HPLC在测定血浆同型半胱氨酸含量中的应用
HPLC在测定血浆同型半胱氨酸含量中的应用
作者:
吴健翎 沈建昕 白雪梅【摘要】 目的:
探讨高效液相色谱法(HPLC)在测定血浆同型半胱氨酸含量中的应用。方法:
血浆同型半胱氨酸用邻苯二甲醛(OPA)衍生,经Hypersil AA ODS色谱柱(2.1mm×200mm,5μm),用0.02 mol?L-1NaAc?乙腈?四氢呋喃=56?43.8?0.2的流动相洗脱,柱温40?,检测波长330nm,流速
1.3mL?min-1。结果:
线性范围为0.48,3
1.25μg?mL-1,回归方程为A=27.167C+38.765,r=0.9962;平均回收率为98.61%,RSD=
1.84(n=6),日内及日间相对标准偏差均小于5%。结论:
该法准确、简便、快捷,适用于大多数实验室。
【关键词】 同型半胱氨酸; 高效液相色谱法 【ABSTRACT】 Objective: To set up the method for determining the content of Homocysteinein Human Plasma with HPLC. Methods: Column was Hypersil AA ODS(2.1mm×200mm,5μm),using 0.02mol?L 1Sodium acetate Acetonitrile Tetrahydrofuran(56?43.8?0.2) Balanced Solution as mobile phase and detective wavelength at 330nm,the fiowing speed was
1.3ml?min-1,and Column temperature was 40?.Results: The calibration curve was linear in the range of 0.48 , 3
1.25μg?mL-1 and ,The linear correlation equation was A=27.167+38.765(r=0.9962)The average recovery rate was 98.61%,and RSD was Between
1.84%(n=6). The standard relative difference within a day and between two days was lower than 5%. Conclusion: The method is simpl
e、accurate,and fast,which is suitable for the most lab test. 【KEY
S】 Homocysteinein;HPLC 同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是一种含硫氨基酸,是蛋氨酸循环中S 腺苷基高半胱氨酸水解酶水解反应的产物。研究
明, 血中 Hcy 升高可致流产、新生儿缺陷、中风、老年性痴呆及其它老年性疾病如骨质疏松等,维生素B12及叶酸缺乏、心脑血管疾病等都可反映出血浆Hcy浓度异常变化[1]。血浆中Hcy测定已成为国外诊断维生素B12及叶酸缺乏、早期心脑血管疾病监控疗效的常规方法。
同型半胱氨酸的测定常用放射免疫法、荧光偏振免疫
法及HPLC法等[4,6]。本研究在参考有关文献的基础上,对色谱条件进行了适当的改进,使测定更加简便、快速,应用于实际样品测定,效果良好。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 HP1100高效液相色谱仪(包括在线脱气机、四元泵、柱温箱、荧光检测器、化学工作站),分析天平(A/D,1/10万,日本)。
1.2 试剂 衍生剂:50mg邻苯二甲醛(OPA)溶于4.5mL甲醇中,再加入0.25mol?L-1硼酸缓冲溶液(pH=8.4)0.5mL,巯基乙醇50μL,避光保存。1 g?L-1Hcy标准储备液:1mg Hcy溶于1mL 0.045mol?L-1HCl溶液中。Hcy标准品、邻苯二甲醛(Sigma公司),甲醇、乙腈(色谱纯,天津科密欧化学试剂开发中心),巯基乙醇、冰乙酸、乙酸钠、四氢呋喃均为分析纯试剂。三蒸水为本实验室自制。
2 实验方法 2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil AA ODS(2.1mm×200mm,5μm),流动相:
0.02mol?L-1NaAc(pH=7.20)?乙腈?四氢呋喃=56?43.8?0.2,柱温:
40?,流速为
1.3mL/min,检测波长330nm,进样量:
20μL。