昆明种小鼠不同取材部位嗜多染红细胞与成熟红细胞比值差异的研究

昆明种小鼠不同取材部位嗜多染红细胞与成熟红细胞比值差异的研究 昆明种小鼠不同取材部位嗜多染红细胞与 成熟红细胞比值差异的研究 ? 34? ? 基础研究? 山西医药杂志2006年1月第35卷第1期shan』,』竺 昆明种小鼠不同取材部位嗜多染红细胞与 成熟红细胞比值差异的研究 山西省疾病预防控制中心(030012) 李国华边林秀李学敏 微核实验是检测细胞遗传损伤的常用实验方法之一.小鼠股骨头组,雌性小鼠股骨腔组,雄性小鼠股骨头组和雄 按微核形成的原理,只有进行分裂的细胞,在染色体断裂剂性小鼠股骨腔组的PCE/NCE值的平均数分别为1.72, 的作用下,才能产生并检测到微核,因此,剂量是否合2.58,2.29和3.06,经单因素方差分析,各组之问差异无统 理是能否检出染色体断裂剂的关键,如果剂量设计过高,受计学意义(F=2.33,P=0.0906).各组的成熟红细胞数计 试物质抑制了骨髓细胞的增殖,则会出现假阴性.实验动数结果及PCE/NCE值见表l. 物骨髓中嗜多染红细胞(PCE)/成熟红细胞(NCE)值的大表1各组成熟红细胞数计数结果及 小是用来判断骨髓细胞分裂是否受到抑制的指标之一,通嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(j?s) 常计数200个嗜多染红细胞,同时计数所见到的成熟红细 胞数,求出PCE/NCE值.但该比值的大小是否受取材部 位的影响,目前尚未见报道.本研究对正常昆明种小鼠股 骨头和股骨腔两个取材部位的PCE/NCE值进行比较,以 期为确定PCE/NCE的界值,准确判断骨髓细胞分裂 是否受到抑制提供参考依据. 1和方法 1.1实验材料:普通级昆明种小鼠20只,体重25,30g, 雌雄各半,由山西医科大学实验动物中心提供,动物合格证 号为医动字第070102号.动物合格证号为SYXK (晋)2003—0003号.饲养环境温度为18,20?,相对湿度 为50%,55%. 1.2方法:以颈椎脱臼法处死小鼠,取出一侧股骨,擦净血 污,用剪刀将其剪成3段,用止血钳将股骨头侧的骨髓液挤 出与玻片一端的小牛血清混匀,常规涂片;再用小牛血清冲 洗中段股骨的骨髓腔制成细胞悬液,常规涂片.涂片自然 干燥后放入甲醛中固定5min,取出放入Giemsa染液中,染 晾干,贴好标签备 色18min.立即用磷酸盐缓冲液冲洗, 检. 1.3观察项目:油镜下每张涂片计数200个嗜多染红细 胞,同时计数所见成熟红细胞数,计算嗜多染红细胞与成熟 红细胞的比值. 1.4统计学处理:采用Excel软件对雌性小鼠股骨头组, 雌性小鼠股骨腔组,雄性小鼠股骨头组和雄性小鼠股骨腔 组的成熟红细胞数和PCE/NCE值分别进行单因素方差分 析.结果用?S表示. 2结果 经检测发现雌性小鼠股骨头组,雌性小鼠股骨腔组,雄 性小鼠股骨头组和雄性小鼠股骨腔组的成熟红细胞平均数 分别为146.9,103.7,104.3和82.7,经单因素方差分析, 各组之间差异无统计学意义(F=1.61,P=0.2047);雌性 3讨论 在选用骨髓细胞嗜多染微核实验检测染色体断裂剂 时,为了避免假阴性的出现,剂量设计非常重要.如果受检 物质剂量设计过高,抑制骨髓细胞增殖时,检测到微核的前 提条件已经不存在.判断骨髓细胞是否受到抑制的一个常 用指标是观察骨髓细胞中PCEANCE值,当骨髓细胞增殖 受到抑制时,外周血大量进入骨髓,会使PCE/NCE值下 降.一般认为,当PCECE值降到0.1或以下时,提示骨 髓细胞增殖已经受到抑制.卫生部《消毒产品实验规范》中 采用的即是此标准,即当PCE/NCE值下降到0.1或以下 时,则认为受检物质已对骨髓产生了明显的抑制作用,应降 低受检物质的剂量,重新进行试验.而卫生部《保健食品安 全性毒理学评价规范》中对PCE/NCE值的判断标与 之有所不同,它要求受检物质组的PCE/NCE值不应少于 对照组的20%.本次实验正常昆明种小鼠的检测结果 3.06,且股骨头和股骨腔两个部位 PCE/NCE值为1.72, 问差异无统计学意义,与0.1的界值标准不尽吻合.认为 由于动物种属及地域等因素存在差别,实验过程中不同操 作者因手法不同也会对结果产生一定的影响.因此,在判 断骨髓细胞增殖是否受到抑制时,参照对照组的结果来确 定较为客观. (收稿日期:2005—09—06) 作者简介:李国华,女,1962年5月生,副主任医师,山西省 疾病预防控制中心,030012