论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定

论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定 论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定 文章标题:论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定 摘要:采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。结果明，从蛋黄提取的卵磷脂粗品经柱层析纯化，精制卵磷脂的纯度达99.6。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量，有较高的准确度。关键词:卵磷脂;纯化;含量;测定1引言卵磷脂又称为磷脂酰 胆碱，是磷脂酸的衍生物，由甘油与脂肪酸和磷酸胆碱结合而成。卵磷脂广泛分布于动物、植物和酵母中。卵磷脂是构成细胞等生物膜、脑组织和神经组织的重要组成成分[1]，对酶的活性也起重要的作用，而且也是乙酰胆碱的重要供给源[2]。卵磷脂因为其乳化特性和安全性，可用于生产人工血浆、脂乳剂。临床上可用于治疗动脉粥样硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良、胆固醇结石的防治药物及静脉注射脂肪乳的乳化剂。在食品、化妆品和医药领域有着广泛的用途。目前，卵磷脂的来源主要是从鸡蛋黄、大豆和猪脑中提取。传统提取卵磷脂的几种方法，如用二甲醚从生蛋黄中提取卵磷脂、用乙醇和酸类从生蛋黄中提取卵磷 脂、用丙酮提取卵磷脂和冷冻蛋黄，用乙醇和己烷将卵磷脂与中性脂进行分离，提取卵磷脂等方法，这些方法提取的卵磷脂达不到食品和医用的高纯度[3]，因此，必须对粗产品或市售的卵磷脂进行纯化。在本工作中，作者采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。2实验部分2.1试剂和仪器蛋黄卵磷脂(卵PC)(自提);中性三氧化二铝(200-300目);硅胶G;氯仿(Ar);甲醇(Ar);乙醚(Ar);浓硫酸(Ar);钼酸铵(Ar);30过氧化氢(Ar);磷酸二氢钾(Ar);层析柱(Ф15cm，L40cm);紫外检测仪(自制);台式平衡仪(上海大华仪表厂);分光光度计(日本岛津);EYELASb-2000旋转蒸发仪(上海EYELA有限公司)。2.2实验方法和结果2.2.1蛋黄卵磷脂的提取取12克蛋黄置于150mL的锥型瓶中，加入35mL乙醚，搅拌10min，放置20min，过滤，于45oC的条件下，用旋转蒸发仪蒸干乙醚，再放入真空干燥器减压干燥20min，彻底除尽乙醚，粗提取物离心10min，取出下层的卵磷脂，约为2克。2.2.2蛋黄卵磷脂的精制在层析柱中装入25克中性三氧化二铝为固定相，将1克提取的卵磷脂溶于氯仿，以9:1(V V)的氯仿:甲醇为洗脱液，紫外检测仪接台式平衡记录仪监测收集第二组分[4]，在氮气气氛中旋转蒸干洗脱液得精制的卵磷脂0.6克，充 氮气冰箱保存。经过精制的卵磷脂用硅胶G板薄层检验只有一个斑点。 2.2.3卵磷脂含量的测定曲线的绘制:用消化定磷法测定卵磷脂的 含量。按表1中的数据娶浓度为5.718mg mL的磷酸二氢钾标准溶液于小离心试管中，各加入0.5mL5mol L的硫酸，于150-160oC的烘箱中消化3小时，冷却，加入30的过氧 化氢两滴继续消化1小时，冷至室温，加入4.6mL0.22的钼酸铵溶液， 再加0.2mLFSr试剂，于100oC水浴上加热7min，于室温下于810nm测 定吸光度A，结果列入表1。样品的测定:同法测定测定卵磷脂的吸光 度，通过回归方程求得卵磷脂中磷的含量，按卵磷脂的摩而质量即可求 得卵磷脂的含量。用消化定磷法测定精制卵磷脂的纯度达99.6。表1 消化定磷法的标准曲线数据 _______________________________________________________________________________No1234567_______________________________________________________________________________KH2PO4 ml0.000.501.001.502.002.503.00KH2PO4 μg0.0002.8595.7188.57711.4414.3017.15P μg0.0000.6521.3031.9552.6063.0253.909A0.0000.0940.2100.3340.4500.5600.675_______________________________________________________________________________回归方程为: Y=0.1753X―0.01072r2=0.99643结论采用柱层析的方法对提取的卵磷 脂进行纯化，精制卵磷脂的纯度高，可达到食品和医用要求的高纯度。 用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量。参考文献 [1]Gregoriadis,G.,etal:LiposomeTechnologyVol.IChapter18,252-254[2]宋启煌，叶云.超临界CO2卵磷脂的研究.广东化工.1999，26(2): 37-38[3]张建华，刘荣春.卵磷脂的提取的实验研究.中国药业.1998，7 (7):38-40[4]ThejournaloftheAmericanoilchemists’ society1965,42:53-56 《论蛋黄卵磷 脂的纯化及含量的测定》论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定。