银黄口服液生产工艺研究

银黄口服液生产工艺研究 银黄口服液小试试验 一、实验目的:综合考虑影响银黄口服液的稳定因素和含量、pH值的要求，以及生产成本等因素寻找最佳的生产工艺。 二、实验方案:采用传统正交法优先成品的绿原酸的含量、pH值的最佳条件，考虑影响因素有金银花提取工艺、绿原酸投料量、配制液pH值、柠檬酸钠用量、灭菌，根据各因素的取值范围和及实验要求设计成4水平5因素水平表，具体见表: 因素水平表(表1) 金银花 绿原酸 配制液 柠檬酸钠 因素水平 灭菌方法 提取工艺 投料量(g/L) pH值 用量(g/L) 1 饮片水提 2.4 5.5 0 不灭菌 2 饮片80?温浸 3.4 5.8 2.94 辐照灭菌 3 饮片60?温浸 4.8 6.0 14.7 100?，30min 4 提取物 6.8 7.2 29.4 100?，20min 三、实验方法: 1、饮片水提:将金银花中药饮片采用热投的方法(即先将饮用水煮沸，再将中药饮片投入进去),分两次微沸，第一次加10倍饮用水，微沸2小时;第二次加10倍饮用水，微沸1小时。(饮片投入量根据金银花中药饮片绿原酸含量按提取率为30%计算投料) 2、饮片80?温浸:将金银花中药饮片分两次温浸，第一次加10倍饮用水，加热至80?时后温浸2小时，第二次加10倍饮用水，加热至80?时后温浸1小时。(饮片投入量根据金银花中药饮片绿原酸含量按提取率为30%计算投料) 3、饮片60?温浸:将金银花中药饮片分两次温浸，第一次加10倍饮用水，加热至60?时后温浸2小时，第二次加10倍饮用水，加热至60?时后温浸1小时。(饮片投入量根据金银花中药饮片绿原酸含量按提取率为30%计算投料) 4、提取物:直接使用金银花提取物进行配制，金银花提取物投入量按实际检测的绿原酸含 10倍饮用水 10倍60?饮用水 量计算投料。 5、生产工艺: 药渣 60?温浸1小时 温浸2小时 金银花饮片 中药材 (弃掉) 提取液 提取液 金银花提取物 合并离心过滤 低温浓缩 (冷藏备用) 纯化水 黄芩提取物 热水溶解 离心过滤1 混合均匀 离心过滤2 8%NaOH (粗配液) 调节pH值 中间品检测 瓶子 山梨酸钾、蔗糖溶解加入(PH值、密度) (用灌封退回的) 柠檬酸钠溶解加入混混合液中 合液中 灌封 灭菌 银黄工艺处方:(100ml) 物料名称 金银花提液 黄芩提取物 蔗糖 山梨酸钾 柠檬酸钠 氢氧化钠 数量 适量 2.8g 10g 0.13 g 适量 适量 方案一(1-1-2-2-1): 金银花水提，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 方案二(1-1-2-2-3): 金银花水提，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 注:方案一和方案二各制得100ml，即取用51.6g的金银花中药饮片(3.1%)用水提方法提取，一起配制成200ml，最终分装成20支，10支100?灭菌30min，10支不灭菌。 方案三(2-1-2-2-1): 金银花80?温浸提取，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 方案四(2-1-2-2-3): 金银花80?温浸提取，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 注:方案三和方案四各制得100ml，即取用51.6g的金银花中药饮片(3.1%)用80?温浸提取方法提取，一起配制成200ml，最终分装成20支，10支100?灭菌30min，10支不灭菌。 方案五(3-1-2-2-1): 金银花60?温浸提取，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 方案六(3-1-2-2-3): 金银花60?温浸提取，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案七(3-2-2-1-1): 金银花60?温浸提取，投入3.4g/L，不添加柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 方案八(3-2-2-1-3): 金银花60?温浸提取，投入3.4g/L，不添加柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案九(3-2-2-2-3): 金银花60?温浸提取，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案十(3-1-2-2-3): 金银花60?温浸提取，投入4.8g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案十一(3-4-2-2-3): 金银花60?温浸提取，投入6.8g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 注:方案五至方案十一各制得100ml，即取用286g的金银花中药饮片(3.1%)用60?温浸提取方法提取，提取液量用总体积，最后再按相应投料量分配，各方案配制成100ml，分别分装成10支。 方案十二(4-1-1-1-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入2.4g/L，不添加柠檬酸钠，配制液调节至 5.5，灭菌30min的样品 方案十三(4-1-1-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.5，灭菌30min的样品 方案十四(4-1-2-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入2.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案十五(4-2-1-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，不添加柠檬酸钠，配制液调节至5.5，灭菌30min的样品 方案十六(4-2-2-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案十七(4-2-3-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至6.0，灭菌30min的样品 方案十八(4-2-4-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至7.2，灭菌30min的样品 方案十九(4-2-2-3-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加14.7g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案二十(4-2-2-4-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加29.4g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案二十一(4-2-2-2-1): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 方案二十二(4-2-2-2-2): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，辐照灭菌的样品 方案二十三(4-2-2-2-4): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入3.4g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，100?灭菌20min的样品 方案二十四(4-3-2-2-3): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入4.8g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，灭菌30min的样品 方案二十五(4-3-2-2-1): 使用金银花提取物加1/3量的纯净水溶解，投入4.8g/L，添加2.94g/L柠檬酸钠，配制液调节至5.8，不灭菌的样品 注:1、方案16、21、22、23是比较不同灭菌条件的灭菌效果及产品的稳定性。 2、方案13、14、16、17、18是比较配制液的pH值不同时对产品的稳定性作用大小。 3、方案16、19、20是比较不同柠檬酸钠的添加量对产品的稳定性作用大小。 4、方案12、13是比较添不添加柠檬酸钠对产品的稳定性(pH值和含量)作用大小。 5、方案24、25是比较当金银花提取物添加量为药典处方量的2倍时，产品的稳定性(pH值和含量)，灭菌前后的变化。 四、样品检测分析: 、绿原酸检测测方法:色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充1 剂;以乙腈-0.4%磷酸溶液(10:90)为流动相;检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 2、黄芩苷检测测方法:色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(50:50:0.2)为流动相;检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中,加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷50μg)。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 成品检测结果 金银花 绿原酸投配制液 柠檬酸钠 灭菌绿原酸 黄芩苷 方案 提取工艺 料量(g/L) pH值 用量(g/L) 方法 pH值 (mg/ml) (mg/ml) 一 1 1 2 2 1 5.71 6.73 19.80 二 1 1 2 2 3 5.44 5.14 20.53 三 2 1 2 2 1 5.67 7.62 21.05 四 2 1 2 2 3 5.85 5.46 20.25 五 3 1 2 2 1 5.69 7.43 19.61 六 3 1 2 2 3 5.51 6.39 19.05 七 3 2 2 1 1 5.72 10.38 19.46 八 3 2 2 1 3 5.47 8.12 19.24 九 3 2 2 2 3 5.45 8.82 19.63 十 3 1 2 2 1 5.40 10.87 18.40 十一 3 1 2 2 3 5.33 15.73 19.43 十二 4 1 1 1 3 5.32 2.01 20.92 十三 4 1 1 2 3 5.37 2.37 21.16 十四 4 1 2 2 3 5.43 2.21 19.93 十五 4 2 1 2 3 5.35 2.97 18.54 十六 4 2 2 2 3 5.63 2.83 20.81 十七 4 2 3 2 3 5.83 2.85 19.92 十八 4 2 4 2 3 6.83 1.81 19.12 十九 4 2 2 3 3 5.71 2.42 20.01 二十 4 2 2 4 3 5.73 2.07 19.99 二十一 4 2 2 2 1 5.66 3.37 20.30 二十二 4 2 2 2 2 5.60 3.20 20.28 二十三 4 2 2 2 4 5.62 2.98 20.89 二十四 4 3 2 2 3 5.69 3.73 19.54 二十五 4 3 2 2 1 5.60 4.54 19.44 五、结论: 1、分析比较方案一、三、五实验数据，中药饮片提取方法提取率分别为84%、95%、93%，由此可见，采用饮片80?温浸提取方法提取率最高，同时考虑到大生产中提取液的浓缩温度为60~80?，由于绿原酸的热稳定性不好，所以浓缩中温度60~80?不会影响提取率，所以金银花的最佳提取工艺为:将金银花中药饮片分两次温浸，第一次加10倍饮用水，加热至80?时后温浸2小时，第二次加10倍饮用水，加热至80?时后温浸1小时。 2、分析比较方案六、九、十、十一、十四、十六、二十四等实验数据，绿原酸投料量与最终产品绿原酸含量比例系数，可以得出绿原酸的投料量越大最终绿原酸含量比例系数越小，即绿原酸的投料量越大，在制剂过程中的损失率越大。 3、分析比较方案十三、十四、十五、十六、十七、十八等实验数据，配制液的pH值越高，制剂过程中绿原酸的损失率越大，但实验过程中发现配制过程中，当pH值低于5.5时黄芩提取物溶解性较差，而制得成品后pH值在5.3~5.5时比较稳定，由于考虑到《2010版中国药典》中银黄的质量为5.5~7.0，所以配制过程中，配制液的pH值控制在5.8~6.0时绿原酸的利用率较高。 4、分析比较方案十六、二十一、二十二、二十三等实验数据，比较不同灭菌条件的灭菌效果及产品的稳定性，绿原酸灭菌损失率分别为:5.04%、17.82%、17.51%，以此看来绿原酸的热稳定性较差，三种灭菌后的产品细菌检测均合格，相对来说Co60辐照灭菌绿原酸有效成份损失较小，但成本较高而且需要送到外面去灭菌操作不方便;100?流通蒸汽灭菌20min和30min有效成份损失差别不大，故生产可行的方法可选择100?流通蒸汽灭菌30min。 5、分析比较方案七、八、九及方案十二、十三等实验数据，可以看出添加柠檬酸钠缓冲剂有利于pH值和绿原酸有效成份的稳定，不添加柠檬酸钠缓冲剂灭菌前后绿原酸损率为21.77%，添加柠檬酸钠缓冲剂灭菌前后绿原酸损率为15.03%。 6、分析比较方案十六、十九、二十等实验数据，可以看出柠檬酸钠pH值缓冲剂的分别为0.01M、0.05M、0.1M对产品的pH值的稳定有明显效果，含量越高pH值缓冲效果越好，但对绿原酸的含量影响不是很理想，相反柠檬酸钠的添加量过高反而最终成品的绿原酸含量 偏低，所以相对来说柠檬酸钠pH值缓冲剂最佳浓度为0.01M。、 7、分析以上正交实验数据，黄芩甲苷含量在18.5~21.1mg/ml，由此可以看出各影响因素对 黄芩甲苷含量的影响较小。