建立hplc用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证[指南]

建立hplc用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证[指南] 建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证 1040314 潘明 对原实验选用方法进行改进的原理: 黄芩苷有两个最大吸收波长，分别为278nm和315nm，因为双黄连口服液中另一主要成分绿原酸的最大吸收波长为326nm，为保证得到良好峰形，仍采用278nm为波长。黄芩苷为黄酮类化合物，有多酚羟基结构，在低温和酸性条件下稳定，一般将pH控制在3-4之间。原实验用冰醋酸调节pH，但醋酸有易挥发不稳定的缺点，所以改用0.4%的磷酸溶液(低浓度减少磷酸盐对色谱柱的侵蚀)，流动相为甲醇-0.4%磷酸(50?50 )。 改进后实验条件: 色谱柱:C18(250mmX4(6mm，5μm ); 流动相:甲醇-0.4%磷酸(50?50 ) 流速:1.0ml/min 进样量:20µl 柱温:室温 理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1500 样品含量的测定方法: 取样品溶液，按上述色谱条件，进样测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 方法学验证: 1.专属性实验 空白溶液:甲醇-0.4%磷酸(50?50 ) 黄芩苷对照品溶液制备:精密量取黄芩苷对照品适量，精密称定，制 成0.1mg/ml溶液 供试品溶液:精密量取双黄连口服液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声波处理20min，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀， 即得 不含黄芩苷的阴性对照供试品溶液制备,原则上需要,制备复杂,本实验不做 取上述溶液分别进样，测定，观察在相同位置上是否有与标准品溶液对应的峰，表明空白对照无干扰 2 回收率实验 取制得的供试品溶1ml置于10ml容量瓶中，共6份 。精密量取黄芩苷对照品0.013g，0.016g和0.019g各两份，分别加入上述6份溶液中，依法测得其含量，并计算回收率。(加入的标准品一般为供试品含量的80% 100% 120%) 加样回收率=(测得量-本底量)/加入量 ×100% 3.线性范围考察 精密量取上述黄芩苷对照品溶液1，2，3，4，5，6m1分别置于lOml量瓶中，加5O% 甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别取20µl进样，记录色谱图。以峰面积y对对照品进样量(mg/ml)线性回归，得黄芩苷标准曲线。 4 精密度实验 (1)进样精密度:取供试品溶液20µl，重复进样6次，计算RSD (2)重复性:精密量取同一批号样品6份，按样品溶液的制备方法，分别配置供试品溶液，测定黄芩苷的含量，计算RSD。 ,3,中间精密度,取同一批样品,甲乙两个操作员在两台不同的一起上分别独立操作,计算RSD,一般仅在报批时测定,本实验不做, 5.检测限与定量限 信噪比3:1测检测限，信噪比10:1测定量限 6.供试品稳定性实验 取重复性实验中的第一份溶液，室温下在0，3，6，9，12 小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温12小时内基本稳定 7.重现性实验 在不同的实验室,不同的工作人员,不同的仪器,不同的化学试剂来源的条件在测定,一般仅在报批时测定,本实验不做, 8.耐用性实验 改变流动相的组成,流速和pH值,不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱,柱温。考察条件改变对结果的影响及影响大小,本实验不做, 专业好文档精心整理 欢迎下载