高葡萄糖浓度培养基对常用抗菌素最低抑菌浓度的影响

高葡萄糖浓度培养基对常用抗菌素最低抑菌浓度的影响 高葡萄糖浓度培养基对常用抗菌素最低抑 菌浓度的影响 ModDiagnTreat现代诊断与治疗2008July19(4) 高葡萄糖浓度培养基对常用抗菌素最低抑菌浓度的影响 InfluenceofHighGlucoseMediumonMinimumInhibitoryConcentrationofCom— mortAntibiotic 潘小清,王占科,蔺静(1.解放军第94医院检验科,江西南昌330002;2.解放军总医院第一附属医院检验科,北 京100070) 摘要:目的探讨高葡萄糖浓度血浆铜绿假单孢菌常见抗菌素最低抑菌浓度(MIC)结果变化,为高血糖感染患者临床合 理使用抗菌素剂量提供实验依据.方法配制5.OmmoVL和20.0mmol/L葡萄糖浓度的新鲜冰冻血浆为MIC试验所用 液体培养基,观察铜绿假单孢菌的哌拉西林,头孢哌酮,阿米卡星和环丙沙星MIC的变化.结果20.OmmoVL血浆葡萄 糖浓度铜绿假单孢菌的哌拉西林,头孢哌酮,阿米卡星和环丙沙星MIC均明显高于5.0mmol/L葡萄糖浓度血浆. 高葡萄糖浓度血浆中抗菌素抗菌水平相对正常葡萄糖浓度血浆明显受到抑制,高血糖感染患者可适当上调抗菌素使 用剂量,以达到最佳抗感染效果. 关键词:高血糖;感染;最低抑菌浓度;铜绿假单孢菌;抗菌素 中图分类号:R969.3文献标识码:A文章编号:1001-8174(2007)04-0215-02 严重创伤及糖尿病患者出现高血糖症是细菌感染 的危险因素….合理使用抗菌素剂量是合理使用抗 菌素的重要内容,最低抑菌浓度(MIC)是指导临床合 理应用抗菌素有效剂量的重要依据.高血糖感染患者 抗菌素合理使用剂量可能与正常血糖感染患者不同, 但尚缺乏实验室直接证据.铜绿假单孢菌为创伤外科 感染常见条件致病菌,为此,我们以铜绿假单孢菌为研 究对象,配制正常和高葡萄糖人血浆为MIC试验所用 液体培养基,模拟人体不同血糖浓度抗菌素杀菌环境, 观察铜绿假单孢菌的哌拉西林,头孢哌酮,阿米卡星和 环丙沙星MIC变化,旨在为高血糖感染患者临床合理 使用抗菌素剂量提供实验依据,现报道如下. 1材料与方法 1.1菌株来源铜绿假单孢菌标准菌株ATCC27853 (由江西省临检中心提供)接种在M—H培养基(浙江 温州康泰科技有限公司生产)中,35%培养至微混浊, 再调节至0.5麦氏管浓度(108cfu/m1),备用.严格按 照文献[2],铜绿假单孢菌标准菌株(ATCC27853),哌 拉西林(山东济南齐鲁制药有限公司生产),头孢哌酮 (北京利祥制药有限公司生产),阿米卡星(山东济南 齐鲁制药有限公司生产)和环丙沙星(四川成都科伦 药业股份有限公司生产)M—H液体培养基MIC符合质 量控制要求. 1.2正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基制备取3 份健康人0型新鲜冰冻血浆100毫升(由江西省中心 ?基金项目:江西省卫生科技计划资助项目(20052044) 血站提供,血浆葡萄糖浓度均小于5.Ommol/L)混合. 根据血浆基础葡萄糖浓度,准确称取加入高温灭菌后 的葡萄糖,使血浆葡萄糖终浓度分别为5.Ommol/L和 20mmol/L.配制后的不同葡萄糖浓度血浆经3天培 养无细菌生长后,备用. 1.3正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基铜绿假单孢 菌繁殖速度测定从0.5麦氏管浓度M.H液体培养 基中,取5微升分别转接到5毫升正常葡萄糖浓度,高 葡萄糖浓度人血浆以及M.H液体培养基中.35?培 养6小时后,参考文献[3]进行细菌计数,重复试验10 次. 1.4正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基MIC测定 哌拉西林,头孢哌酮,阿米卡星和环丙沙星用蒸馏水稀 释成64mg/ml浓度,然后用不同葡萄糖浓度血浆进行 1000倍稀释,配制成641.zg/ml抗菌素原液.参考文献 [3]在紫外线消毒后的微孔板(12×6)上进行l1次倍 比稀释,最后1孔不加抗菌素做空白对照,每孔液体最 后体积为200微升.然后取0.5麦氏管浓度的铜绿假 单孢标准菌株10微升分别加入含有不同浓度抗菌素 的微孔内.35?水浴20小时后,观察每个孔细菌生长 情况,结果判读严格按照文献[2].每种抗菌素重复 12次(2个微孔板),求均值和标准差.为减少加样偶 然误差,小于或等于500毫升的液体量出和量人,均采 用微量加样器(上海求精生化试剂仪器有限公司生 产)进行,所有加样器吸头以及试管和吸管均灭菌处 ModDiagnTreat现代诊断与治疗2008July19(4) 理后使用. 1.5统计学处理数据经SPSS10.0forwindows统 计软件,通过微机进行单因素方差分析t检验,P<0. 05为有统计学意义. 2结果 2.1正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基细菌繁殖速 度比较结果表明,高葡萄糖浓度人血浆培养基同样 条件下培养6小时后细菌数量明显高于正常葡萄糖浓 度血浆培养基(P<0.01).高葡萄糖浓度血浆培养基 铜绿假单孢菌繁殖速度明显高于正常葡萄糖浓度血 浆.见表1. 表1正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基同时培养6小时后 细菌数量比较 注:与正常葡萄糖浓度比较,:P<O.O1 2.2正常和高葡萄糖浓度人血浆培养基铜绿假单孢 菌不同抗菌素MIC比较结果表明,高葡萄糖血浆培 养基哌拉西林,头孢哌酮,阿米卡星和环丙沙星MIC 均明显高于正常葡萄糖血浆培养基(P均<0.01),正 常葡萄糖血浆培养基MIC明显高于M—H培养基(P均 <0.01).见表2. 表2不同葡萄糖浓度血浆培养基铜绿假单孢菌的哌拉西林, 头孢哌酮,阿米卡星和环丙沙星MIC变化 重复哌拉西林头孢哌酮阿米卡星环丙沙星 次数(Hd)(Hd)("Hd)("舀/Hd) 正常葡萄糖浓度12Q12~0.07'0.21?n12'Q11~0.07'0.07?n?' 壹笪垫堕鎏鏖:翌圭:堡竺圭翌圭圭 注:与正常葡萄糖浓度比较,:P<0.01 3讨论 3.1葡萄糖是细菌生长重要能源物质葡萄糖是细 菌生长和繁殖所需要的重要能源物质,而蛋白质和脂 肪必须通过细菌分泌的胞外酶降解成小分子才可以被 利用.铜绿假单孢菌感染常见于创伤或烧伤创面和手 术后伤口,引起脓毒血症,导致多器官功能不全综合 征,死亡率很高Hj.血浆葡萄糖相对血浆蛋白和脂类 来说,是细菌生长和繁殖良好的培养基,血糖浓度水平 是评价细菌在人体内生长繁殖环境营养的重要标记. 我们的结果表明,高葡萄糖浓度血浆培养基铜绿假单 孢菌生长速度明显高于正常葡萄糖浓度血浆,为高血 糖患者容易发生细菌感染提供实验室证据. 3.2血浆培养基细菌MIC测定更接近体内环境用 M—H培养基做MIC试验,虽然容易统一标准和质量控 制,但难以模拟人体内血液或体液不同营养程度的抗 菌素杀(抑)菌实际环境.M—H培养基MIC试验结果 是抗菌素在体外细菌最佳生长繁殖环境下的MIC,并 不能反映不同机体内抗菌素MIC的实际情况.用血 浆代替M—H培养基,接近人体内抗菌素发挥作用的实 际环境,使MIC更具有临床指导意义. 3.3高葡萄糖浓度血浆培养基MIC升高及意义我 们以正常人群空腹血糖正常参考范围为依据,配制高 葡萄糖和正常葡萄糖浓度人血浆代替M—H培养基,结 果发现,高葡萄糖浓度血浆哌拉西林,头孢哌酮,阿米 卡星和环丙沙星MIC明显高于正常葡萄糖浓度血浆, 提示细菌生长繁殖环境营养越好,抗菌素抗菌效果越 差,高葡萄糖浓度血浆中抗菌素抗菌水平明显受到抑 制,高血糖感染患者应适当上调抗菌素使用剂量,以达 到最佳抗感染效果. 3.4高葡萄糖浓度血浆培养基MIC升高机理抗菌 素抑制或杀死细菌都需要一个过程J,机体感染细菌 数量,取决于抗菌素导致细菌死亡速度和细菌自身繁 殖速度的比较.高血糖条件下,细菌繁殖速度加快,从 而抑制了抗菌素宏观杀(抑)菌效果导致MIC升高. 将人不同血糖和血脂的血浆或血液代替M—H培养基, 测定不同菌株MIC,是不同个体感染同株细菌药敏结 果个体化临床意义的重要研究内容,值得进一步研究. 参考文献: [1]虞文魁,李维勤,李宁,等.急性高血糖对感染患者激素和细胞因 子的影响[J].中华急诊医学杂志,2005,14(2):132?135. [2]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].第2 版.南京:东南大学出版社,1997.566. [3]李茂星,谢景文,葛欣,等.应用环丙沙星乳剂治疗烫伤大鼠铜绿 假单胞菌感染[J].中国抗生素杂志,1999,24(1):65. [4]郭振荣,盛志勇.防治烧伤感染,提高烧伤救治水平[J].中华外科杂 志,1999,37(5):162. [5]AmandaM,LairdMD,PrestonR,eta1.Relationshipofearlyhyperglyce- miatomortalityintraumapatients[J].JTrauma,2OO4,56(5):1058- 1065. [6]陈新谦,金有豫.新编药物学[M].第14版.北京:人民卫生出版社, 2002.41. 收稿日期:20084)6-11 作者简介:潘小清(1966-),男,江西吉安人,本科,主管技师,主要 从事临床检验诊断学.