剑叶龙血树芽外植体诱导分化

剑叶龙血树芽外植体诱导分化 剑叶龙血树芽外植体诱导分化 第39卷第3期 2010年9月 广西林业科学 GuangxiForestryScience Vl01.39No.3 S印.2010 文章编号:1006—1126—2010(3)一0144—03 剑叶龙血树芽外植体诱导分化 黄莉雅,陈国臣,马锦林 (广西林业科学研究院,南宁530002) 摘要:以健康无病虫害的剑叶龙血树的顶芽和侧芽为外植体,摸索外植体的消毒方 法,研究不同植物生长调 节剂浓度配比对诱导芽分化的影响,同时比较了不同吸附剂的防褐化效果.结果 明:0.1%HgCh消毒9min 时,存活的无菌芽比率最高;MS+6一BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L培养基能较好的诱 导剑叶龙血树芽的形成; 在培养基中添加1.0g/L的PVP作为吸附剂时防褐化效果较好. 关键词:剑叶龙血树;外植体;芽分化 中图分类号:s723.132文献标识码:A. 剑叶龙血树(Dracaenacochinchinensis)和海 南龙血树是目前国内公认的国产龙血竭的基源植 物,其它龙血树品种多作园林造景和观赏用[1_2l. 剑叶龙血树,又名千年木,血竭树,交趾龙血 树,分布于北纬21.5,23.6.地区,以东南亚的柬 埔寨,老挝,越南等国为主要产地.在我国,剑叶 龙血树在云南主要分布在思茅,普洱,孟连镇康等 地,在广西主要分布在106,107.5.E,22,23.N 的宁明,龙州,大新,崇左,靖西,天等,扶绥和 凭祥等县市的石山上.近年来,随着市场对龙血竭 需求的不断扩大和对龙血树野生资源的掠夺性采伐 和环境的破坏,剑叶龙血树野生资源日趋枯竭,濒 危灭绝,被国际上很多国家列为珍稀濒危保护植 物.因此,加强剑叶龙血树繁育研究,积极保存, 保护剑叶龙血树种质资源具有重要意义.本文通过 对剑叶龙血树芽分化的影响研究,探索剑叶龙血树 的组织培养,以期为保护剑叶龙血树种质资源 提供参考. 1材料与方法 1.1试验材料来源 供试材料采自广西崇左市剑叶龙血树自然保护 区. 1.2试验材料预处理 采集剑叶龙血树带回实验室,去掉叶子,用流 水冲洗干净后用中性洗衣粉水轻洗枝条,接着置于 流水下冲洗2,3h,置于无菌超净台上备用. 1.3试验方法 1.3.1外植体消毒处理方法 预处理后的外植体用75%酒精快速灭菌30S 后用无菌水冲洗3,4次,接着用0.1%Hg;lz消 毒处理时间分别为7,8,9,10min,消毒过程中 加入两滴吐温,最后用无菌水冲洗3,4次后接种 到诱导培养基上.每种处理20个样本,重复3次. 接种后对试验结果进行观察,统计外植体的污染 率,存活率,摸索最佳的剑叶龙血树芽外植体消毒 时间. 1.3.2植物生长调节物质对剑叶龙血树芽分化的 影响 以MS为基础培养基,附加6一BA和NAA2 种植物生长调节物质,6一BA分别为3.0,4.0, 5.0,6.0mg/L4个浓度,NAA分别为0.3,0.4, 0.5,0.6mg/L4个浓度,共16个处理.观察不同 处理对剑叶龙血树芽分化的影响,寻找最适合的激 素配比. 1.3.3不同吸附剂的防褐化效果比较 在MS+6一BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L培 养基中分别添加0.5,1g/L的活性炭和聚乙烯比 基金项目:剑叶龙血树高产栽培示范(桂科政0718002—3—9) 作者简介:黄莉雅(1985一),女,硕士研究生,研究方向:经济林栽培与育种研究. 通讯作者:陈国臣(1964一),男,高级师,主要从事经济林育种与栽培技术研究. 第3期黄莉雅,陈国臣,马锦林:剑叶龙血树芽外植体诱导分化145 苎篓警寻找最适合剑叶龙2结果与血树外植体防褐化吸附剂及用量. ,.,.… 2.1不同消毒时间的处理效果比较 表1不同消毒时间的处理效果比较 死亡率指:未污染芽中死亡芽占总接种芽数的比率;存活率指:未污染芽中存活芽占总接种芽数的比率 结果如表1所示,延长0.1%HgC12消毒处理 的时间可以有效降低剑叶龙血树组织培养的污染 率,特别是处理8min和处理9min的差异最明 显,污染率下降14%.但是当0.1%HgC12处理时 间超过9min后,死亡率升高,处理10min比处 理9min死亡率升高19%.由此可见,要严格控制 0.1%HgCI2消毒处理的时间,保证存活率.所以, 在剑叶龙血树组织培养中,01%HgCI2消毒处理 的时间为9min效果较好,存活率达到42%. 2.2不同植物生长调节剂对剑叶龙血树芽分化的 影响 表2植物生长调节剂对剑叶龙血树组织培养的影响 表中不同的字母表示差异显着,相同字母表示差异不显着. 146广西林业科学第39卷 表2的结果显示,不同浓度的6一BA和NAA 对剑叶龙血树组织培养中芽的分化和愈伤组织的产 生有不同的影响.尤其是6一BA,对芽的分化影 响很明显,表现为随着浓度的升高,芽的诱导率也 逐渐升高.6一BA浓度过低,外植体会逐渐变白 或者褐化,并最终死亡;浓度过高外植体会逐渐玻 璃化.NAA主要对愈伤组织的产生有影响,随着 浓度的升高愈伤组织出现得也越多.NAA浓度低 时不出现愈伤组织,浓度过高抑制芽的分化.当6 一 BA和NAA的浓度分别为5.0,0.5mg/L时, 诱导率最高,达到32%.运用SPSS数据处理软件 对试验数据进行方差分析的结构也表明,激素配比 6一BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L与其它激素配比 有显着差异.结合诱导率可表明,其诱导效果最 好,表现为外植体先转绿后大部分在叶腋处抽生小 芽,并出现嫩绿的愈伤组织. 2.3不同吸附剂的防褐化效果比较 表3不同吸附剂的防褐化效果比较 从表3中可以看出,2个浓度的活性炭的褐化 率均高于PVP,均不利于芽的分化,而且浓度越 高越抑制芽的分化.当PVP的浓度为1.0g/L时, 褐化率最低为27%,此时外植体也抽出嫩绿的小 芽和出现嫩绿的愈伤组织;当PVP的浓度为0.5 g/L时,褐化没有得到很好的抑制,芽的分化也不 理想.所以,PVP只有在合适的浓度时才会对剑 叶龙血树芽分化产生积极的作用. 3小结与讨论 在植物组织培养中,外植体的消毒是至关重要 的一个环节J.培养基激素不同配比和不同吸附 剂的使用对芽分化生长也有很大的影响.这些差异 会导致外植体生理生化状态差异,从而影响组织培 养的形态发生. (1)外植体消毒时,消毒药剂浓度太低,时间 太短,不利于污染的控制;消毒药剂浓度太高,时 间太长,会破坏外植体的细胞,由于细胞对自身的 保护,细胞就不断的产生大量次生物质,从而引起 细胞毒害,产生褐化甚至死亡,导致外植体的存活 率下降.剑叶龙血树组织培养采用75%酒精30S, 0.1%HgC12消毒9min左右,基本上能达到较好 的消毒效果.0.1%HgC12处理的时间比较长,是 因为剑叶龙血树苞叶夹层较多,细菌也积累得多, 要用足够长的时间才能保证消毒的彻底性. (2)不同的植物生长调节剂浓度对芽的分化有 显着的影响.本试验中设立了16个激素配比,其 中当6一BA和NAA的浓度分别为5.0mg/L,0.5 mg/L时,芽分化最佳.由此说明,6一BA和 NAA的浓度既不能过高也不能过低. (3)在植物组织培养中,培养基中添加吸附剂 是抑制外植体褐化的有效方法.活性炭,PVP是 最常见的培养基吸附剂,能吸附培养基中的有害物 质.但是,活性炭的吸附作用是没有选择性的,在 吸附褐变物质的同时,也会吸附培养基中的生长调 节物质,而使其失去作用,因而对外植体的诱导愈 伤组织会产生一定的负面影响.PVP是酚类物质 的专一性吸附剂,不会吸附培养基中的生长调节物 质,抗褐能力明显优于活性炭[4-6J.本试验在培 养基中添加1.0g/L1PVP作为吸附剂时,剑叶龙 血树芽分化效果比较理想. (4)剑叶龙血树还存在,芽诱导率偏低,外植 体褐化严重等问.因此,要建立完善的剑叶龙血 树组织培养体系还需要进一步的研究. 参考文献 [1]曹郡双,秦荣和.中药血竭的现代研究概述[J].现代中 西医结合杂志,2001,10(10):39—42. [2]钟蕾,宓鹤鸣.国产血竭的药理作用研究进展[J].药 学实践杂志,2002(6):37—39. [3]谭文澄.观赏植物组织培养技术[M].北京:中国林业出 版社,1997. [4]陈菲,李黎,官伟.植物组织培养的防褐化探讨 [J].北方园艺,2005(2):69—71. [5]曾镭,刘燕.植物组织培养中褐化问题的研究[J]. 安徽农学通报,2007,13(14):49—5O. [6]叶梅,王伯初,段传人.植物组织培养外植体褐变的研 究进展[J].生物技术通讯,2004,15(4):426—428.