋,申科,等.南瓜实蝇特性及防治技术的研究进展[J].中山大学昆虫学研究所,2011,20(3):7-12. 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