郑州市女性HPV感染状况及基因型的分布情况调查

郑州市女性HPV感染状况及基因型的分布情况调查 郑州市女性HPV感染状况及基因型的分布 情况调查 中外医学研究2012年2月第10卷第5期CHINESEANDFOREIGNMEDICALRESEARCH j:查'研乡蓦磐黪?绔?t露势譬曩季?囊警?鍪?雾?嚣薯嘉j雩?碧?爱嚣季?穗叠镬一穗劳簦善!季嚣露 郑州市女性HPV感染状况及基因型的分布情况调查 闫琛杨广英 郑州人民医院(河南郑州450003) 【摘要】目的探讨郑州市妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染的状况和基因型的分布情况,为宫颈癌防治提供理论依据.方法采 用SPR生物传感器对郑州市1192位女性进行HPVDNA分型检测,并对各亚型的感染情况进行统计分析.结果1192位女性中共检 出HPV阳性者309例,阳性率25.9%,46.9%的HPV阳性者年龄20,29岁;高危型占84.0%,以HPV16,HPV58,HPV52和HPV35型 为主;低危型占16.O%,以HPV11和HPV6型多见;单一感染为227例,占73.5%;多重感染82例,占26.5%.结论SPR生物传感器 一 次检测24种HPV亚型,能判断患者是否为持续感染,对有效防治宫颈癌前病变,降低宫颈癌的发病率有重要意义. VDNA分型;SPR生物传感器 【关键词】宫颈癌;HP InvestigationofinfectionandgenotypeofHPVinZhengzhouYANChen,YANGGuang—ying.ThePeople'sHospitalZhengzhou, Zhengzhou450003,China 【Abstract】ObjectiveTodetectandanalyzeinfectionandthegenotypeofhumanpapillomavirus(HPV)i ntheareaofZhengzhou,and toprovideatheorybasisfortherapyandpreventionagainstcervicalcancer.MethodsTotally1 192samplesselectedfromwomenofZhengzhou weredetectedforHPVDNAgenotypesbysul~aceplasmaresonance(SPR)biosensor.Result sTheHPV—positiveratewas25.9% (309/1192),46.9%(145/309)oftheHPV— positivewomenwerethewomenwhoseagewerebetween20and29.Therateofhigh— riskHPV andlow—riskHPVwere84.0%and16.0%respectively.Themajorgenotypesofhigh— riskHPVwereHPV16,HPV58,HPV52,andHPV35; andthemajorgenotypesoflow— riskHPVwereHPV11andHPV6.TherateofsingleinfectionwithHPVwas73.5%(227/309), andtherateof multipleinfectionswas26.5%(82/309).ConclusionSPRbiosensorcandetect24HPVsubty pes,anditcanjudgewhetherthepatientisper- sistentinfectionornot.Soitwillplayanimportantroleinpreventingpre— cancerpathologicalchangesincervix,andreducingtheincidencerate ofcervicalcancer. 【Keywords】Cervicalcancer;HPVDNAGenotyping;SPRbiosensor 宫颈癌是世界范围内女性的第二大常见恶性肿瘤,发病率仅 次于乳腺癌.近年来,宫颈癌在中国的发生呈现明显上升和年轻 化的趋势,发病率以每年2%,3%的速度增长….现已证实,导 致女性宫颈癌和子宫颈上皮内瘤变(CIN)发生的关键因素是高 危型人乳头瘤病毒(humanpapillomaviruses,HPV)的持续感 染J.HPV是一组无包膜的双链DNA病毒,可引起人类皮肤和 黏膜组织良性及恶性肿瘤,现已发现100多种不同的亚型,根据 其特异性,相对风险及其流行病学分布,分为高危型和低危型,其 中可以感染人类生殖器官的亚型超过35种,与女性宫颈癌相关 的大约有3O种. 目前,应用最普遍的HPVDNA检测方法是第二代杂交捕获 技术(HC—II),但其无法实现分型检测,故无法判断患者是否为 持续感染.面等离子共振(surfaceplasmonresonance,SPR)生 物传感器是分子生物学与光学,电化学,微电子学等相结合的产 物,其以基因芯片为基础,通过检测共振角(SPR角)的变化反映 基因芯片表面的生物分子间相互作用的情况,可以同时检测16 种高危型和8种低危型. 为了解郑州市女性HPV的感染情况以及HPV不同亚型的 分布情况,为郑州市宫颈癌的防治工作提供重要的理论依据,本 研究基于SPR技术的基本检测原理,应用SPR生物传感器这种 崭新的HPVDNA分型检测方法,对1192位郑州市的女性进行 HPVDNA分型检测,现将检测结果报道如下. 通讯作者:杨广英 -—— 64?-—— 1资料与方法 1.1一般资料2010年9月,2011年9月随机选取郑州市女 性1192位,年龄大多数集中在20,6O岁,最小18岁,最大65岁, 平均33.11岁.每例均检测HPV24个亚型. 1.2主要试剂用于刷取宫颈处的表皮脱落细胞的专用采样 刷,HPV基因扩增分型检测试剂,HPV分型基因芯片和SPR平台 均由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供. 1.3方法取1ml细胞悬液加入离心管内,12000r/min离心 5min,弃去上清,用1ml细胞洗涤液洗涤细胞,12000r/min离心 , 5min,加入200DNA快速裂解提取液,95?水浴15rain后12000r/rain离心3min,吸取上清液5l加入到PCR反应体系 中按照扩增条件进行扩增(每次均设有阳性对照),取20阳性 对照扩增产物和60杂交缓冲液加入每个扩增反应管内,置水 浴锅或PCR仪中95?变性5rain后,开始杂交,杂交过程在 W2600型SPR平台上进行.HPV分型芯片可同时检测24种亚 型(高危型:16,l8,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68 型;低危型:6,1I,40,42,43,44,54和7O型). 2结果 2.1HPV感染及年龄分布情况在I192例样本中共检出阳性 309例,检出率为25.9%.在309例阳性病例中,145例的年龄分 布在20,29岁,占46.9%,结果见表1. 2.2基因分型检测结果高危型占84.0%,以HPVI6,HPV58, HPV52和HPV35型为主;低危型占16.0%,以HPV11和HPV6 型多见;HPV40和HPV44型未检出.结果见表2. 中外医学研究2012年2月第10卷第5期CHINESEANDFOREIGNMEDICALRESEARCH 蓦臻嚣嚣臻咎?磐强露嚣彰嚣?蘑咎!磐瑶?弦誊誊季爱彰露雾露磐?碧良孽t彰势磐辨强蔼势雾黪?簦 表1HPV感染年龄分布情况 表2HPV各亚型感染及构成情况n(%) 2.3亚型多重感染情况309例阳性病例中单一感染227例,占 73.5%;多重感染82例,占26.5%,以二重感染为主,这其中又以 高危型和混合型多见,结果见表3. 表3HPV多重感染情况n(%) 3讨论 高危型HPV的持续性感染是宫颈癌发生的关键因素,HPV 是目前人类所有癌症病变中比较明确的致病因子,宫颈癌也是少 有的已经明确病因的肿瘤之一_3j.据文献报道,目前HPV的 感染率在女性人群中高达20%,46%_6J.因此,进行HPVDNA 检测对尽早发现宫颈癌前病变,提示其转归,给予早期干预,减少 宫颈癌的发病率及死亡率均有非常重要的意义. 基于HPVDNA检测的临床指导意义及经济价值,探索 HPVDNA的检测方法成为国内外研究的热点.目前,HPVDNA 的检测方法有多种,如聚合酶链式反应(polymerasechainreac— tion,PCR)法,印迹法J,原位杂交技术,基因测序法等.其 中HC一?技术是目前应用于临床宫颈样本的最普遍的方法,但 其无法实现分型,故无法判断患者是否为持续感染. 本研究采用北京金菩嘉医疗科技有限公司提供的HPV核酸 扩增分型检测试剂盒和W2600型SPR技术平台,同时检测16种 高危型和8种低危型.与上述检测方法相比,该技术具有突出的 优点:(1)可实现多通量一次性分型检测,不仅可以检测出多重 感染,而且可以判断是否为持续感染;(2)阴,阳性对照和待测样 品的DNA在同一反应体系中杂交,可以对结果进行很好地监控 分析,避免假阴性或假阳性的出现;(3)无需标记,不仅简化了操 作程序,稳定了检测效果,节约了成本,而且避免了放射性标记元 素对人体的损害;(4)整个操作过程无需反复洗涤,具有很高的 封闭性,大大降低了污染的可能性;(5)性能稳定,重复性好,具 有很高的灵敏度和阴性预测值"].因此具有很高的临床应用 价值. 本研究以郑州市1192例女性为研究对象进行HPVDNA分 型检测,结果显示总阳性率为25.9%,在309位感染HPV的女性 中,46.9%的女性年龄20,29岁.在妇女人群中HPV感染的高 峰年龄段在3O岁以前,但该年龄阶段的感染多为暂时性感染,一 般可在8,10个月之内消失;虽然30岁后的女性所占的比率有 所下降,但多为高危型HPV的持续感染,将有更高的风险患上宫 颈癌.因此,定期对这些女性进行HPVDNA分型检测十分必要. HPV基因型的分布具有地域特征,目前世界范围内最常见 的亚型为HPVI6,感染率为5l%,欧洲地区以HPV16,HPV31和 HPV18型为主,南美地区以HPV16,HPV58和HPV18型为主,亚 洲地区以HPV16,HPV18和HPV33型为主[1.林广玲等?研 究发现粤东地区位于前5位的亚型分别为HPV16,HPV18, HPV58,HPV33和HPV73型,香港地区感染率最高的是HPV16 和HPV18型14j.本研究中高危型以HPV16,HPV58,HPV52和 HPV35型为主;低危型以HPV11和HPV6型多见;HPV40和 HPV44型未检出.提示在郑州市除HPV16型外,HPV58,HPV52 和HPV35型也是很重要的致病型别,与其他研究结果相符. 但是,本研究中HPV18型感染率较低,仅占3.1%,较其他报道 低,这可能与地区分布差异和样本量有关. 近年来,HPV多重感染与宫颈病变的关系逐渐受到大家的 关注,但结论不尽一致.有学者认为,与单一感染相比,HPV多 重感染与宫颈癌和癌前病变的相关性并未增高,它们导致宫颈癌 的危险性并没有统计学意义';但也有学者认为HPV多重感 染是宫颈高级别病变发生的一个显着的危险因素D8],而且HPV 多重感染可降低宫颈癌患者的放疗效果和存活率.本研究显 示309例阳性病例中多重感染82例,占26.5%,主要为二重感 染,以高危型和混合型多见.本研究初步分析了HPV多重感染 的情况,笔者也将其与宫颈病变的关系作为以后研究的重点. 从感染HPV到发生宫颈癌的时间约为1.5—5年.因此,笔 者有足够的时间发现并采取相应的阻断这一过程,HPV DNA的检测也成为筛查宫颈癌的主要手段,了解HPV感染的情 况及HPV亚型的分布,对发现HPV感染的高危人群,对其进行 积极控制和有效治疗,以降低宫颈癌的发生率具有重要意义,也 对HPV疫苗的研制和应用,宫颈癌的早期诊断,预测病变进展和 指导治疗有重要价值. 参考文献 [1]赵文辉,乔有林.宫颈癌及其癌前病变筛查方法现状[J].中 国医学科学院,2001,23(6):638. [2]WalboomersJM,JacobsMV,ManosMM,eta1.Humanpapilloma— viresisanecessarycauseofinvasivecervicalcancerworldwide [J].Pathol,1999,189(1):12—19. [3]CampionMJ,CuzickJ,McCanceDJ,eta1.Progressivepotentialof 一 65— 调查研究中外医学研究2012年2月第10卷I- mildcervicalatypia:Prospectivecytologica,lcolposcopic,andvir- ologicstudy[J].Lancet,1986,2:237—240. [4]Damasus—AwataiG,Freeman—WangT.Humanpapillomavirus andcervicalscreening[J].CurrentOpinioninObstetricsandGy— necology,2003,15(6):473—477. [5]HausenH.Cervicalcarcinomaandhumanpapillomavirns:onthe roadtopreventingamajorhumancancer[J].JNatlCancerlnst, 2001,93(4):252—253. [6]MeiselsA,FortinR,RoyM.Condylomatouslesionsofthecervix 1Icytologic,colposcopicandhistopathologicstudy[J].Actacy— tol,1977,21(3):379—390. f7]InfantolinoC,FabfisP,lnfantolinoD,eta1.Usefulnessofhuman papillomavirustestinginthescreeningofcervicalcancerprecur- sorlesions:aretrospectivestudyin314cases[J].European JournalofObstetrics&GynecologyandReproductiveBiology. 2000,93(1):71—75. [8]NubiaMufioz,F?XavierBosch,SilviadeSanjos6,eta1.Epidemi— ologicclassificationofhumanpapillomavirustypesassociatedwith cervicalcancer[J].TheNewEnglandJournalofMedicine,2003, 348:518—527. [9]HuangSL,ChaoA,HsuchS,eta1.ComparisonbetweentheHy— bridCaptureIITestandanSPF1/GP6+PCR—BasedAssay forDetectionofHumanPapillomavirnsDNAinCervicalSwab Samples[J].JournalofClinicalMicrobiology,2006,44(5): 1733—1737. [10]周明书,余兰,任国庆,王树玉.应用表面等离子共振生物传 感器分型检测HPV及其应用评价[J].中国优生与遗传杂 志,2010,18(1):19—22. [11]黄杰,曲守方,包蕾.人乳头瘤病毒基因分型检测方法进展 [J].药物分析杂志,2010,30(8):1562—1566. [12]CliffordGM,GallusS,HerreroR,eta1.Worldwidedistributionof humanpapillomavirustypesincytologicallynormalwomeninthe InternationalAgencyforResearchonCancerHPVprevalence 第5期CHINESEANDFOREIGNMEDICALRESEARCH surveys:apooledanalysis[J].Lancet,2005,366(9490):991— 998. [13]林广玲,翁建盛,林小荣,等.粤东地区妇女下生殖道HPV亚 型的基因芯片检测与分析[J].江西医学检验,2006,24(4): 303—305. [14]L0K,WongTF,ChanMK,eta1.Prevalenceofhumanpapillo— mavirusincervicalcancer:amuhicenterstudyinChina[J].Int JCancer,2002,100(3):327—331. [15]HuangS,AfoninaI,MillerBA,eta1.Humanpapillomavirus types52and58areprevalentincervicalcancersfromChinese women[J].InternationalJournalofCancer,1997,70: 408—4l1.' [16]AnHJ,ChoNH,LeeSY,eta1.Correlationofcervicalcarcinoma andprecancerouslesionswithhumanpapillomavims(HPV) genotypesdetectedwiththeHPVDNAchipmicroarraymethod [J].Cancer,2003,97(7):1672—1680. [17]KayP,SoetersR,NevinJ,eta1.HighprevalenceofHPV16in SouthAfricanwomenwithcancerofthecervixandcervicalin— traepithelialneoplasia[J].JournalofMedicalVirology,2003,71 (2):265—273. [18]SpinilloA,GardellaB,RoccioM,eta1.Muhiplehumanpapillo— mavirusinfectionandhighgradecervicalIntraepithelialNeo— plasiaamongwomenwithcytologicaldiagnosisofatypicalsqua— mouscellsofUndeterminedsignificanceorlowgradesquamous intraepitheliallesions[J].Gynecologic()neology,2009,113: 115—119. [19]BachtiaryB,ObermairA,DreierB,eta1.Impactofmultiple HPVinfectiononresponsetotreatmentandsurvivalinpatients receivingradicalradiotherapyforcervicalcancer[J].Interna— tionalJournalofCancer,2002,102(3):237—243. 【收稿日期】2011—12—26 大连开发区中小学校及幼儿园饮用水水质 检验结果调查分析 孙健刘鹏春陆明 大连市开发区疾病预防控制中心(辽宁大连116600)沈阳市东陵区疾病预防控制中心 【摘要】开发区作为大连的先导区,外来人口多,还有不少外籍人士的子女都在这里读书,做好后勤工作,展示先导区形象.对全 区部分中小学及幼儿园的饮用水按照《生活饮用水为生规范》进行抽样分析,部分学校的饮用水不符合《生活饮用水卫生规范》的要 求,铁,锰,细菌总数,大肠菌群等超标,学校饮用水的安全问不容忽视. 【关键词】中小学校;饮用水;水质检验;调查分析 对2004—2006年笔者所在区的幼儿园及中小学355份水样况,并提出针对性的建议. 进行检查总结分析,以了解本地区的幼儿园及中小学校的饮水情 一 66—