青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫的毒力测定

青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫的毒力测定 青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫的毒 力测定 安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(8):2309—2310责任编辑姜丽责任 校对左佳 青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫的毒力测定 张建民,杨玉敏(1.长江大学农学院,湖北荆州434o25;2.西华师范大学生命科学学 院,四川南充637002) 摘要采用虫体捣碎浸提法,用乙醇,氯仿,丙酮,水4种溶剂浸提青翅蚁形隐翅虫成 虫毒素,浸提效果为:氯仿浸提率>乙醇浸提率> 丙酮浸提率>水浸提率.采用叶片夹毒法测得乙醇,丙酮,氯仿,水4种溶剂毒素浸 提物的,D依次为:0.3ll7.0.0090,0.4213,0.4751 t~g/g.乙醇,氯仿,丙酮,水4种溶剂浸提物对3~4龄的菜青虫非选择性拒食率24h 时依次为88.38%,79.07%,89.60%,69.77%:48h时 依次为85.25%,72.27%,83.85%,4_4-21%. 关键词青翅蚁形隐翅虫;毒素提取;菜青虫;毒力测定 中图分类号$48230文献标识码A文章编号0517—6611(2007)08—02309—02 ToxicityDeterminationofToxicExtractionfromLarvaeofPaederusfuscipesCurtisagainstPierisrapae ZHANGJian-minetal(CollegeofAgronomy,YangtzeUniversity,Jingzhou.Hubei434025) AbstractToxicitydeterminationsoftoxicextractsfromPoeder"s,ce5CurtisagainstP/erapoewerestudiedusingfourdifferentsolvents (ethanol,acetone,chlorofoi'mandwater).Theresultshowedthatthetoxicextractionemcacyoffourdifferentsolventswerechlorofom>ethanol> acetone>water.LD50ofthefoursolventstoxicextractionswere0.2745ug/gethanol,0.0078ug/gacetone,0.42107ug/gchlorofoi'mand0.44242 ug/gwater.A1lthesolventshadveryodanti-feedingeffect,therateofwhichwere88.38%,79.07%,89.60%and69.77%after24h,85.25%, 72.27%,83.85%and44.21%after48h.respectively. KeywordsPoeder"s,ce5Curtis;Toxicextraction;P/er/srapoe;Toxicitydetermination 毒隐翅虫为鞘翅目(Coleoptera)隐翅虫科(Staphylinidae) 隐翅虫属(Paederus)昆虫,无论成虫(除翅以外)幼虫,蛹体 内均有毒素存在,且其毒素源于血淋巴,存在于虫体体液和 生殖器内【】I.毒隐翅虫毒素的应用主要在医药上,有资料介 绍其毒素可以作抗菌素,杀虫剂,但是还没有关于其毒素的 毒力测定及利用毒素开发新农药的报道.为此,笔者以我 国常见的青翅蚁形隐翅虫(P且ederusfuscipesCurtis)为试验 材料,进行了其毒素粗提物对菜青虫(忍廊rapaeLinaeus) 的毒力测定试验.现报告如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1供试虫源.青翅蚁形隐翅虫成虫,采集地为长江大学 西校区试验地,采集方法为人工捕捉或灯光诱集,试验时要 求虫体大小一致;菜青虫,采集地为长江大学西校区试验地 甘蓝田,人工采集1,2龄的幼虫及卵,在室内用新鲜的,未 施药甘蓝叶片饲养,待发育至3,4龄时挑选大小一致,活动 能力强的健壮的虫体作为试虫. 1.1.2仪器.1702一MP8型电子天平,由德国Samorius GmbhGottingen公司生产;5微量进样器,由上海注射器 三厂生产;800型离心沉淀器,由上海手术器械厂生产;培 养皿,直径为9cm. 1.1.3试剂.乙醇(分析纯),由安徽特酒总厂生产;丙酮(分 析纯),由武汉市江北化学试剂有限责任公司生产;氯仿(分 析纯),由天津市博迪化工有限公司生产;蒸馏水. 1.2方法 1.2.1毒素提取.先将采集的一定数量的,大小一致的活青 翅蚁形隐翅虫虫体研磨捣碎,再分别用一定体积的乙醇,丙 酮,氯仿,水4种溶剂冲洗干净,在0?条件下浸泡72h后, 以3000r/min离心15min,取上清液备用.同时计算提取率 基金项目湖北省教育厅资助项目(2002X22);长江大学科研发展基 金(HNZDi200304). 作者简介张建民(1974一),男,陕西周至人,硕士,讲师,从事昆虫学方 面的研究与教学工作. 收稿日期2Oo6—125 及每头虫平均提毒量. 浸提液重=离心后清液质量一清洗溶剂的质量 浸提靴)=xl00 平均提取物质重(%)=雩菩xl00 1.2.2胃毒毒力测定.胃毒毒力测定采用叶片夹毒法.首 先,挑选健壮,大小一致的3,4龄的菜青虫,让其停止取食 4,5h.用直径为2cm的打孔器打叶碟若干.将不同溶剂的 粗提液配置到合适的浓度.将配好的溶液用5l的微量进 样器吸取5l均匀涂在直径为2cm的新鲜甘蓝圆叶片上, 自然晾干.另取一片无药的甘蓝圆叶片涂上糨糊与已涂药 的甘蓝圆叶片的那一面对合,制成夹毒叶片.把已饥饿了 4,5h后的菜青虫称重,编号,然后用夹毒叶饲养.饲养时,1 个培养皿放1头菜青虫,1片夹毒叶片和1张湿滤纸.每一 种溶剂粗提液选择一个适当浓度,在此浓度下设置40个处 理,其中10个对照处理,30个药剂处理,对照依不同的溶 剂相应而定.让其取食24h的夹毒的叶片后,换上新鲜的 无毒的甘蓝圆叶片,每头菜青虫放3片.24,48,72h分别统 计死亡虫数,食叶面积,虫重,计算24h的食药量,24,48h 非选择拒食率.根据单位体重的受药量由小至大的顺序排 列,取食量较小时,试虫无死亡;取食量加大,死活均有出 现;再加大取食量,试虫全部死亡.根据这个情况分成3组: ?生存组;?生死组(中间组);?死亡组.然后依据中间组 的数据求LD~31,非选择拒食率所得数据利用SAS软件进行 显着性分析. 每头融的相药量() 药浓度(g/1)×5×所食叶面积(mm) 画韵溧青五甄 非选择性拒食率(%) 对照取食面积(mm2)一处理取食面积(mm2) 一对照取面积(mm) 致死中浓度加g)= 式中:A为中间组活虫的每项单位体重药量累加除以总活 安徽农业科学2007.年 虫数;B为中间组死亡的每项死虫单位体重的药量累加除 以总死虫数. 2结果与分析 2.1不同溶剂对青翅蚁形隐翅虫毒素的浸提效果青翅 蚁形隐翅虫毒素用乙醇,氯仿,丙酮,水4种溶剂浸提,不同 的溶剂浸提相同数量的活隐翅虫浸提出来的毒素粗提物不 同,即浸提效果存在差异.由1可知:用乙醇,丙酮,氯仿, 水分别浸提200头青翅蚁形隐翅虫成虫,浸提率依次为氯 仿浸提率>乙醇浸提率>丙酮浸提率>水浸提率.从每头虫平 均提取毒素来看,最高的氯仿平均提取重可达到2.17g,头, 最低的水平均提取重只有0.127g/头,最高和最低的比率 为17:1.可见,毒素在水中的溶解是很低的,几乎可以认为 不溶于水. 表1不同溶剂对青翅蚁形隐翅虫毒素的浸提效果 注:虫数均为200头. 2.2不同溶剂的青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫的 毒力测定不同溶剂的青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青 虫的毒力测定结果见表2.由表2可知:乙醇,丙酮,氯仿,水的 毒素浸提物的LD50依次为:o3117,0.0090,0.4213,0.4751. 表2不同溶剂的青翅蚁形隐翅虫对菜青虫的毒力测定 2.3不同溶剂毒素粗提物对菜青虫胃毒拒食率的影响 (表3)由表3可知,乙醇浸提物和氯仿浸提物24,48h的 拒食率在0.05水平上无差异,但二者与丙酮浸提物,水浸 提物均在0.05水平上有差异,其中乙醇浸提物24,48h的 拒食率分别为88.38%,85.25%.氯仿浸提物24,48h拒食 率分别为89.60%,83.85%.丙酮浸提物与水浸提物24,48 h拒食率在0.05水平上有差异,其中丙酮浸提物24,48h拒 食率分别为79.07%,7227%;水浸提物24,48h的拒食率分别 为69.77%,44.21%.此外,对于同一种浸提液来说,其对3,4 龄的菜青虫的胃毒拒食作用24,48h的拒食效果均较好,但 对水浸提液来说24h明显比48h效果好. 3结论与讨论 利用乙醇,氯仿,丙酮,水4种溶剂均能获得青翅蚁形 隐翅虫毒素的粗提物.就提取率而言,氯仿>乙醇>丙酮>水, 但由于虫体间大小和体液中毒素存在差异,加之在计算毒 素提取率时所采用的方法比较粗略,故提取率只能大体反 表3不同溶剂毒素粗提物对菜青虫的拒食率的影响 映各种溶剂的浸提效果.各种溶剂浸提液胃毒效果较好,毒 力都较强,乙醇,丙酮,氯仿,水的LD50分别为03117,0.0090, 0.4213,0.4751Ixg/g,除水外,处理24,48h拒食效果均较明 显.此外,3,4龄的菜青虫在取食药片后,取食明显减少,虫 体排泄物减少,虫重增加缓慢. 参考文献 [1】张锡林,邓伟.泸州市毒隐翅虫和隐翅虫皮炎的研究[J】.泸州医学院 ,1995,18(4):262—264. [2】郑发科.毒隐翅虫概论[M】成都:四川大学出版社,1989:45—54. [3】黄章欣.植物化学保护实验指M].北京:农业出版社,1990:42. (上接第2308页) 从产卵数量看,豫林K-38号的卵量显着比中林46杨, 107杨,69杨上卵量要少,分别为中林46杨,107杨,69杨 的9%,28%和14%,为69杨,中林46杨,107杨总平均的 14%. 3结论与讨论 ?从野外调查结果看,光肩星天牛对豫林K-38号杨危 害程度很小,在自然状态下表现出很强的抗性.?从人工接 种试验的结果看,豫林K-38号杨在人工胁迫条件下对光肩 星天牛也具有较强的抗性.光肩星天牛豫林K-38号和对照 的树皮啃食量,啃食后早期死亡率,产卵量等方面差别明 显.豫林K-38号无性系被光肩星天牛啃食的树皮量最少, 啃食后早期天牛死亡率比69杨,中林46杨,107杨都要高, 产卵数量也比它们要少得多.?自然感虫调查和人工接种 试验两方面的调查结果表明,豫林K-38号杨对光肩星天牛 具有较强的抗性,是一个抗虫性状优良的无性系,在生产中 具有推广价值. 参考文献 …1王明庥,黄敏仁黑杨派无性系研究I.生长的适应性和遗传稳定性【J]. 南京林业大学,1987(4):1-14. [2】王明庥.黑杨派五个现代无性系的比较研究[J】.南京林产工业学院 ,1980(1):l一10. [3】胡建军,韩一凡,尹伟伦.在人工接种和自然感虫情况下美洲黑杨后 代对桑天牛抗性的研究『J1.林业科学,2002(1):164-167. [4】胡建军,赵自成,苗世龙,等.杨树人工接虫方法的研究林业科学 研究,1998,11(6):574—580. [5】王臻柱,张青文,杨奇华,等.植物抗虫性的化学物质基础?.植物保 护,1993(6):39—41. [6】周明群.作物抗虫性原理及应用[M1.北京:北京农业大学出版社, 1992. [7】叶根法,宋文君,张荣锋.美洲黑杨与意杨对天牛,黄刺蛾抗性调查[J】. 森林病虫通讯,2000,19(6):38—39.