硫辛酸削弱大豆β-伴大豆球蛋白诱导的断

硫辛酸削弱大豆β-伴大豆球蛋白诱导的断 豆丁网与论文: 硫辛酸削弱大豆β-伴大豆球蛋白诱导的断 乳大鼠过敏反应 韩鹏飞，马曦，尹靖东 5 ,中国农业大学动物科技学院, 摘要:本研究的目的是使用大 鼠模型评估添加小剂量硫辛酸对大豆β-球蛋白诱导过敏反应 的抑制作用～选用卵清蛋白为 阳性过敏对照。48 只刚断奶的雄性 SD 大鼠随机分配到四个组～ 喂养玉米淀粉-酪蛋白为主 的基础日粮～其中第四组饲料中添加 25 毫克/千克硫辛酸。在第 1～ 10 10～17 和 24 天～第三组和四组胃内灌胃 20 毫克β-伴大豆球蛋白致敏～第二组是 20 毫克 卵清蛋白致敏～第一组,对照组,为酪蛋白。在第 31 天～大鼠分别灌胃双倍剂量的β–伴 大豆球蛋白～卵清蛋白或酪蛋白。卵蛋白致敏大鼠,第二组,～β-伴大豆球蛋白致敏大鼠 ,第三组,表现出血清 IgE 和组胺释放增加～但不造成生长性能下降,P < 0.05,。低剂量 硫辛酸对平均日增重没有影响～但增加空肠绒毛高度,P < 0.05,～同时降低血清β -球蛋 15 白特异性 IgE 和空肠组胺含量。此外～补充硫辛酸对干扰素-γ或白细胞介素- 4 没有显著影 响。本研究表明～低剂量的硫辛酸可能被用于作为免疫调节剂～以减轻大豆β-伴大豆球蛋 白诱发过敏。 关键词:动物营养～过敏性腹泻～β-伴大豆球蛋白～硫辛酸 中图分类号:S816.7 20 Lipoic acid attenuates soybean β-conglycinin-induced anaphylactic reactions in rats HAN Pengfei, MA Xi, YIN Jingdong (College of animal science and technology, China Agricultural University, Beijing, P.R. China) 25 Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effects of feeding a low dose of lipoic acid on attenuating soybean β-conglycinin-induced hypersensitivity using a rat model, with ovalbumin as the positive allergic control. Forty-eight recently weaned male Sprague-Dawley rats were assigned to four treatments and fed a cornstarch-casein-based diet either unsupplemented (Groups I, II and III) or supplemented with 25 mg/kg lipoic acid (Group IV). On days 1, 10, 17, and 24, 30 Groups III and IV were sensitized with 20 mg β-conglycinin by means of intragastric gavage, while Group II was sensitized with 20 mg ovalbumin and Group I (control) with casein. On day 31, rats received a double dose of β-conglycinin, ovalbumin or casein, respectively. Ovalbumin-sensitized rats (Group II) and β-conglycinin-sensitized rats (Group III) demonstrated an increase in serum IgE and histamine release, but reduced growth performance compared to the 35 control (Group I) (p < 0.05). A low dose of lipoic acid had no effect on average weight gain, but increased villus height in the jejunum (p < 0.05), while reducing serum β-conglycinin-specific IgE and histamine content in the jejunum. Moreover, lipoic acid supplementation did not significantly affect interferon-γ or interleukin-4. Taken together, our results suggest that a low dose of lipoic acid could potentially be used as an immunomodulator to attenuate soybean β-conglycinin induced 40 allergies. Key words: Animal nutrition, anaphylactic diarrhea, β -conglycinin, lipoic acid 0 引言 [1]由于其重要的营养价值，大豆蛋白是生产动物饲料和食品的主要组成成分之一，并成 基金项目:教育部博士点基金-新教师基金资助(200800191018) 作者简介:韩鹏飞(1987-)，男，硕士生 通信联系人:马曦(1979-)，男，副研究员，营养免疫. E-mail: maxi@cau.edu.cn - 1 - 豆丁网标准与论文: [2]。然而，对于敏感人群而言，大豆蛋白所致的过敏反应有重要危 45 为越来越重要的人类饮食 [3]害，尤其是婴幼儿和儿童。由于在动物复合饲料中使用豆粕比例高(如猪，鸡，火鸡，犊 [4-5]牛)，大豆过敏也经常发生。特别是断奶仔猪和犊牛出现大豆过敏的现象较多。 除了均 衡的蛋白质组成外，大豆还含有多种抗营养因子，包括的胰蛋白酶抑制因子，凝 [2] 集素，异黄酮，过敏原，和生物碱。其中，β–伴大豆球蛋白，占约 30,的总大豆蛋白，被[6]50 证明是主要的大豆过敏原之一。作为一种主要的大豆贮藏蛋白，含有三种不同的亚基，分 [7]子量为 58-77，58-83 和 42-53 kDa 的，分别为 α , α'和 β 亚基。越来越多的研究表明，β– [8]伴大豆球蛋白在大豆所致的食品和饲料过敏性反应中起着重要的作用。 [9]近年的研究更为重视探讨食物诱发过敏的机制，已经寻找干预的方法。通过单克隆抗 [10]体为基础建立的竞争 ELISA 方法为 β–伴大豆球蛋白的定量建立一个有效的工具。到 55 目前为止，为防止 IgE 介导的食物过敏所采用的方法，如益生菌的添加和食物过敏疫苗的使[11]用由于存在潜在的副作用，不适合长期应用和广泛推广。 据报道，外源性维生素 C 添加可以降低血液中的组胺水平，从而有助于减少过敏反应 [12]的严重程度。前期研究表明，大剂量的维生素 C(1000 毫克/天)可以用来减弱断乳仔猪 [13]的大豆过敏。然而，该研究所采用的长期和特大剂量的维生素 C 补充可能导致许多副作 [14] 60 用 。 [15]硫辛酸，广泛存在于植物和动物的细胞膜和细胞质。与维生素 C 类似，硫辛酸作为 [16]电子供体，可以保护机体免受自由基等所导致的氧化应激损伤，其活性比维生素 C 强很 [17]多倍。低剂量的硫辛酸已经被证实可以减轻体内氧化损伤，进而保护人类免受过敏症， [18]糖尿病，高血压和其他一些疾病的影响，并几乎无不良副作用。 65 本研究采用纯化的 β–伴大豆球蛋白灌胃建立的大鼠过敏模型，目的是研究低剂量硫辛酸 是否可以更有效地抑制 β –伴大豆球蛋白诱发的过敏反应。 1 材料和方法 1.1 β–伴大豆球蛋白样品 70 纯化 β–伴大豆球蛋白样品由中国农业大学食品学院郭顺堂教授惠赠。 SDS-PAGE 分析 显示样本中含 95,以上的 β–伴大豆球蛋白。 1.2 动物，饲养和实验设计 本试验获得中国农业大学动物护理和使用伦理委员会(中国北京)批准。 75 从中科院异常发育所购买 48 只近期断奶的雄性 SD 大鼠(21 日龄，体重 35.0 2.69 克)。 ?大鼠被分配到四个处理组(N=12)。第一、二和三组饲喂酪蛋白为主的基础日粮，第四组 添加 α -硫辛酸(25 毫克/公斤，纯度为 98,，Healthjoy 化工公司，上海)。根据美国营养 [19]学会的标准配置基础日粮。各组日粮配方提供近似的粗蛋白，氨基酸和能量水平。 [20]大鼠的饲养和致敏如表 1 所示。β–伴大豆球蛋白的用量是根据文献报道。基于 [21]80 Fischer 等人的研究，第 31 天，大鼠分别给予双倍剂量的 β–伴大豆球蛋白，卵清蛋白或酪 蛋白。 表 1 实验设计 Table 1 The experimental design 第一组 第二组 第三组 第四组 - 2 - 豆丁网标准与论文: 灌胃 β–伴大豆球蛋白β–伴大豆球蛋白酪蛋白卵清蛋白 20mg 20mg 20mg 20mg 1 天 10 天 20mg 20mg 20mg 20mg 17 天 20mg 20mg 20mg 20mg 24 天 20mg 20mg 20mg 20mg 31 天 40mg 40mg 40mg 40mg 85 整个 31 天实验期水和饲料可自由采食。在试验的开始和结束时大鼠和给料器分别称重 (0 和 31 天)，以计算体重增加，采食量和饲料转化率。 第 31 天，每只大鼠灌胃后 2 小时尾静脉采血液。血液立刻被放置在 37?C 孵化器 2 小 时，然后在 4? 10 分钟离心。血清立即冻结并存储在-77?供以后分析。 第 32 天，处死所 有大鼠，腹腔被打开，分离脾和小肠。空肠(中间部分整个空肠)用生理盐水冲洗去除食糜， 90 储存在液氮中。 1.3 小肠形态观察 空肠(整个空肠中间部分)立即取出，然后用生理盐水冲洗，以清除肠道内容物。每个 肠组织样本，长度约 2 厘米，被固定在多聚甲醛为稳定肠道形态。对肠道样品进行了脱水， 石蜡包埋。然后，他们被切成 3 毫米厚切片，镜检前苏木素和伊红染色。肠形态的照片收集 95 使用 Axioskop-2 显微镜(日本奥林巴斯)和图像处理系统(Visitron 系统，德国)。然后对 每只鼠的标本的绒毛的高度和隐窝深度进行测量。 1.4 血清 IgE 抗体水平的测定 血清总 IgE 抗体测定使用大鼠 IgE 抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒，步骤根据 BIOSOURCE，美国)。β–伴大豆球蛋白特异性 IgE 水平测定采用间接 ELISA 制造商的说明(100 [22] 试剂盒 。 1.5 组胺含量和组胺释放率的测定 小肠组织样品约 5 厘米长，称重，然后在液氮冷冻。样品用注射器和裂解液裂解(10 mM HEPES pH7.4，0.15 M 氯化钠，1 mM EDTA，EGTA，1,Triton X -100，0.5,NP- 40，0.05, 105 SDS 与蛋白酶抑制剂)冰冻 30 分钟。从中分离出来的上清液的组胺含量测定使用市售的大 鼠 ELISA 试剂盒，根据制造商(BIOSOURCE，美国)使用说明。 从对照组大鼠的空肠获得额外的组织样本进行组胺释放分析。肠道肥大细胞的分离和培 [23]6 养参照文献报道。纯化的肥大细胞重新悬浮在完全 Hank’s 盐平衡溶液(1 ×10细胞/毫升)， 介质中含有来自四个处理组的血清对应在 24 孔板孵育 2 小时。然后，β–伴大豆球蛋白(第 一，第三和第四组)或卵清蛋白(第二组)添加到悬浮液(终浓度为 100 毫克/毫升)，培 110 养 1 小时，板块放置在冰上终止反应。测定细胞沉淀和取上清液组胺含量。通过高氯酸破坏 细胞，在 400 克 4?离心 5 分钟细胞沉淀剩余组胺释放。组胺释放率(HRR)，计算公式为: HRR [%] ={上清液组胺?(上清液组胺+细胞沉淀组胺)}×100 上清组胺和细胞沉淀组胺以毫克/毫升表示。 115 - 3 - 豆丁网标准与论文: 1.6 脾细胞培养 处死大鼠无菌分离脾脏。脾组织用剪刀切碎成片段，注射器粉碎并用 RPMI 1640 培养基 (Hyclone 公司，洛根，UT 斯达康，美国)洗涤的两次。红细胞裂解后，台盼蓝染色 120 6 排除检测脾细胞，计数调整细胞密度为 2×10个细胞/毫升，并重悬在含 10,胎牛血清的 RPMI 1640 培养基。脾淋巴细胞用于细胞因子的测量分析。 1.7 ELISA 检测脾淋巴细胞细胞因子 6 淋巴细胞的准备和悬浮为 2×10个细胞/毫升的细胞密度如上所述。1 ml 细胞悬液，加 125 入 1 毫升的 RPMI 1640(含 5 毫克/毫升刀豆蛋白 A，美国)，作为激活剂，加入到 24 孔板， 5,CO，37?C 孵育 24 小时。收获细胞培养上清检测细胞因子。白细胞介素-4 和干扰素-γ 2 的浓度测定使用市售的大鼠 ELISA 试剂盒(BIOSOURCE，美国)。实验进行 3 个重复。 1.8 统计分析 使用 SAS 系统的方差分析程序(版本 8.2)。P < 0.05 被认为有统计学意义。 130 2 实验结果 2.1 生长性能 如表 2 所示，β–伴大豆球蛋白致敏大鼠(第三组)和卵清蛋白(第二组)组平均日增重 比对照组(第一组)有显著降低。添加硫辛酸(第四组)对 β–伴大豆球蛋白致敏的大鼠体 重增加没有明显改善作用。各组的采食量和饲料转化率无明显差异。 135 2.2 小肠形态结构 为研究 α -硫辛酸对 β–伴大豆球蛋白诱导的小肠形态学影响，对各组空肠形态结构进行 观察，结果见表 2。与对照组相比，β–伴大豆球蛋白诱导过敏的第三组和卵蛋白诱导过敏的 第二组大鼠与对照组相比，绒毛高度显著下降(P < 0.05)，隐窝深度增加(P < 0.05)。添 140 伴大豆球蛋白致敏引起的小肠形态损伤(绒毛高度增加，P < 0.05)。 加硫辛酸可明显改善由 β– 表 2 α -硫辛酸生长性能和-球蛋白致敏大鼠空肠形态结构的影响(N = 12) Table 2. Effects of a-lipoic acid on growth performance and the morphological structure of the jejunum in β-conglycinin sensitised rats (n =12) 145 SEM P 值第一组第二组第三组第四组 性能 abbab 5.50 4.97 4.95 5.26 0.16 0.04 体增重(g/d) 12.56 11.63 11.64 12.27 0.35 0.17 采食量(g/d) 2.30 2.34 2.35 2.33 0.02 0.10 料重比 空肠 abba 350.5 124.5 154.6 293.8 32.20 绒毛高度(μm),0.01 abbb88.4 138.4 126.9 98.5 15.70 隐窝深度(μm),0.01 注:同一行的平均值中，上标不同代表有显著性差异(P < 0.05)。 2.3 血清总 IgE 和 β –伴大豆球蛋白特异的 IgE 抗体水平 - 4 - 豆丁网标准与论文: 150 为了评价β–伴大豆球蛋白引起的过敏反应，并探讨硫辛酸削弱其对大鼠致敏活性的可能 作用，本研究进一步检测了血清总IgE和β–伴大豆球蛋白特异的IgE抗体水平，结果如表3所 示。第31天，β–伴大豆球蛋白致敏组(第三组)的血清总IgE和β–伴大豆球蛋白特异的IgE 抗体水平均显著升高(P < 0.05)，而低剂量的硫辛酸添加组(第四组)与之相比，β–伴大 豆球蛋白特异的IgE抗体水平显著降低(P < 0.05)。 155 2.4 肠道组胺含量和组胺释放率 β–伴大豆球蛋白致敏和卵清蛋白致敏(第二和第三组)大鼠空肠组胺含量均显著(P < 0.05)高于对照组(表 3)。然而，硫辛酸处理组(第四组)相对于为处理的 β–伴大豆球蛋 白致敏第三组组胺含量显著降低(P < 0.05)。 与卵清蛋白致敏的第二组类似，β–伴大豆球蛋白致敏组(第三组)的组胺释放率与对照 组相比显著增加。补充硫辛酸(第四组)没有显著抑制肥大细胞的组胺释放(见表 3)。 160 表3 α -硫辛酸对血清IgE水平的影响，组胺含量/释放率和β–伴大豆球蛋白致敏大鼠的细胞因子水平 Table 3 Effects of a-lipoic acid on serum IgE level, histamine content/release ratio and cytokine levels in β-conglycinin sensitized rats 165 SEM P 值 第一组第二组第三组第四组 总血清 IgE(ng/ml) acbb50.2 623.4 450.3 330.8 89.4 β–伴大豆球蛋白,0.01 abcb 0.048 0.2724.970.8250.437 ,0.01特异 IgE 水平(OD) 450 acb,0.01 7.15 11.63 12.43 10.29 0.66 空肠组胺含量(μg/g) abb 41.3 2.34 72.2 60.3 5.64 组胺释放水平率(%),0.01 脾细胞培养上清细胞因子水平(μg/mg) abbab 651.2 619.5 620.1 640.0 9.25 0.03 干扰素-γ abbab420.6 447.5 444.8 432.6 7.12 0.02 白细胞介素-4 注:同一行的平均值不共享相同的显著性差异角标(P < 0.05)。 2.5 脾细胞培养上清中的细胞因子水平 为研究硫辛酸处理是否改变了 β–伴大豆球蛋白诱发过敏所导致的 Th1/Th2 细胞因子浓 度比例失衡，测定培养的脾细胞中白细胞介素-4 和干扰素-γ。结果显示，β–伴大豆球蛋白(第 170 三组)或卵清蛋白(第二组)致敏大鼠与对照组相比，干扰素-γ 水平显著降低，而白细胞介 素 4 水平显著增加(见表 3)。硫辛酸添加(第四组)与第三组相比，干扰素- γ 和白细胞介 素- 4 水平没有显著性差异。 3 讨论 175 在本研究中，选用 SD 大鼠建立了一个 β–伴大豆球蛋白大豆诱导过敏反应的动物模型， [24]并已已知的食物过敏蛋白卵清蛋白作为阳性对照。结果显示，β–伴大豆球蛋白致敏大鼠 生长性能显著降低。此外，β–伴大豆球蛋白致敏后血清总 IgE 和 β–伴大豆球蛋白特异性 IgE 水平显著增加，这可能导致了致敏大鼠组胺释放率显著上升。这一发现与阳性对照卵清蛋白 过敏反应的结果相似，表明成功的用 SD 大鼠建立了 β–伴大豆球蛋白致敏动物模型。这种模 型有许多优点，包括成本低，繁殖周期短。特别地，现今配合饲料中豆粕的高比例添加，而 [20, 28]180 且大鼠和饲养动物之间有很高的生理相似性(如猪，鸡，火鸡，犊牛)。这个模型的 - 5 - 豆丁网标准与论文: 另一个优点是，它使用纯化的 β–伴大豆球蛋白，消除了其他潜在过敏性原的干扰。 [2] ，一种有效干预大豆蛋白过敏性的方法将对大豆产业 由于大豆在各种食品中广泛使用 发展有重大的影响。因此，本研究还评估了低剂量硫辛酸对 β–伴大豆球蛋白诱导的畜禽食 185 物过敏的影响。 结果表明，饲喂低剂量的硫辛酸没有显著降低大鼠由 β–伴大豆球蛋白过敏导致的生长 抑制，但显著改善了小肠形态结构(绒毛高度增加，P < 0.05)。硫辛酸可以抑制血清 β–伴 大豆球蛋白特异性 IgE 抗体的产生，并减少空肠组胺含量，这表明在 β–伴大豆球蛋白致敏 后，硫辛酸可以抑制肠道肥大细胞的活化。在此基础上，低剂量的硫辛酸具有相当的潜力可 作为免疫调节剂，用于防止大豆 β–伴大豆球蛋白诱发的过敏反应。 190 在本实验室前期研究中，使用仔猪作为动物模型，发现补充大剂量的维生素 C 可以在 [13]一定程度上抑制大豆球蛋白导致的过敏性反应。本研究结果表明，低剂量的硫辛酸也可 以有效地抑制血清 β–伴大豆球蛋白 IgE 抗体产生，抑制肠道肥大细胞的激活。因此，硫辛 酸作为一种新型添加剂和免疫调节剂，可以有效抑制 β–伴大豆球蛋白所导致的过敏性反应， 甚至其他食物过敏。这些发现提示了一类新方法，即通过饲料添加剂，减少组胺释放，防止 195 IgE 介导的食物过敏。 除了能够抑制 β–伴大豆球蛋白诱发的过敏，最近的研究表明硫辛酸还可以干预过敏症 [18] (尤其是过敏性哮喘)，接触性皮炎和婴幼儿/儿童的早期过敏，以及延缓一些自身免疫 [26]肝硬化和胶原诱导的关节炎性疾病的进展，如原发性胆汁性。然而，硫辛酸产生这些表 型特征的途径和机制尚未完全阐明。 为了探讨潜在机制，本研究进行了脾细胞培养上清的细胞因子分析。食物引起的过敏主 200 [27]要是 Th2 型免疫反应 ，其中 Th2 型的代表细胞因子白细胞介素-4 在过敏性炎症中起关键 [28][29] 作用，主要表现为促进总 IgE 和抗原特异性 IgE 抗体产生 。此外，有文献报道，干扰 素-γ 可以抑制 IgE 的产生和组胺释放，从而减轻体内的炎症。然而，本研究结果表明，硫辛 酸添加没有显著增加干扰素-γ 或减少白细胞介素- 4，这表明硫辛酸的抗过敏作用可能不是 [30]通过恢复 Th1/Th2 的平衡来实现的。Lee 等人(2008 年)发现硫辛酸可以抑制肿瘤坏死 因子-α 进而激活 NF-κB 信号通路，这提示硫辛酸的抗组胺作用可能会通过其他信号通路介 205 导，如 NF-κB。 4 结论 总之，本研究结果显示，低剂量的硫辛酸作为免疫调节剂，有防止 β–伴大豆球蛋白诱导 大豆过敏的潜力。硫辛酸的抗过敏作用的具体机制将需要进行进一步研究。 210 [参考文献] (References) 215 [1] De Schutter A C, Morris J R. Soybeans: Full fat[M]. In: Thacker PA, Kirkwood RN, editors. Non-traditional feed sources for use in swine production. Stoneham MA: Butterworth Publishers. 1990, p. 439-451. [2] Friedman M, Brandon D L. Nutritional and health benefits of soy proteins[J]. J Agric Food Chem. 2001, 49: 1069-1077. 220 [3] Cantani A, Lucenti P. Natural history of soy allergy and/or intolerance in children, and clinical use of soy-protein formulas[J]. Pediatr Allergy Immunol. 1997, 8: 59-74. [4] Li D F, Nelssen J L, Reddy P G, Blecha F, Hancock J D, Allee G L, Goodband R D, Klemm R D. Transient hypersensitivity to soybean meal in the early-weaned pig[J]. J Anim Sci. 1990, 68: 1790-1799. [5] Sun P, Li D F, Li Z J, Dong B, Wang F L. Effects of glycinin on IgE-mediated increase of mast cell numbers 225 and histamine release in the small intestine[J]. J Nutr Biochem. 2008, 19: 627-633. - 6 - 豆丁网标准与论文: [6] Maruyama N, Katsube T, Wada Y, Oh M H, Barba D L, Rosa A P, Okuda E, Nakagawa S, Utsumi S. The roles of the N-linked glycans and extension regions of soybean b-conglycinin in folding, assembly and structural features[J]. Eur J Biochem. 1998, 258: 854-862. [7] Mujoo R, Trinh D T, Ng P K W. Characterization of storage proteins in different soybean varieties and their 230 relationship to tofu yield and texture[J]. Food Chem. 2003, 82: 265-273. [8] Xiang P, Beardslee T A, Zeece M G, Marwell J, Sarath G. Identification and analysis of a conserved immunoglobulin E-binding epitope in soybean G1a and G2a and peanut Ara h 3 glycinins[J]. Arch Biochem Biophys. 2002, 408: 51-57. [9] Nowak-Wegrzyn A. Future approaches to food allergy[J]. Pediatrics. 2003, 111: 1672-1680. 235 [10] You J M, Li D F, Qiao S Y, Wang Z R, He P L, Ou D Y, Dong B. Development of a monoclonal antibody-based competitive ELISA for detection of b-conglycinin, an aller genfrom soybean[J]. Food Chem. 2008, 106: 352-360. [11] Laitinen K, Isolauri E. Management of food allergy: Vitamins, fatty acids or probiotics[J]. Eur J Gastroen 240 Hepat. 2005, 17: 1212. [12] Clemeston C A B. Histamine and ascorbic acid in human blood[J]. J Nutr. 1980, 110: 662-668. [13] Sun P, Li D F, Dong B, Qiao S Y, Ma X, Chen X. Vitamin C: An immunomodulator attenuates anaphylactic reaction in a swine model of soybean glycinin hypersensitivity[J]. Food Chem. 2009, 113: 914-918. [14] Massey L K, Liebman M, Kynast-Gales S A. Ascorbate increases human oxaluria and kidney stone risk[J]. J 245 Nutr. 2005, 135: 1673-1677. [15] Packer L, Witt E H, Tritschler H J. Alpha-lipoic acid as a biological antioxidant. Free Radical Bio Med. 1995, 19: 227-250. [16] Wada H, Shintani D, Ohlrogge J. Why do mitochondria synthesize fatty acid? Evidence for involvement in lipoic acid production[J]. P Natl Acad Sci USA. 1997, 94:1591-1596. 250 [17] Gaetke L M, Chow C K. Copper toxicity, oxidative stress, and antioxidant nutrients[J]. Toxicology. 2003, 189: 147-163. [18] Lam P K L. Alpha lipoic acid: A novel therapeutic agent for intervention of early pediatric allergies[J]. J Allergy Clin Immunol. 2005. 15: S162. [19] Reeves P G. Components of the AIN-93 diets as improvements in the AIN-76A diet[J]. J Nutr. 1997, 127: 255 838-841. [20] Guo P F, Piao X S, Ou D Y, Li D F, Hao Y. Characterization of the antigenic specificity of soybean protein b-conglycinin and its effects on growth and immune function in rats[J]. Arch Anim Nutr. 2007, 61: 189-200. [21] Fischer R, McGhee J R, Vu H L, Atkinson T P, Jackson R J, Tome D, Prosper N B. Oral and nasal 260 sensitization promotes distinct immune responses and lung reactivity in a mouse model of peanut allergy[J]. Am J Pathol. 2005, 167: 1621-1630. [22] Helm R M, Furuta G T, Stanley J S, Ye J H, Cockrell G, Connaughton C, Simpson P. A neonatal swine model for peanut allergy[J]. J Allergy Clin Immunol. 2002, 109: 136-142. [23] He S, Gaa M D A, Walls A F. A role for tryptase in the activation of human mast cells: Modulation ç 265 of histamine release by tryptase and inhibitors of tryptase[J]. J Pharmacol Exp Ther. 1998, 286: 289-297. [24] Diesner S C, Knittelfelder R, Krishnamurthy D, Pali-Scholl I, Gajdzik L, Jensen-Jarolim E, Untersmayr E. ? Dose-dependent food allergy induction against ovalbumin under acid-suppression: A murine food allergy model[J]. Immunol Lett. 2008, 121: 45-51. [25] Liu X, Feng J, Xu Z R, Wang Y Z, Liu J X. Oral allergy syndrome and anaphylactic reactions in BALB/c mice caused by soybean glycinin and beta-conglycinin[J]. Clin Exp Allergy. 2008, 38: 350-356. 270 [26] Bruggraber S F, Leung P S, Amano K, Quan C, Kurth M J, Nantz M H, Benson G D, Van de Water J, Luketic V, Roche T E, Ansari A A, Coppel R L, Gershwin M E. Autoreactivity to lipoate and a conjugated form of lipoate in primary biliary cirrhosis[J]. Gastroenterology. 2003, 125: 1705-1713. [27] van Wijk F, Knippels L. Initiating mechanisms of food allergy: Oral tolerance versus allergic sensitization[J]. Biomed Pharmacother. 2007, 61: 8-20. 275 [28] Prescott VE, Hogan SP. Genetically modified plants and food hypersensitivity diseases: Usage and implication of experimental models for risk assessment[J]. Pharmacol Therapeut. 2006, 111: 374-383. [29] Snapper C M, Paul W E. Interferon-g and B cell stimulatory factor-1 reciprocally regulate Ig isotype production[J]. Science. 1987, 236: 944-947. [30] Lee C K, Lee E Y, Kim Y G, Mun S H, Moon H B, Yoo B. Alpha-lipoic acid inhibits TNF-alpha induced 280 NF-kappa B activation through blocking of MEKK1-MKK4-IKK signaling cascades[J]. Int Immunopharmacol. 2008, 8: 362-370. - 7 -