中草药饲料添加剂对中国对虾抗病

中草药饲料添加剂对中国对虾抗病 中国农业大学现代远程教育 中草药饲料添加剂对中国对虾抗病 活力的影响及应用前景 学 生 由 明 英 指导教师 赵忠新 高级兽医师 专 业 动 物 医 学 层 次 专 升 本 批 次 031 学 号 学习中心 青 岛 学 习 中 心 工作单位 青 岛 华 仁 药 业 2005年 04 月 中国农业大学网络教育学院制 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的毕业论文(设计)是我个人进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文(设计)中不包含其他人已经发或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在毕业论文(设计)中作了明确的说明并表示了谢意。 学生签名: 时间: 年 月 日 关于论文(设计)使用授权的说明 本人完全了解《中国农业大学网络教育学院本、专科毕业论文(设计)工作条例(暂行规定)》对:“成绩为优秀毕业论文(设计)，网络教育学院将有权选取部分论(设计)全文汇编成集或者在网上公开发布。如因著作权发生纠纷，由学生本人负文 责”完全认可，并同意中国农业大学网络教育学院可以以不同方式在不同媒体上发表、传播毕业论文(设计)的全部或部分内容。中国农业大学网络教育学院有权保留送交论文(设计)的复印件和磁盘，允许论文(设计)被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编论文(设计)。 [保密的毕业论文(设计)在解密后应遵守此协议] 学生签名: 时间: 年 月 日 I 摘 要 海洋养殖生物病害一直是长期困扰水产养殖业的主要问题。抗生素类药物由于具有促生长作用被作为饲料添加剂广泛使用，并曾给海洋水产养殖业的发展带来了前所未有的推动。近二十年来，由于滥用抗生素严重困扰了养殖业的长足发展，并最终威胁到人类的健康和生态环境。诸多负面影响直接引起的人体健康危害等。促进了天然绿色饲料添加剂的开发研究和应用。 本文以中国对虾为研究对象，采用复合中草药饲料添加剂为饵料，测定了中国对虾血清中抗菌活力、溶菌活力和酸性磷酸酶(ACP)活力。结果表明，血清中抗菌活力、溶菌活力和ACP活力在第1,3,5,7天时均为实验组高于对照组，并且均差异极显著。表明复合中草药对对虾血淋巴中免疫防御因子起到了促进作用。 在对中国对虾口服复合中草药物后，连续测定了其血淋巴中的抗菌活力、溶菌活力和酸性磷酸酶活力，为复合免疫药物在对虾养殖抗病中的应用提供理论依据。 关键词: 饲料添加剂 中草药添加剂 中国对虾 抗菌活力 溶菌活力 II 目 录 摘 要 ................................................................ II 1 前 言 ............................................................... 1 1.1国内外中草药添加剂研究概况 ............................................................................1 1.1.1中草药饲料添加剂在我国的研究生产现状及进展 ...................................1 1.1.2 国外中草药饲料添加剂的应用现状和研究进展 ......................................2 1.2中草药有效成分的提取研究进展 ........................................................................3 1.3中草药饲料添加剂在水产养殖中的作用 ............................................................3 1.3.1降低饵料系数，促进水产动物的生长和增重 ...........................................3 1.3.2 防治疾病，提高水产动物免疫力 .............................................................4 1.3.3促摄食作用 .................................................................................................4 2 中草药饲料添加剂对中国对虾血淋巴抗菌溶菌活力的影响 ................... 5 2.1 材料与方法 ..........................................................................................................5 2.1.1 材料............................................................................................................5 2.1.2 方法............................................................................................................5 2.2 结果 .....................................................................................................................6 2.2.1 血清抗菌活力的测定结果 .........................................................................6 2.2.2 血清溶菌活力的测定结果 .........................................................................6 2.2.3 血清中ACP活力的测定结果 ...................................................................6 2.3 讨论与结论 ..........................................................................................................7 3 中草药饲料添加剂的在水产养殖中的应用前景 ............................. 7 3.1 中草药饲料添加剂的在水产养殖应用中存在的问题 .......................................7 3.2在水产养殖中中草药饲料添加剂的研究方向 ....................................................8 3.3我国在中草药饲料添加剂领域的优势和发展前景 ............................................9 后 记 ................................................................. 9 参考文献 .............................................................. 10 III 1 前 言 饲料添加剂(feed additives)，是指为了某种特殊需要而添加于饲料内的某种或某些微量的物质。其主要作用是:补充配合饲料中营养成分的不足，提高饲料利用率，改善饲料口味，提高适口性，促进动物正常发育和加速生长，改进产品品质，防治疾病，改善饲料的加工性能，减少饲 [1]料贮藏和加工运输过程中营养成分的损失。 二十世纪初，随着畜牧水产养殖业和饲料工业的蓬勃发展，饲料添加剂及其工业迅速成为一个新兴的行业。到目前为止，国内外生产使用的饲料添加剂有:氨基酸类、矿物质类、维生素类、 [2]抗生素类、合成抗菌素类、激素类等。 但近二十年来，人们逐渐发现了抗菌素、激素等化学合成类添加剂所带来的负面效应。抗菌素的长期使用和滥用，破坏了动物体内的微生态平衡，导致耐药菌株的产生，致使动物患病机率上升，治疗难度加大;激素类物质的长期使用，致使动物体的非特异性免疫能力下降6)。更甚者，抗菌素、激素类饲料添加剂在动物肉、蛋、乳等产品中的残留严重影响和危害着人类健康。因此，世界各国对抗菌素、激素类饲料添加剂的使用，做出了严格控制和逐渐淘汰禁用的规定，并大力提倡开发和使用高效无害的天然绿色饲料添加剂。 中草药，是按中医药理论体系来使用的药物，大多兼有药用和食用双重作用(中草药饲料添加剂是天然绿色饲料添加剂中的一种，是以中国对中草药的物性、物味、和物间关系的传统理论 [3]为主导，辅以饲养和饲料工业技术制成的纯天然饲料添加剂。 中草药饲料添加剂具有以下优点:一是具有多种营养成分和生物活性物质，兼有药物和营养的双重作用;二是具有非特异性抗菌作用，不但能够直接抑菌杀菌，还能够调节和提高机体免疫机能;三是毒副作用小、无抗药性、残留量低;同时，中草药所具有的与食物同源、同体、同用 [3~14] 的显著特点，也是抗菌素、激素类物质所无法比拟的。(王成，1989;郎毅，1989;果仁义，1990;谢仲权，1998;柴桂珍等，1999;向枭，2000;彭玉麟，2001;吴德峰，2001)。 1.1国内外中草药添加剂研究概况 1.1.1中草药饲料添加剂在我国的研究生产现状及进展 我国是最早在饲料中应用中草药添加剂的国家。《淮南子》、《三农记》、《齐民要术》等古书上详细记载了用中草药饲喂猪和鸡，从而促进生长和防治疾病的方法。然而，人们真正重视中草药添加剂并进行研究和实践是在七十年代末期至九十年代初，被实验证明可以作为饲料添加剂的中 [6]草药己达110余种，应用药味达数百种之多;应用范围除用于畜禽类外，还用于蜂、蚕、鱼等;品种类型除促生长和防治疾病外，还有保健、改善或提高动物产品质量和品质等。谢仲权还根据动物生产特点、饲料工业体系和中草药的性能，将中草药饲料添加剂分为免疫增强剂、激素样作用剂、抗应激剂、抗微生物剂、驱虫剂、增食剂、促生长剂、催肥剂、催乳剂、疾病防治剂、饲 [7]料贮存剂等几种类型。近几年来，已经推广并产业化的中草药饲料添加剂层出不穷，如鸡痢灵、球虫清、鱼菌敌，等等。与此同时，我国的中草药饲料添加剂产品也逐渐进入国际市场。我国的 1 中草药，早在2000多年前就沿着丝绸之路传至国外，并在历代的国际文化科技交往中不断传播。 目前，我国生产的中草药饲料添加剂大多还是粗制型产品，存在使用剂量偏大、适口性较差等弊端，严重影响了产品在市场上的竞争力。天然中草药有1万余种，为人类常用的仅为10%，而用于饲料添加剂就只有几百种。就中草药饲料添加剂加工现状及产品来看，我国目前多为固体粉状剂型，生产规模小、生产设备少(只有粉碎机、混合机及封口机等)、加工简单，大多采用下面工艺流程进行加工:药检—干燥一称量—粉碎—混合—分装—检验。 用上述加工工艺生产的中草药饲料添加剂，常因剂量而影响其功效，剂量过小，则难以达到预期功效;剂量过大，不仅运输不便，也影响饲料适口性，甚至稀释了饲料中营养物质的浓度。一些中草药饲料添加剂，在饲料加工过程中，与其他饲料原料先直接配合一起加工，导致药效下降或部分失效。此外，在饲养过程中，采用长期或全期添加，药材用量大，成本过高，经济效益不明显。 近几年，国内科技工作者们从天然植物中提取有效成分，作饲料添加剂或将复方经一定的工艺提取制备成口服液饮用，或将中草药复方制成浸膏散剂或喷雾干燥后用于饲料添加，均较之原始的中草药散剂有了较大的改进和提高。国内专家和生产厂家已经开始使用先进的加工设备和加工工艺，并从更全面的领域(如中草药的药效成分、药用机理、给药途径等)研究和解决上述生产出现的问题。葛长荣等(2002)采用低温真空提取中草药有效成分，又以喷雾干燥法制成粉剂型添加剂产品，在动物生产中取得了可喜的效果和巨大的经济效益。但是我国中草药饲料添加剂的研究仍处于起步阶段，虽然有万余种中草药，但用作饲料添加剂的数量并不多。我国中草药资源极为丰富，许多种类有待开发，因而应该用传统的中医理论和方法，结合现代先进的分析测试手段，开拓创新。试验开发前人未曾用过的中草药品种，开发新的中草药添加剂。 1.1.2 国外中草药饲料添加剂的应用现状和研究进展 早在2000多年前，我国的中草药就沿着丝绸之路传至国外，并在历代的国际文化与科技交往中不断传播，得到了推广和发展。在化学合成药与抗生素等弊端突出的今天，国外更寄希望于天然医药，研究应用中草药的高潮不断兴起。 中草药饲料添加剂具有能促进生长、抗菌抑菌、改善肉品质、有害残留低、效果明显等特点，越来越受到国外专家和生产厂家的重视。如日本，在明治维新后，一直有一个强大的“汉药汉方”学派，坚定不移地研究推广中草药，取得了很多成果。对不少中草药如人参、葛根、芍药、柴胡、桔梗、酸枣仁、杜仲等的研究非常深人，在人力、物力上投人很大，方法、手段先进，揭示了许多中草药有抗菌、抗炎、镇咳、镇静和类固醇激素样作用，以及多糖体免疫作用等等。尤其是组合用作饲料添加剂喂鸡、猪、鱼与其他动物，效果突出。原苏联自20世纪50年代起就加紧研究天然物中草药，并用电脑对中国传统方剂进行分析方药作用，最后得出中草药无毒副作用的结论。近些年来美国、加拿大、德国、法国、新加坡、韩国等国家也加紧了这方面的研究。Hamuro等(1988)报道了茯苓多糖、羟乙基茯苓多糖-3, 羟乙基茯苓多糖-4, 甲基茯苓多糖等有效活性成分的免疫功能的机理。澳大利亚科学家研制认为，天然植物产品可以提高动物的生产性能，促进消化，提高抗病力。Tsina等(1999)从牛至属植物中提取的有效成分具有很强的抗菌、抗氧化和增进动物食欲的作用，并且对断乳仔猪腹泻病有很好的治疗作用。国外还对地黄、紫莞、独活、石解等中 2 草药进行了分析研究，结论认为中草药天然物在饲料添加剂上的应用潜力很大，前景广阔。仅1999年，日本中草药年产值就达到了1016.37亿日元(约52亿美元)。在添加剂方面也有所涉足，例如，用杜仲叶干粉鱼饵，改善鳝鱼肉质;用黄连、黄柏、五倍子等单味粉末饵料防治鱼类菌性尖结症等。 目前，国外已纷纷立法或制定，承认了天然药物的合法性和可靠性。如美国食品管理局(FDA)不久前就如何管理这类产品进行了初步研究，中草药具有增进动物健康的作用，认为应属动物保健营养品类。欧盟各国也开始大力提倡使用天然药物饲料添加剂，并加大了对中草药的研究投人。 1.2中草药有效成分的提取研究进展 中草药的有效成分极为复杂，通过动物实验和人体免疫功能的机理研究表明，中草药的主要成分有:蛋白质、氨基酸、维生素、油脂、树脂、糖类、植物色素、常量元素和微量元素等多种物质:还有大量的有机酸类、生物碱、多糖、挥发油、蜡、甙、鞣质等物质。提取和测定中草药添加剂的有效成分是确定中草药的质量和研究其作用机理的前提和基础。 从中草药生药原料出发提取的产物主要有总提取物、浓缩物和单一化合物三大类。传统的中草药提取主要工序包括:浸提、过滤、溶剂萃取、蒸发浓缩、重结晶干燥、柱分离等。常用的浸 [15]提溶剂有:水、乙醇、丙酮、石油醚、氯仿、苯。常见的分离方法有:沉降分离法、滤过分离法、离心分离法。常见的精制方法有:水提醇沉法、醇提水沉法、酸碱法、盐析法、离子交换法、 [16](重)结晶法及柱分离法。 但传统的中草药提取方法所固有的溶剂毒性大，提取温度高，易破坏 ，[1718]热不稳定成分等缺陷，是导致现有中成药质量难以控制、疗效难以稳定、实验结果重复性差的重要原因之一。 [19][20][21]近年来出现了一些新的分离和精制方法。如大孔树脂吸附法、絮凝沉淀法、超滤法、 [22][23][24]高速离心法、分子蒸馏法及超临界流体(Supercrifical Fluid，SCF)萃取分离技术。其中，最引入注目的是超临界C02提取分离技术(Supercritical Fluid Extraction，SFE)，它与上述提取工艺相比，具有提取效率高，无溶剂残留毒性、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏而保持其天然的特征等优点，同时还可以通过控制临界温度和压力的变化，来达到选择性提取和 [15][25]分离纯化的目的。彭洪等利用SFE在银杏叶中首次发现新植二烯和生育酚等。 迄今为止，有关中草药提取的大量工作都是集中在单味药物方面，这显然与传统中药以复方为主的事实极不相称。因此，今后的研究工作应该在复方提取或者分组提取方面进行极大的加强。由于超临界C02萃取的温度和化学环境都与传统水提或醇提过程很不一样，因此采用这种新技术可能会给中草药的研究开发开辟更为广阔的领域。 1.3中草药饲料添加剂在水产养殖中的作用 1.3.1降低饵料系数，促进水产动物的生长和增重 随着水产养殖向集约化方向发展，提高饵料利用率、降低养殖成本，是所有养殖者努力的方 3 向。中草药中含有多种天然营养物质和生物活性物质，能促动物机体代谢和蛋白质及酶的合成， [11]进而促进动物的生长。近年来，在畜禽养殖中已有广泛应用的中草药促生长添加剂也被应用到了水产养殖业上。韩如政和庞家彪将0.4,的中草药添加剂分别添加在1龄和2龄鲤鱼饲料中， [26]发现鲤鱼的生长速度提高了18,，饵料系数降低了18.2,~24.0,;赵建培和黄谚谚的实验证明， [27]在饲料中添加莨菪类药，对尼罗罗非鱼的生长有促进作用;曾虹等以50rog,kg的大蒜素饲喂 [28]罗非鱼45天，发现实验鱼饲料利用率提高了11,，成活率提高了2,~3,;吴新民等(1996)以麦饭石作为对虾饵料添加剂，结果表明，添加量为1,时，体长4,5cm的幼虾增重率提高了 [29]20.4,，生长速度提高了13.0,;添加量为2,时，体长9,l0cm的对虾增重率提高了31.2,;柴桂珍等的实验证明:在饲料中添加0.5,的艾叶，可使1龄鲤增长率提高15.39,~22.04,，同 [30]池的鲢、鳙生长率也有显著提高;段铭等报道，在鲫鱼饵料中添加1,由党参、黄芩、小茴香 [31]等8味中草药组成的复方中草药添加剂，鲫鱼增长率提高了21.5,;张兆华等将由艾叶、枳壳、神曲等30味中草药组成的复方中草药添加剂添加于鳖的饲料中，结果表明，实验动物比前一年 [32]同期期末增重30,以上。这些实验证明，中草药添加剂对水产动物确有促生长作用。 1.3.2 防治疾病，提高水产动物免疫力 水产养殖中，各种水产动物疾病总是“如影相随”，给养殖者带来较大的经济损失。中医研究证明，中草药可通过调动和激发机体内抗病因素，提高机体组织器官的免疫功能，增强机体抗御病菌侵害的能力。水产工作者根据中草药的这一特点，将其适当地添加在饲料中，使其发挥增强鱼体自身的免疫力和抗病调节力的作用，从而达到提高养殖成活率，降低成本的目的。曾虹等 [28]在罗非鱼饲料中添加大蒜素，从而使实验鱼的成活率较对照组高出2.5,;陈月英和叶金云在 [33]草鱼饲料中添加莨菪碱，结果表明，草鱼鱼种的产量和成活率均有较大程度提高;张兆华等在甲鱼饲料中添加10多种常见中草药组成的复方中草药添加剂，在163天的养殖中，实验鱼从未 [34]发生过常见的白点病、红脖子病、疥疮病等疾病;郭建坤等用中药组方:大黄、黄芩、黄柏、郁金、黄连、板兰根等治疗虹鳟鱼链球菌病，与对照组相比，疗效明显，投药后第3d死鱼明显 [35]减少，第7d停止死亡，基本恢复正常。 1.3.3促摄食作用 诱食剂(Feeding Promoting Agent)又可称引诱剂、食欲增进剂剂。水产动物养殖中，在饲料中添加诱食剂的主要目的是:提高饲料的适口性，促进动物摄食及饲料利用率;从而减少对水体的 [36]污染，缩短养殖周期。据报道，大蒜对泥鳅、虹鳟、罗非鱼等均具有良好的诱食作用，这与大蒜中所具有的特殊气味的挥发性低分子有机物不无关系[28]:童圣英等报道，山楂对皱纹盘鲍具 [37]有明显的诱食性，这可能是因为陈皮、山楂中含有大量有机酸的缘故。香味薄荷等对泥鳅具有较强的诱食作用，且诱食作用与上述物质的浓度有明显的正相关关系。但总的来说，中草药阔料添加剂对水产动物的诱食信用机理还不甚清楚，有待进一步深入研究。 综上所述，中草药饲料添加剂作用的基本原理可归纳为:?提高营养物质的利用、转化，促进生长;?具有抗菌、杀菌，增加动物体内有益微生物群落的功效;?可调节机体内抗、抑疾病 4 生理机制，提高机体非特异性免疫功能，而从整体上强化机体的防卫能力;?许多中草药含有植物色素，可改善产品色泽和品味。 2 中草药饲料添加剂对中国对虾血淋巴抗菌溶菌活力的影响 2.1 材料与方法 2.1.1 材料 “虾康素”是由青岛森森实业有限公司研制，由草本植物和中草药提取的混合物，主要成分包括:有机硒、DHA,胱氨酸、五倍子酸、核苷酸、维生素C、维生素E和浓缩鞣酸等。对虾配合饲料为青岛六和海洋科技饲料有限公司生产的日本对虾5号颗粒配合饲料。中国对虾(Penaeus chinensis)由中国科学院海洋研究所提供，体长9~13cm。大肠杆菌(Escherichiac oli)购买于青岛市药品检验所微生物科。溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)冻干粉为南京建成生物工程研究所产品。其他试剂均为国产分析纯。 2.1.2 方法 (1)对虾的暂养: 选健康的对虾100尾，随机分成实验组和对照组，每组25尾，各设一平行组。饲养于水族箱中，水温21~24?;24 h充气;每天投喂2次，均为过剩给量;每天换水2次，每次换水1/2,所用海水为砂滤水。实验组所用饲料为:在1.5 kg六和牌日本对虾5号颗粒配合饲料中，加人1g虾康素，加人少量水，拌匀，鼓风干燥箱80?下烤干。对照组所用饲料为:六和牌日本对虾5号颗粒配合饲料。 (2)血清的制备: 实验组和对照组分别用各自饲料投喂1，3，5，7天后，每组各取5尾虾，用5号针头和2mL注射器从心脏取血，每尾取血0.5~lml于离心管中，4?冰箱中存，待血液凝固后，5000r/min离心10 min，移出上清液即得血清。在所得血细胞中，加入与血清等量的双蒸水，震荡使细胞破碎，15000r/min离心10min，即得破碎血细胞上清。 (3)抗菌活力的测定: 血清抗菌活力的测定采用Hultmark等人(1980)改进的方法[38]。用0.lmol/L，pH6.4的磷酸缓冲液从固体斜面上将大肠杆菌冲下，配成O.D=0.3~0.5的悬液，作为底物，取3ml该悬液于试管570nm 内置冰浴中，再加人50ml待测血清，混匀，570nm下测A值。然后将试管置于37?水浴中作用0 30min，取出后再置冰浴中10min以终止反应，测其A值。 ，，抗菌活力,A,A/A。 00 (4)溶菌活力的测定: 血清溶菌活力的测定也采用Hultmark等人(1980)改进的方法[38]。以溶壁微球菌冻干粉为底物，用0.1mol/L，pH6.4的磷酸缓冲液配成O.D=0.3的底物悬液，取3mL该悬液于试管内置冰570nm 5 浴中，再加入50ml待测血清，混匀，570nm下测A值。然后将试管置于37 ?水浴中作用30min，0 取出后再置冰浴中10min以终止反应，测其A值。 。 ，，溶菌活力,A,A/A00 (5)酸性磷酸酶(ACP)活力的测定: 血清中ACP活力的测定采用苯磷酸二钠法[39]。0.4ml 0.lmol/L pH4.5醋酸缓冲液中加入100mL血清，37?水浴中5min，加入0.02mol/L苯磷酸二钠lmL，37?水浴中30min，加人5%TCA lmL，15min后15 000r/min离心l0min，取0.5mL离心上清液，加入Folin一酚试剂甲2.5mL，室温下l0min，再加人Folin一酚试剂乙0.25mL，30min后，680nm下测O.D值。酶活单位采用国际单位，即以每分钟产生1mmol产物的酶量作为一个酶活单位(U)。 2.2 结果 2.2.1 血清抗菌活力的测定结果 血清抗菌活力的测定结果见表1。结果表明: 投喂虾康素后的第1，3，5，7天，实验组对虾血清抗菌活力均高于对照组，且均差异极显著。其中，第1~5天，实验组血清抗菌活力逐渐降低，第7天时抗菌活力又升到最高。 表 1 投放中草药饵料后中国对虾血清抗菌活力的测定结果 时间/d 抗菌活力 1 3 5 7 实验组 0.203?0.007 0.200?0.005 0.199?0.005 0.205?0.003 对照组 0.149?0.002 0.148?0.005 0.146?0.001 0.146?0.004 P < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0.0 1 注: 活力值为平均值?标准误差(N=5) 2.2.2 血清溶菌活力的测定结果 血清溶菌活力的测定结果见表2。结果表明:投喂虾康素后的第1，3，5，7天，实验组血清溶菌活力均高于对照组，且均差异极显著。其中，实验组血清溶菌活力在第7天时最高。 表 2 投放中草药饵料后中国对虾血清溶菌活力的测定结果 时间/d 抗菌活力 1 3 5 7 实验组 0.045?0.003 0.047?0.001 0.046?0.001 0.051?0.001 对照组 0.033?0.001 0.032?0.002 0.033?0.001 0.032?0.001 P < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0.0 1 注: 活力值为平均值?标准误差(N=5) 2.2.3 血清中ACP活力的测定结果 6 血清中ACP活力的测定结果见表3。结果表明:投喂虾康素后的第1，3，5，7天，对虾血清中ACP活力均为实验组高于对照组，且均差异极显著。其中，第1一第5天时实验组血清ACP活力逐渐升高后又开始降低，第5天时最高。 表 3 投放中草药饵料后中国对虾血清ACP活力的测定结果 时间/d 抗菌活力 1 3 5 7 实验组 1.939?0.171 2.172?0.101 2.188?0.093 2.058?0.087 对照组 1.255?0.076 1.258?0.026 1.255?0.023 1.244?0.052 P < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0 .0 1 < 0.0 1 注: 活力值为平均值?标准误差(N=5) 2.3 讨论与结论 无脊椎动物不具有特异性免疫系统，不能特异性地产生抗体，对外来物质的刺激主要表现为吞噬反应和产生一系列抗菌物质[40]。比较重要的抗菌杀菌物质包括:溶菌酶、ACP、酚氧化酶[41]、髓性过氧化物酶[41]、活性氧[42]、抗菌肽等。 5kg对虾配合饲料中，连续投喂中国对虾7d，在本研究将1g中草药饵料添加剂虾康素混合于1. 第1，3，5，7天均能显著增强中国对虾血清的溶菌活力、抗菌活力和ACP活力。溶菌活力和抗菌活力是对虾重要的免疫学指标，ACP为对虾参与异物降解的重要的水解酶，说明虾康素可显著增强中国对虾的免疫能力。 3 中草药饲料添加剂的在水产养殖中的应用前景 3.1 中草药饲料添加剂的在水产养殖应用中存在的问题 近年来，中草药饲料添加剂的研究和开发已取得了一定进展，且在一定范围内对提高水产动物生产性能和疾病控制等方面取得了较好效果。但仍存在许多问题亟待解决中草药饲料添加剂开发中尚存在的如下制约因素。 (1)中草药药物成分复杂，难以检测 中草药多为复杂的有机物，一味中药成分有数十种甚至上百种，主要成分有:生物碱、甙类、挥发油、鞣质、糖类、氨基酸、蛋白质、酶油脂、蜡、色素和无机成分等[43]。难以判定哪些化学成分为药用的唯一有效成份。此外，目前尚缺乏有关中草药添加剂的国家标准和统一的检测手段，对于未知的化学成份定量检测，由于中草药成分复杂，一般生产企业技术条件受限，难以做到。 (2)中草药的安全性待进一步验证 中草药是纯天然物，无论是作为兽药还是饲料添加剂，我们使用的是其有效成分，这些有效成分如果是人和动物可利用的营养物质，除非含量很高或用量过大，一般是无害的;但具有抗菌、杀虫作用和激素样作用，就未必对动物总是安全的，更不用说，许多植物原料本身对动物就是有 7 毒的。一味中药，其中的某些成分是否在体内残留或蓄积，残留期有多久，相关资料欠缺，因而其安全性受到质疑。 (3)中草药饲料添加剂配方缺乏科学评定标准 由于中草药成分复杂，作用机理不清，往往一个组方效果显著而没有系统的科学试验理论佐证，鉴于中草药配方无固定标准，设计配方时应针对不同动物的特征和生长阶段的需要，按照中医理论“辨证施治，理法方药”的原则，再借助现代科学方法和仪器分析手段，测定中草药中的有效成分和营养成分，进行组方。组方后必须进行试验。 (4)生产技术落后 目前生产的中草药饲料添加剂多是将原料药粉碎，搅拌均匀后，直接添加于饲料中，这种粗制品添加量大，应用效果不明显，要适应现代化饲料生产工艺要求，就必须针对单方或复方采取不同方法分离提纯，萃取或精制，获得其有效成分或生物活性物质，制成预混粉剂、备溶粉剂、颗粒剂口服液、包衣微囊剂等。用量少而效果明显，易于扩大推广应用。 (5)应用中存在的问题 目前大部分中草药添加剂是根据各省制定的兽药地方标准进行生产，由于地区和生产单位的不同，经常会出现同方异名、异方同名和同一类中草药添加剂所标明的作用和用途不同等问题。造成中草药添加剂市场的混乱，影响中草药饲料添加剂的进一步发展。 3.2在水产养殖中中草药饲料添加剂的研究方向 未来中草药饲料添加剂的研究和发展的重点应放在以下几个方面: (1) 微量化 目前用中草药作为饲料添加剂使用时，剂量普遍偏大，给工业化生产带来了诸多不便，饲料的适口性有时也受到影响。一般中草药添加量都在2%以上，甚至有的高达10%才起作用。所以应该对这些中草药进行提取和精制出发挥作用的活性成分，甚至应从几十种天然植物和中草药添加剂中筛选出数类有效成分，如生长刺激因子和抗病因子等，则只需在饲料中添加0.01%~0.03%即可。目前，国内一些生产单位采用超微粉碎进行生产，可能从根本上解决此类问题。我国农科院采用浸提技术，把中草药的有效成分浸提出来，再配上先进的生产工艺(如喷雾干燥等)，可望解决中草药的微量化问题，使中草药的利用率大大提高。 (2)系列化 中草药作为饲料添加剂或混饲剂的种类和配方很多，但功用往往综合庞杂，很少是精专方剂，而且都大同小异，所以应该根据动物的不同特性和生理需要，研制具有不同功用的中草药饲料添加剂，逐步形成生产系列。 (3)降低成本 应用纯中药作为饲料添加剂成本过高，发展前景受影响，是否可以从提取人用中药后的废弃物和一些尚未利用的其他茎、叶、果实中再次提取、精制，需要进一步研究，应寻找一种可行的工艺，在降低中草药饲料添加剂添加量的同时，降低成本。 (4)标准化 在进一步鼓励开发应用的同时，有关研制、生产和监察部门，应根据中草药饲料添加剂的特 8 点制定质量标准和检测方法，使其有规可循。 (5)作用机理 利用现代植物化学和仪器分析手段，对中草药中的有效成分，如多糖、甙类、生物碱、挥发油类等，进行提取、分离和鉴定;对中草药有效成分的作用机理进行深入研究，结合现代医药学、营养学和免疫学的方法，从体内营养物质的代谢利用途径、免疫调节机理和激素的分泌调控等方面进行探讨，研究其如何调节体内平衡，改善肠道微循环和微生物区系，以及免疫反应及体内其他生理生化反应;加强中草药饲料添加剂精制剂型的研究，并根据动物的不同生长发育阶段和生 产目的，针对不同的饲养条件，开发生产效果专一的中草药饲料添加剂。与此同时，制定相关检测标准，加强对中草药饲料添加剂原料和成品的质量控制和对产品的毒理安全研究。 3.3我国在中草药饲料添加剂领域的优势和发展前景 我国开发中草药饲料添加剂具有利条件，我国用中草药作饲料添加剂具有悠久的历史和广泛的群众基础。今天广大的农村中仍有许多中草药的古方、验方在畜禽饲养中被广泛使用。我国有丰富的中草药资源，现已查明中草药1.28万种，而目前开发用于饲料添加剂生产的约200种。因此，今后发展的潜力很大。中草药饲料添加剂是取自自然界的药用植物、动物、矿物及其他副产品的天然物质，具有多种营养成分和生物活性，兼有营养物质和药物的双重作用，既可以防治疾病，又能提高生产性能，而且能调节机体的免疫功能，具有非特异性免疫、抗菌作用。某些中草药有良好的适口性，可增进食欲，补充营养物质及促进代谢和生长;提高饲料利用效率，节约饲料。其主要优势:?低毒性，长期使用，不但可防病，还能改善产品质量;?无抗药性，中草药添加剂具有广泛性和协同性，一般不会出现抗药性;?可增强抗病能力，可通过调节机体去邪功能，抑制体内有害因子，增加机体抗病能力;?具有经济性和实用性，中草药饲料添加剂大多取之于中草药及其下脚料或废弃部分。 在当前水产养殖业迅速发展的情况下，特别是名特优水产品的养殖日益增加，促长防病的添加剂应用也越来越多;另一方面，随着人们生活水平的提高和环保意识的加强，对水产品的质量、药物残留和是否危害健康等问题也将更加关注。作为抗菌素、激素类添加剂替代物之一的中草药饲料添加剂，在水产养殖业中必将具有广阔的应用前景。 后 记 诚挚地感谢我的指导老师赵忠新老师，在工作繁忙之际给我提供的极大帮助和关怀，我的论文工作按时完成离不开他的正确指导;感谢整个实验过程中海洋局一所的李光友老师提供的资料及中科院海洋所的王永良老师提供的实验材料和帮助;感谢学习中心谭海燕老师在我学习期间给予的亲切关心，同时对支持我顺利完成论文的丈夫、父母亲、儿子、同事表示感谢。 9 参考文献 1 李爱杰主编. 水产动物营养与饲料. 北京:中国农业出版社，1996 2 李祥君. 饲料添加剂发展近况. 精细化工信息，1990，8:1~11 3 大孔吸附树脂在中草药化学提取分离中的应用(中草药，1980，11(3):138~141 4 王成(浅谈中草药饲料添加剂(中兽医医药杂志，1989，5:61~62 5 郎毅(中草药饲料添加剂研究应用概况(中兽医学杂志，1989，1:25~28 6 果仁义(关于中草药饲料添加剂实验研究中的几个问题及其应用前景(山东畜牧兽医，1990， 3:60~63 7 谢仲权(天然物中草药药理及其在水产业上的应用(北京水产，1998，1:15~16 8 谢仲权主编(天然物中草药饲料添加剂大全(北京，学苑出版社，1996 9 柴桂珍，刘冠章，赵晶晶，王吉姓(中药在水产养殖中应用前景(中国兽药杂志，1999， 33(2):52~54 10 向枭，周兴华，王进文(甲基睾酮对珍珠玛丽鱼及红剑尾鱼体色影响的初步研究( 11 内陆水产，1999，9:18~19 12 向枭，周兴华(中草药添加剂在水产养殖上的应用(粮食与饲料工业，2000，3:27~29 13 彭玉麟，参木有(中草药饲料添加剂开发中存在的问题及对策(中国饲料，2001，8:31~33 14 吴德峰(中草药饲料添加剂现状及前景. 中国中医药信息杂志，2001，1:31~33 15 吴德峰(中草药饲料添加剂现状及前景(?)(中国中医药信息杂志，2001，3:38~39 16 张镜澄主编(超临界流体萃取(北京，化学工业出版社，2000 17 徐莲英，陶建生，冯怡，张彤，朱卫车(中药制剂发展的回顾(中成药，2000，22(1):6~21 18 尹梅(汤剂提取效率的研究(中成药，1995，17(6):45~46 19 韩桂茹，徐韧柳，冯丽，杨建红，陈太平，付永淳(水提醇沉对中药各类有效成分的影响(中 国中药杂志，1993，18(5):286~287 20 中国医学科学院药物研究所植化室主编(大孔吸附树脂在中草药化学提取分离中的应用(中 草药，1980，11(3):138~141 21 苗青，许家鸾(絮凝剂应用于中药提取液澄清工艺的初探(现代应用药学，1994，5:13 22 覃珑，蒋玲(超滤工艺在中药制剂中的应用概况(时珍国药研究，1997，(2):175~176 23 袁明德(论离心沉降和沉降式离心机在中药提取的应用(中成药，1996，18(6):44 24 刘华(分子蒸馏新技术在天然产物分离和其他领域的应用(中药材，1999，22(3):152 25 李迎春，曾健青(超临界流体萃取中草药的研究进展(广州化学，2000，25(3):59~64 26 彭洪，郭振德，张镜澄，吴金刚，刘莉玫(银杏叶超临界C02萃取产物的成分研究(中草 药，1996，27(增刊):45~46 27 韩如政，庞家彪(鱼用中草药添加剂的初步研究(饲料工业，1993，14(2):38~39 28 赵建培，黄谚谚(莨菪类药对尼罗罗非鱼生长的影响(福建水产，1994，6(2):5~6 29 曾虹，任泽林，郭庆(大蒜素在罗非鱼饲料中的应用(中国饲料，1996，1:29~30 30 吴新民，杨金晓，范葵红，郗艳娟，张建通，韩春如(麦饭石对中国对虾生长发育的影响(饲 料研究，1996，1, 11~12 10 31 柴桂珍，刘冠章，赵晶晶，王吉姓(中药在水产养殖中应用前景(中国兽药杂志，1999， 33(2):52~54 32 段铭，冯现伟，高宏伟，朱世成(复方中草药添加剂饲喂鲫鱼试验(饲料，1999，20(10): 32 33 张兆华(中草药添加剂有效成分及免疫机理的研究(中国饲料，1997，13:20~22 34 陈月英，叶金云(一龄草鱼促长防病饲料添加剂VM-I号的正交试验(淡水渔业，1993， 10(3):7~10 35 张兆华，周正度，倪和宪(中草药在养鳖生产上的应用(中国饲料，1999，6:12~13 36 郭建坤，杨雪珍，景建江，李红顺，赵建文(中药治疗红鳟鱼链球菌病(淡水渔业， 1999，29(12):27 37 程忠刚(饲料诱食剂的应用研究(饲料工业，2001，22(8):18~24 38 童圣英，赵艳，李宏，王子臣(几种常见中草药对皱纹盘鲍摄食行为的影响(大连水产学 院学报，1998，13(4):71~73 39 王雷，李光友, 毛远兴，中国对虾某些血淋巴因子中的抗菌溶菌活力与酚氧化酶活力的测 定及其特性研究. 海洋与湖沼，1995,26(2);179~185. 40 孙虎山，李光友. 栉孔扇贝血淋巴中ACP和AKP活性及其电镜细胞化学研究.中国水产科 学，1999,6(4): 6~9. 41 孙虎山，李光友. 双壳贝类参入免疫防御的体液因子.海洋科学，2001,25(4):34~36. 42 孙虎山，李光友. 栉孔扇贝血淋巴中酚氧化酶和髓过氧物活性.中国水产科学，1999,6(2), 9~13. 43 孙虎山，李光友.硒多搪和酵母多糖对栉孔扇贝血淋巴中二种抗氧化酶活力的影响.中国海洋 药物.2000,19(5):20~23。 44 朴香淑，李德发(中草药饲料添加剂促进畜禽生长性能研究现状及展望(饲料工业，2002, 23(1):12~15 11