【doc】癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析
癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分
析
第16卷第3—4期
2003年11月
同位素
JournalofIsotopes
Vo1.16NO.3—4
NOV.2OO3
癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析
许文革,侯惠仁,王凤林,韩世泉
(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京102413)
摘要:采用了两株CEA单克隆抗体(McAb),一株用于固相包被,另一株用于标记制备I-CEAMcAb,研制
了一步法CEA免疫放射分析(IRMA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.5g/I,批内变异系数<10.0,批间变
异系数<15.0,回收率为97.4,108.9,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参
考值<10.0>g/L.
关键词:癌胚抗原(cEA);固相包被;免疫放射分析(IRMA);单克隆抗体(McAb) 中图分类号:R817.4;R446.62文献标识码:A文章编号:1000—7512(2003)03—04—018603
癌胚抗原(CEA)是一种肿瘤相关抗原,由
Gold和Freeman于1965年首次提出,该抗原为
一
种糖蛋白,用I3电泳法测得其相对分子量约为
200000,由一个单链蛋白(约800个氨基酸)及
糖侧链组成,糖链部分占其相对分子量的5O
,
8Ol1].CEA是目前应用较广泛的诊断癌症 的血清肿瘤标志物,常吸烟者,老年人和乳腺, 肺,卵巢及膀胱癌转移者的血清CEA含量升 高.CEA值增高是非内胚层来源癌(乳腺和卵巢 等)患者肿瘤活性的一种敏感指标ll2,.常规和 连续测定血清CEA是目前最好的,非创伤性的 对结肠,直肠癌患者术后随诊和监测肿瘤扩散复 发的措施.CEA值的提高
明有病变残存或进 展:外科手术切除干净后6周,CEA水平一般应 恢复正常,否则提示有残存肿瘤;CEA值逐渐升 高提示局部复发,快速升高表明有肝或骨转移. 同时其它恶性肿瘤均伴随有CEA不同程度的 升高I6].因此,血清CEA的测定已成为一项常 规的检测项目,常规和连续测定血清CEA对癌 症的诊断,治疗及预后有重要的临床意义. 为临床更方便,快捷地测量血清CEA含 量,本工作拟采用一步法研制CEA免疫放射分 析(IRMA)试剂盒.
?
和方法
]I.1主要试剂和仪器
癌胚抗原(CEA)为国产;包被和标记用 IvlcAb购自芬兰;无载体NaI溶液购自美国杜 :郎公司,放射性活度为1.3×10Bq/#L;聚苯乙 烯六角试管为黄岩塑料厂产品;SephadexG一50 为北京经科化学试剂公司提供.
1.2实验方法
1.2.1标记物的制备采用氯胺T法用NaI 际记CEAMcAb,用SephadexG,50分离标记抗
体.标记率大于45,放化纯度大于9O,比活 度为11.2GBq/g.
1.2.2固相抗体的制备向聚苯乙烯包被管中 加入含CEAMcAb0.1mol/i,pH9.6的碳酸缓 冲液,每孑L250l,室温过夜,后用封闭液37C 封闭2h.
1.2.3
品的配制将CEA抗原标定后用 小牛血清依次稀释,配制成O,100g/L的系列 标准品.
1.2.4CEA—IRMA分析程序采用一步法加 收稿日期:2003—03—18;修回日期:20031o22 作者简介:许文革(1975,),男(汉族),大连人,助理
师,放射免疫分析专业
第3—4期许文革等:癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析l87
样程序.取已包被了抗体的包被管做双孔,每管 加100/2L标准品或样品,再加100tdI—CEA McAb,37C温育3h,弃反应液,用洗涤液 (0.025mol/L,pH7.4PB)洗三次(每次500 L),用7计数器测量包被管的放射性计数率 (min),绘制标准曲线,并计算血样CEA含 量.
2结果
2.1方法学鉴定
2.1.1标准曲线及灵敏度CEA免疫放射分 析标准曲线示于图1.同时测得10个零标准的 CEA含量,以+25计算得其分析灵敏度为0.5 tLg/L.
CEA浓度/pg.L
图1CEA—IRMA标准曲线
表1CEA—IRMA试剂盒的批内与批间变异 2.1.2精密度重复测定2份不同含量CEA 人血清标本,观察批内,批间变异,结果列于表1. 由表1可知,批内变异系数小于10.O,批间变 异系数小于15.0.
2.1.3准确性取3份不同CEA含量的血清 样品,分别加入一定量的CEA标准品,测定 CEA的回收率,结果列于表2.由表2可知,本方 法回收率为97.4,107.8%.
表2CEA—IRMA回收实验结果
2.1.4稀释试验取CEA含量较高的人血清 进行倍比稀释,测定结果列于表3.经计算样品 的稀释相关系数为0.993.
2.1.5特异性用零标准品对高浓度的AFP, PSA,PAP进行系列稀释(1O,1000#g/L),并 作为样品在本系统中测定,结果显示AFP, PSA,PAP在浓度低于1000tLg/L时无任何交 叉反应.
2.1.6"Hook"效应配制一系列高浓度CEA 样品,用本方法进行测量,结果表明,当浓度达到 1000#g/L时,未见"Hook"效应.
表3样品倍比稀释后的CEA含量
稀释倍数CEA含量/ug?I
2.2正常参考值
测定了35例健康人血样,以+25为血清 CEA含量的正常参考值上限,其CEA含量的平 均值为1.78tLg/L,标准差为1.21tLg/L,正常参 考值上限为4.2tLg/L,与目前大多数方法采用 的正常值小于10.0ug/I基本一致.
3小结
研究结果表明,本工作研制的CEA—IRMA
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分析试剂盒准确性,精密度,重复性均符合质量
控制要求,适用于临床检测和科研应用.
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TheEstablishmentofImmunoradiometricAssayfor CarcinoembryonicAntigen
xuWen—ge,HOUHuiren,WANGFeng—lin,HANShi—quan
(DepartmentofIsotope.ChinaInstituteofAtomt~Energy,Beijing102413,China)
Abstract:TWOanti-CEAmonoclonalant1bodlesareused,onelScoatedontubes,andtheoth
er1Sla
beledwith.ItoprepareI-CEAMcAb.Theonestepassayisestablishedbasedonimmunora—
diometricassay(IRMA).Thesensitivityoftheassayis0.5/xg/I.Theintra—
assayCVsandthein—
ter—assayCVsarelowerthan10.0and15.0,respectively.Theanalyticalrecoveriesare97.4
,
108.9.ThereferencecutOUtvalueofnormalserum(一35)islowerthan10.0/xg/L. Keywords:CEA;solidphaseseparation;IRMA;monocloneantibody(McAb)