蛤蚧定喘胶囊药效学及毒理学研究

蛤蚧定喘胶囊药效学及毒理学研究 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第4期2003年4月?343? 蛤蚧定喘胶囊药效学及毒理学研究 邹节明,潘佐静 (1.桂林三金药业股份有限公司药物研究所.广西桂林 ,李美珠,李爱华 541004;2.广东省药物研究所药理室,广东广州510180) 摘要:目的探讨蛤蚧定喘胶囊的药理作用.方法观察平喘,祛痰,止咳,抗炎,免疫,抑菌,抗过敏, 急性及长期 毒性作用.结果蛤蚧定喘胶囊可对抗豚鼠离体气管的痉挛.延长豚鼠哮喘潜伏期,增加大鼠气 管痰液分泌量,促 进家鸽气管纤毛运动,延长小鼠咳嗽潜伏期,抑制小鼠耳肿胀和大鼠肉芽肿增生,促进小鼠溶 血素生成和淋巴细胞 转化率.降低豚鼠过敏反应指数和休克死亡率,具有抑菌作用.最大耐受量为临床日用量的 500倍,长期毒性试验 未见明显毒性反应.结论蛤蚧定喘胶囊具有平喘,祛痰,止咳,抗炎,免疫,抑菌和抗过敏等作用, 无毒副作用. 关键词:蛤蚧定喘胶囊;平喘止咳;祛痰 中圈分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:0253—2670(2003)04—0343一O4 StudyonpharmacodynamicsandtoxicologyofGejieDingchuanCapsule ZOUJie—ming,PANZuo—jing,LIMei—zhu,LIAi—hua (1.InstituteofPharmaceuticalResearch.GuilinSanjinPharmaceuticalCo.,Ltd.,Guilin541004,China: 2.DepartmentofPharmacology.GuangdongInstituteofMateriaMedica,Guangzhou510180.China) Abstract:ObjectToinquireintotheeffectonpharmacologyofGejieDingchuanCapsule(GJDCC). MethodsTheobservationofrelievingcoughandasthma,removingphlegm,immunity,antibiosisandan— tiinflammation,antianaphylaxis,andacuteandlong—termtoxicitywascarriedout.ResultsGJDCCco uld resisttheconvulsionoftheisolatedtracheaofguineapigs,lengthentheasthmaincubationperiodofguinea pigs,increasethephlegmlinuidsecretingcapacityofisolatedrattrachea,promotethepigeontracheacili— ummotion,lengthenthemicecoughincubationperiod,restrainthemiceearswellingandratswellinghy— perplasiaofgranulation,promotethemiceproducingofserumhemolysinandthelymphocyteconversion rate,andreducetheguineapigallergicreactionindexandshockdeathrate.Itpossessedthebacteriosta— sis,thebiggestcapacityofbearingconsumptionwas500timestheclinicaldailyuseandinlong—termtox ic— itytesttherewerenotthecleartoxicityreactions.ConclusionGJDCChasthefunctionofrelievingasth— mflandcough,removingphlegm,antibiosisandantiinflammation,antianaphylaxisandimmunity,with out poisonoussideeffect. Keywords:GejieDingchuanCapsule(GJDCC);relievingcoughandasthma;removingphlegm 蛤蚧定喘胶囊是三金集团桂林中药制药厂在传 统产品蛤蚧定喘丸的基础上经过剂型改革而研制的 新制剂,由蛤蚧,鳖甲,紫苑等中药组成.具有滋阴清 肺化痰,平喘止咳等功效,临床用于治疗肺肾两虚, 痰热咳嗽气喘具有良好的疗效.本实验对蛤蚧定喘 胶囊的药效学及毒理作用进行了研究. 1实验材料 1.1药物:蛤蚧定喘胶囊由三金集团桂林中药制药 厂生产,批号961206;蛤蚧定喘丸由桂林三金药业 集团公司提供,批号961201. 1.2动物:NIH小鼠,体重(20?2)g,购自广东省 医用实验动物场,动物质量合格证号:95A51.SD 大鼠,体重(180?2O)g;封闭群豚鼠,体重(180? 20)g,购自第一军医大学实验动物中心,质量合格 证书号:粤检证字P6A20和P6A27.家鸽.体重 (350~20)g,购自农贸市场.动物饲养温度和相对 湿度分别为23_C,27C和50%,70. 2方法与结果 2.1平喘作用 2.1.1对豚鼠离体气管影响:体重200,250g豚 鼠,击头致昏,常规分离气管.按文献[1方法制备离体 气管螺旋条,将标本置入37C,持续通纯O的50 作者简介:邹节明9..43--),.男,湖南常德人,博士生导师,现任桂林三金药业股份有限公司董事 长,总师,中国药典委员会委员,中国中孳萱理勇中医药工作专家咨询委员会委员 ,《中草药》杂志副主任编委,中国中药协会副会长,北京中医药大学及武汉 大生命学院客座教攫,长期从事中药制剂创新研究与产业化开发,设计与主持研发桂林西瓜 霜,脑脉泰胶囊等中药薪药 36种.发表学术论文51篇,专着3部.. ?344?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第4期2003年4月 mL改良Krebs生理溶液槽里,以SY一?型二导生 理记录仪描记张力曲线.待标本稳定约30min后加 入磷酸组胺(使浴槽内浓度为1.67x10g/mL), 当张力曲线达最高时,加入药液,对照组加等体积 NS,记录给药3min内张力曲线下降幅度(差值), 用t检验(下同)比较组间差异显着性,结果见表1. 2.1.2对豚鼠药物性哮喘的影响:取体重(180土 20)g豚鼠,用0.4磷酸组胺和2%乙酰胆碱1: 1混合液1mL/只,50kPa恒压喷雾,挑选2min内 出现?级哮喘反应(呼吸困难抽搐跌倒)的合格动 物50只,随机分为5组,每组10只.第2天ig给 药,1h后按上法再次喷雾致喘,比较给药前后哮喘 潜伏期差异,结果见表2. 表1蛤蚧定喘胶囊对豚鼠离体气管的影响(?,n一10) Table1EffectofGJDCCOnisolatedtrachea inguineapigs(?,n一10) 与对照组比较:一P<O.O1 .P<O.O1wcontrolgroup 表2蛤蚧定喘胶囊对豚鼠药物性哮喘的影响(?,n=10) Table2EffectofGJDCCOndrug-induced asthmainguineapigs(?,n一10) 与对照组比较:一P<O.01 一P<O.01scontrolgroup 表1和2结果表明,3个剂量的蛤蚧定喘胶囊 均能显着对抗组胺引起离体气管的痉挛作用,并明 显延长药物性哮喘潜伏期,与对照组比较差异均有 非常显着意义(P<0.O1),提示该药有显着的平喘 作用. 2.2祛痰作用 2.2.1对大鼠气管排痰量影响(毛细玻管引流 法):体重(180~20)g大鼠50只,雌雄各半,随机 分为5组,每组10只,ig给药后乌拉坦1g/kgip 麻醉,在甲状软骨下气管正中插入一根内径约0.8 mm,长8cm毛细玻管使之刚好接触气管底部,记录 2h内平均每小时玻管内痰液上升高度,结果见表3. 表3蛤蚧定喘胶囊对大鼠气管排痰量的影响(;?,n一10) Table3EffectofGJDCCOilphlegmoutputting capacityoftracheainrats(?s.n一10) 与对照组比较:P<O.05一P<0.01 P<O.05一P<0.O1t,controlgroup 2.2.2对家鸽气管纤毛运动的影响:体重(35O土 20)g家鸽50只,雌雄兼用,随机分为5组,每组10 只.ig给药1h后,将鸽颈部拉呈水平位,常规分离 气管,由近心端气管内壁下注中华墨汁约0.02mL, 观察墨汁1min向前运行的距离,结果见表4. 表4蛤蚧定喘胶囊对家鸽气管纤毛运动 的影响(?,n一10) Table4EffectofGJDCConciliarymotion oftracheainpigeons(?.,l=10) 与对照组比较:P<O.05一P<O.01 P<O.05P<O.O1735controlgroup 如表3和4所示,3个剂量的蛤蚧定喘胶囊均 能不同程度地增加大鼠气管排痰量,加速鸽子气管 纤毛的运动,与对照组比较差异均有显着意义(P< 0.05,0.O1). 2.3镇咳作用:取小鼠100只,体重(19?1)g,雌 雄各半,随机分为5组,每组20只,ig给药1h后, 10氨水1mE/只,50kPa恒压喷雾30S,记录咳 嗽潜伏期,结果见表5.3个剂量的蛤蚧定喘胶囊均 有镇咳作用,与对照组比较差异均有显着意义(P< 0.05,0.01). 2.4免疫作用 2.4.1对小鼠溶血素生成的影响:体重(19?1)g 小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只. 每天ig给药1次,连续给药10d,给药第3天每只 ip5鸡红细胞0.2mL致敏,7d后断头取血,按 文献[1]方法测定血清溶血素吸光度(A)值,计算 半数溶血值(HC.),结果见表6. 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第4期2003年4月’345. 裹5蛤蚧定喘胶囊对小鼠实验性咳嗽 的影响(士s.n=20) Table5EffectofGJDCConexperimental coughinmice(士s.n=20) 与对照组比较:’P<O.05一P<O.Ol P<O.05’P<O.Olscontrolgroup 裹6蛤蚧定喘胶囊对小鼠血清溶血素生成 的影响(士s.H一10) Table6EffectofGJDCConformationofserum hemolysininmice(?s.n一10) 与对照组比较:一P<O.01 ‘P<O.Ol7d$controlgroup 2.4.2对体内淋巴细胞转化功能影响:小鼠6O 只,体重(19土1)g,雌雄各半,随机分为5组,每组 12只.每天ig给药1次,连续给药10d,给药第6 天按文献[3]im植物血凝素(PHA)6mg/kg,每日1 次,连续3次,第l1天剪尾取血推片,用瑞氏一吉姆 萨染色,油镜下计数200个淋巴细胞转化率,结果 见表7. 裹7蛤蚧定喘胶囊对小鼠淋巴细胞 转化率的影响(士s,n一12) Table7EffectofGJDCConlymphocyteconversion rateinmice(?s,H一12) 与对照组比较:P<O.05一P<O.01 P<O.05P<O.Olscontrolgroup 如表6和7所见,蛤蚧定喘胶囊3个剂量组均 能明显增加小鼠血清溶血素生成量,提高体内淋巴 细胞转化率,与对照组比较差异均有显着意义(P< 0.05,0.O1),提示该药对体液免疫和细胞免疫均有 增强作用. 2.5抗过敏作用:按照卵蛋白气雾吸入引喘法选 取体重(180?20)g豚鼠5O只,雌雄兼用,随机分 为5组,每组10只.每只豚鼠大腿外侧im4%卵 蛋白生理盐水,并同时ip49/6氢氧化铝凝胶各0.2 mL致敏.第二天开始ig给药,每天1次,连续14 d.末次给药1h后,50A卵蛋白生理盐水1mE/只, 50kPa恒压喷雾30S,观察记录60min内动物过 敏反应指数(过敏反应指数参照文献[5]的评定方法, 即0:无任何反应;1:萎糜,躁动不安或搔痒;2:呼吸 加快或促迫;3:呼吸困难,喘息或口唇紫绀;4:振颤, 抽搐;5:休克死亡),结果见表8.用药各组均能不同 程度地降低过敏反应指数和死亡率,与对照组比较, 大中剂量组差异均有显着意义(P<0.05),提示蛤 蚧定喘胶囊对豚鼠过敏性支气管痉挛和过敏性休克 死亡有一定的保护作用. 表8蛤蚧定喘胶囊对豚鼠过敏性支气管 痉挛的影响(?.H一10) Table8EffectofGJDCConanaphylacticbronchospasm inguineapigs(?s?H一10) 与对照组比较:’P<O.05 ‘ P<O.05scontrolgroup 2.6抗炎作用 2.6.1对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响:小鼠50 只,体重(19?1)g,雌雄各半,随机分为5组,每组 10只.ig给药30min后,于左耳滴二甲苯0.05mL 致炎,30min后脱颈椎处死动物,用直径7mm打 孑L器取左右耳片称重,以两耳片重量差值为炎症肿 胀度,结果见表9. 2.6.2对大鼠皮下棉球肉芽肿的影响:体重 (180?20)g雄性大鼠50只,随机分为5组,每组 10只.1戊巴比妥钠ip麻醉30mg/kg,由腹股沟 皮下植入20mg的无菌棉球,术后4h开始ig给 药,每天1次,连续7d.第8天断颈处死动物,剥离 皮下棉球肉芽肿置6OC烘箱干燥12h,称干重,减 去棉球重量则为肉芽肿重量,结果见表10. 表9和10结果显示,3个剂量组的蛤蚧定喘胶 囊均能明显抑制小鼠耳廓炎症肿胀度和大鼠皮下肉 O.05一P<0.01 P<0.05P<0.01t,NScontrolgroup 裹lO蛤蚧定喘胶囊对大鼠皮下棉球 肉芽肿的影响(土s.H=10) Table10EffectofGJDCConsubcutaneouscotton ballgranulomainrats(士.H—10) 与对照组比较:,P<O.Ol .P<0.01tcontrolgroup 2.7体外抑菌作用:选用金黄色葡萄球菌,乙型溶 血性链球菌,肺炎球菌,卡他球菌和白喉杆菌(菌种 均来自北京生物制品研究所)共5种呼吸道感染常 见的病原菌和条件致病菌进行试验.按照液体试管 法将1g/mL的蛤蚧定喘胶囊和蛤蚧定喘丸药液分 别用肉汤从1:5开始作两倍稀释至1:640,每管 总量1mL,受试药液所含的生药量依次为0.20, 0.10……0.0015g8个浓度,流通蒸汽灭菌.供链球 菌试验用则在灭菌药液中另加1葡萄糖0.1mL (6,8h培养物),37C培养18h,观察实验结果, 并判定最小抑菌浓度(M1C).结果见表l1. , 裹ll蛤蚧定啮胶囊体外抑菌试验结果 Table11EffectofGJDCConbacteriostatictestinvitro . MIC/(g?mL一) 药物 金黄色葡萄球菌乙垂溶血性链球菌肺炎球菌卡他球菌白喉杆菌 蛤蚧定喘胶羹0.O1250.050.100.200.05 笪堕室曼垄::::: 结果显示蛤蚧定喘胶囊和蛤蚧定喘丸对所试菌 种均有不同程度的抑菌作用,其中胶囊对金黄色葡 萄球菌和乙型链球菌的作用明显强于丸剂,对其余 3种菌种两种剂型的抑菌作用相当. 2.8急性毒性试验:取NIH小鼠2O只,体重2O g,雌雄各半,禁食12h后,各鼠按0.5mL/lOg体 重ig给药,9h后重复给药1次.观察给药后7d内 小鼠的外观,行为,食量,排泄,死亡等情况.结果给 药后动物外观,行为,食量,排泄均未见异常,全部存 活,第7天体重增长(6.4?1.5)g,增重率为 33.5.求得小鼠最大耐受量为25g/kg,相当于临 床用量的500倍. 2.9长期毒性试验:取Wistar普通级大鼠8O只, 雌雄各半,体重(120?20)g,按原药材15.7,7.85, 3.93g/kg(分别为临床拟用日剂量的100,50,25 倍)的剂量分别给大鼠连续ig蛤蚧定喘胶囊,对照 组给自来水,连续12周,观察大鼠的外观,行为,食 量,排泄,死亡等情况;采血作血液学,血液生化学检 查;剖取心,肝,脾,肺,肾,子宫,睾丸称重,计算脏器 系数,取主要脏器作肉眼观察及组织学检查.结果表 明,大鼠连续ig12周,未见明显的毒性反应,停药 观察2周亦未见明显的延缓毒性反应. 3讨论 蛤蚧定喘胶囊能对抗组胺所致离体气管的痉 挛,延长豚鼠对组胺和乙酰胆碱混合液诱发的哮喘 反应潜伏期,增加大鼠气管痰液排出量,促进家鸽气 管的纤毛运动,抑制二甲苯所致小鼠耳廓炎症肿胀 度和大鼠皮下肉芽肿的增长,促进小鼠体内溶血素 生成和淋巴细胞转化率,降低卵蛋白诱发豚鼠过敏 反应指数和死亡率,表明该药具有显着的平喘,祛 痰,止咳,抗炎,免疫作用,对豚鼠过敏性支气管痉挛 和过敏性休克死亡具有一定的保护作用,其作用随 剂量的增加而加强.体外抑菌试验证明,蛤蚧定喘胶 囊对金黄色葡萄球菌,乙型溶血性链球菌,肺炎球 菌,卡他球菌和白喉杆菌均有不同程度的抑菌作用, 其中对金黄色葡萄球菌的作用最强.同等剂量的蛤 蚧定喘胶囊和蛤蚧定喘丸的作用比较说明两种剂型 的药效学作用基本一致,但胶囊剂对金黄色葡萄球 菌和乙型链球菌的作用明显强于丸剂. 急性毒性及长期毒性试验表明,蛤蚧定喘胶囊 按拟用日剂量及疗程在临床应用是安全的. 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