血清总胆红素

血清总胆红素 血清总胆红素(T-BIL)测定SOP 1.方法:改良的重氮法。 2.实验原理: 血清中的胆红素分为直接(结合)胆红素和间接(未结合)胆红素。大多数方法是在1883 1年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。 申能总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐(DCA)，与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。 胆红素+DCA 表面活性剂 红色偶氮化合物 3.标本: 3.1病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 3.2类型:血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。 4.标本存放:15,25?保存可稳定2天;2,8?保存可稳定7天;-20?保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融～。 5.标本运输:常温条件下避光保存运输。 6.标本拒收标准:标本溶血、细菌污染、脂血。 7.实验材料 7.1试剂:申能总胆红素试剂盒(141 0817170 1 试剂1，试剂2) 7.1.1试剂组成 试剂1:6×64 ml 磷酸缓冲液 40mmol/L 氯化钠 9g/L 表面活性剂,稳定剂 适量 试剂2:6×16 ml 2,4-二氯苯胺重氮盐 1mmol/L 30mmol/L 盐酸 表面活性剂 适量 7.1.2试剂准备:试剂为即用式。 7.1.3试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2,8?，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。 7.1.4变质指示:当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 7.1.5注意事项:此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定;警告～腐蚀剂～不要入口;避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。 7.2校准品:校准自动分析仪，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7.3质控品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 日本东芝TBA-120FR生化分析仪 8.仪器: 9.操作步骤 9.1项目基本参数:标本:5μL，试剂:R1-160μL，R2-40μL 校准方式:线性，测定模式: 终点上升法，读点时间:31-33，主波长:548nm，副波长:700nm。 9.2仪器操作步骤:参见生化检验日本东芝TBA-120FR生化分析仪操作规程.SOP文件。 10.质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控.质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11.计算方法:在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算,以μmol/L报告。 12.参考值范围: 婴儿:出生24小时内 ,150μmol/L 出生第2天 22-193μmol/L 出生第3天 12-217μmol/L 出生第4,6天 1.7-216μmol/L 儿童:,1个月 3.4-17μmol/L 成年人: 1.7-22μmol/L 13.临床意义:胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。 溶血(肝前黄疸)、实质的肝损伤(肝性黄疸)和胆管堵塞(肝后黄疸)都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60,70%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。 14.操作性能 14.1线性范围:1.2,513μmol/L 14.2精密度:批内精密度小于3%或SD?0.07，总精密度小于5%或SD?0.10。 14.3灵敏度:本试剂的检测限为1.2μmol/L。 14.4病人结果可报告范围:1.2,513μmol/L。 15.超出范围结果处理:本法线性上限为513μmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9,氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。 16.病危报警值的处理 当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 17.方法局限性 17.1本法线性上限为513μmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9,氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。 17.2干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度?1704μmol/L，血红蛋白浓度?5.00g/L，甘油三酯浓度?22.6mmol/L时没有观察到干扰。 18.补救措施:当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。 19.参考文献 19.1中华人民共和国卫生部医政司编<全国临床检验操作规程>(第三版)2006,P451-454。 19.2申能总胆红素试剂盒说明书。 20.其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。